熒光定量PCR法檢測乙型肝炎病毒研究

徐靜 張英波 樸素萍

乙型肝炎病毒DNA定量檢測對乙型肝炎的診斷、抗病毒療效觀察及預后判斷均具有重要意義。隨著熒光定量PCR技術的發(fā)展，由于其靈敏、快速、極低的假陰、假陽性率，該技術在臨床上已被廣泛用于檢測HBV-DNA，而酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢測血清中HBV免疫標志物仍舊是診斷乙型肝炎的常用方法。本文對熒光定量PCR法檢測乙型肝炎病毒進行了研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2009年12月至2010年12月我院傳染科住院及門診疑似乙肝患者共計268例。

1.2 方法 本實驗應用美國產ABI7300實時熒光定量擴增儀。FQ-PCR試劑盒由中山大學達安基因股份有限公司提供。嚴格按照儀器操作規(guī)程及實驗步驟操作，電腦自動分析計算出定量結果。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用χ2檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

用FQ-PCR法測定了268例標本，結果發(fā)現(xiàn)130例HBVDNA陽性。應用ELISA重新測定這130例HBV-DNA陽性標本的 HBV 血清標志物 HBsAg、HBsAb、PreS1、HBeAg、HBe-Ab和HBcAb。在130例HBV-DNA陽性標本中，對PreS1和HBeAg而言，HBeAg單獨陽性31例(23.8%);PreS1單獨陽性26例(20.0%)PreS1和HBeAg同時陽性54例(41.5%);HBeAg總陽性率為65.3%;PreS1總陽性率為61.5%;PreS1和HBeAg聯(lián)合檢出率(單HBeAg陽性，單PreS1陽性及二者同時陽性例數(shù)之和同總例數(shù)之比)為84.6%;HBcAb陽性率為94.0%。

同時，應用ELISA檢測了95例HBV-DNA陰性但HBsAg陽性標本中HBV血清標志物。在95例HBV-DNA陰性但HBsAg陽性標本中，對PreS1和HBeAg而言，HBeAg單獨陽性2例(2.1%);PreS1單獨陽性18例(18.9%);二者同時陽性2例(2.1%);HBeAg總陽性率為4.2%;PreS1總陽性率為21.0%;HBcAb陽性率90例，陽性率為94.7%。

PreS1及HBeAg在HBV-DNA陽性標本陽性率分別顯著高于HBV-DNA陰性但 HBsAg陽性標本(61.5%vs 21.0%，65.3%vs 4.2%，P＜0.01)，顯示二者同HBV-DNA復制關系密切，可作為HBV復制的指標;在HBV-DNA陰性但HBsAg陽性標本共95例中，PreS1陽性率為21.0%(20/95)，HBeAg陽性率為4.2%(4/95)，二者同時陽性為2.1%(2/95)，HBeAg特異性為95.8%(91/95)，PreS1特異性為77.9%(74/95)，經 χ2檢驗，HBV-DNA陰性但 HBsAg陽性標本PreS1和HBeAg特異性差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)表明二者在預示HBV感染者病毒復制方面以HBeAg特異性較高。

在HBV-DNA陽性的血清標本中，HBcAb陽性率為94.0%;在HBV-DNA陰性但HBsAg陽性標本中，HBcAb陽性率為94.7%。差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，顯示HBcAb同HBV-DNA關系甚小不能作為HBV復制的指標。

3 討論

ELISA法乙肝免疫學檢測是臨床診斷HBV感染的傳統(tǒng)手段，它是檢測人體對HBV的免疫反應狀態(tài)，而PCR則可以準確的反應出HBV-DNA的復制水平、病程變化和治療恢復情況等。

血清PreS1和 HBeAg同 HBV-DNA關系密切，可作為HBV復制的標志物，尤其是二者聯(lián)合檢測效果更好，但以HBeAg特異性較高。HBsAg仍是HBV感染靈敏的血清標志物，其陰性基本排除HBV感染的可能性，HBV血清標志物均陰性肝功能異常者一定要檢測HBV-DNA。