一株同時與痢疾志賀菌和侵襲性大腸埃希菌血清凝集的類志賀鄰單胞菌

鄒紅敏

（四川省資中縣疾病預防控制中心，四川 資中 641200）

資中縣一酒樓曾發生一起食物中毒，我們從該酒樓2份食物留樣、6份患者直腸拭子中分離出一株類志賀鄰單胞菌。該菌不僅與痢疾志賀菌和侵襲性大腸埃希菌有著共同抗原，與兩菌診斷血清發生交叉凝集，還與志賀菌有著極為相似的生化反應。

1 流行病學概況

1.1 基本情況

資中縣某酒樓同餐進食460余人，有209人先后出現腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐等消化道癥狀，腹痛以上腹部和臍周持續性、陣發性絞痛為主，腹瀉多為黃綠色水樣便，少數有血便，無明顯里急后重癥狀。血常規結果：白細胞總數增高者占57.7%（45/78），中性粒細胞增高者占46.2%（36/78）。大便常規結果：白細胞“+”6例，有紅細胞異常5例，大便隱血試驗陽性2例，發現吞噬細胞2例。

1.2 流調醫生開具的檢驗項目

志賀菌、沙門菌、致瀉性大腸埃希菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌、霍亂弧菌。

2 實驗室檢驗

2.1 樣品采集

采集食物留樣12份，嘔吐物2份，患者直腸拭子12份，從業人員直腸拭子5份。

2.2 檢驗項目與方法

志賀菌、沙門菌、致瀉性大腸埃希菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌、霍亂弧菌。按GB/T 4789-2003《食品衛生微生物學檢驗》[1]、《霍亂防治手冊》（第五版）[2]和GB 14938-94《食物中毒診斷標準及技術處理總則》[3]進行檢驗和判斷。

2.3 樣品處理及分離鑒定

2.3.1 直腸拭子直接劃線接種于SS、Mac、4號瓊脂平板、堿性瓊脂平板、血平板及氯化鈉結晶紫平板，37℃孵育24h。

2.3.2 所有樣品都經GN、MM、3.5%氯化鈉結晶紫、7.5%氯化鈉肉湯、堿性胨水增菌后，劃線接種于SS、Mac、4號瓊脂平板、堿性瓊脂平板、血平板及氯化鈉結晶紫平板，37℃孵育24h。

2.3.3 挑取SS、Mac平板上扁平、無色、透明或半透明、光滑、細小的可疑菌落，接種三糖鐵斜面和3.5%氯化鈉三糖鐵斜面。

2.3.4 挑取 4號瓊脂平板、堿性瓊脂平板上扁平、無色、半透明、光滑的可疑菌落，與O1、O139群霍亂診斷學清不凝集。

2.3.5 挑取氯化鈉結晶紫平板扁平、無色、透明的可疑菌落，接種3.5%氯化鈉三糖鐵斜面。

2.3.6 挑取血平板上溶血、無色、扁平、細小的可疑菌落進行革蘭染色，為革蘭陰性桿菌，兩端鈍園。接種三糖鐵斜面和3.5%氯化鈉三糖鐵斜面。

2.3.7 根據三糖鐵的結果，選取底層產酸不產氣，斜面不變的培養物，挑取菌苔分別與志賀菌、沙門菌診斷學清做玻片凝集試驗，同時接種11種微量生化反應管和做藥敏試驗。

2.4 結果

從2份食物留樣、6份患者直腸拭子中分離出一株可疑菌，三糖鐵的結果為底層產酸不產氣，斜面不變，無動力，不產H2S。氧化酶陰性。與志賀四種多價血清、痢疾志賀菌2型血清凝集，鹽水對照不凝集。11種微量生化反應為：發酵葡萄糖產酸不產氣；鳥氨酸陽性；賴氨酸、H2S、靛基質、乳糖、衛矛醇、苯丙氨酸、尿素、枸櫞酸鹽均為陰性。根據血清學結果，結合生化反應，初步判定該菌為痢疾志賀菌2型。但與患者無明顯里急后重的癥狀不吻合。再用侵襲性大腸埃希菌診斷血清做凝集試驗時發現該菌與侵襲性大腸埃希菌OK多價Ⅰ、O28ac∶K73血清發生凝集。于是懷疑該菌不是痢疾志賀菌。由于我室條件有限，立即向上級請求技術資源。

四川省CDC的老師趕到我室，對該菌重新鑒定，發現該菌除與痢疾志賀菌2型血清凝集外，還與侵襲性大腸埃希菌血清凝集，即作出“不確定為痢疾志賀菌2型”的判斷。因基層試驗條件有限，帶回省CDC做進一步鑒定。經全面生化，最后鑒定為“類志賀鄰單胞菌”。

藥敏試驗結果顯示該菌對氯霉素、四環素、痢特靈、先鋒霉素、復方TMP敏感，對青霉素、鏈霉素耐藥。

3 討 論

根據流行病學調查、患者臨床表現和實驗室檢測結果，依據GB 14938-94《食物中毒診斷標準及技術處理總則》，判斷這是一起由類志賀鄰單胞菌引起的食物中毒。

氧化酶試驗是腸桿菌科與弧菌科細菌鑒定的“分水嶺”。該菌氧化酶試驗四川省CDC為陽性，而我室卻為陰性。原因是在滴加鹽酸二甲基對苯二胺溶液后，顯淡粉紅色，再加α-萘酚溶液后，不顯藍色，因此錯誤判斷為陰性，為該菌的誤判埋下了伏筆。

類志賀鄰單胞菌為弧菌科鄰單胞菌屬中的一個種，菌體一端有數根鞭毛，動力陽性。而本菌動力卻為陰性，可能與該菌是從食物留樣中分離出來，細菌在加熱過程中受損有關。

此次病原菌的分離，暴露出基層疾控中心的很多問題。如檢驗人員經驗不足、設備簡陋、應急物資的準備不充分等。提醒我們應該加強業務培訓，從不同渠道獲取專業知識，積極積累經驗，以提高自身業務水平。在細菌鑒定過程中，不能僅憑血清凝集及部分生化結果吻合就下結論。另外建議疾控中心設有用于購買應急物資的專項資金，不將這部分成本也計入檢驗科，保證我們有足夠的貯備以應對不時之需。

[1] GB/T 4789-2003《食品衛生微生物學檢驗》[S].2003.

[2] 中華人民共和國衛生部疾病控制司.霍亂防治手冊[S].5版.北京：人民衛生出版社,1999..

[3] GB 14938-94《食物中毒診斷標準及技術處理總則》[S].1994.