淺談微生物檢測中培養基的質量控制

姜海燕

淺談微生物檢測中培養基的質量控制

姜海燕

培養基的質量是微生物檢測工作的基礎，事關檢測結果的準確性、可靠性。本文針對微生物檢驗中培養基的制備及使用過程中存在的問題，從培養基購置、貯存、制備、性能測試等方面應采取的質量控制措施進行討論

培養基質量控制;微生物檢測

培養基是是發酵過程或動植物細胞大量培養中供微生物或動、植物細胞的生長、繁殖或積累代謝產物，以合成生物化工產品所必需的營養基質。培養基的制備和使用是微生物實驗室檢測工作的重要環節。近些年來商品化的干燥培養基、成品培養基發展迅速，但由于該行業的生產工藝、設備還相對比較落后，質控手段也不夠健全，市場監管又比較薄弱，這些都影響培養基的質量本文對微生物實驗室在培養基購置、貯存、制備、使用等方面應采取的質量控制措施進行討論，以便微生物實驗室不斷完善和提高培養基的質控水平。

1 培養基的購置與驗收

1.1 購置 微生物檢驗用的各種藥品、試劑和干粉培養基必須是專業廠家生產的產品，質量必須符合有關的質量標準，并且生產商應提供培養基的名稱、產品編號、批號、各種成分和任何補充成分、培養基使用前的pH值、貯存資料及有效期等信息，以利于使用者對產品進行記錄和比較。應選擇產品市場信譽度高、有質量保證能力和服務保證能力的企業;企業是否通過了質量管理體系的認證是較為客觀的評價指標。

1.2 驗收 購買的培養基到貨后，應有專人做好接受和驗收工作，應仔細核對生產企業提供的資料、培養基名稱、規格數量、外觀特征、批號、保質期是否符合要求。每批培養基到貨物后都應對培養基的質量進行檢測，滿足檢測方法規定的要求后方可投入使用。

2 培養基的儲存

干粉培養基應保存在陰涼干燥處，要避免陽光直射;未開瓶的培養基在室溫下的最長保存2年，開瓶后的干粉培養基易吸濕，應注意防潮并在6個月內用完。應定期對儲存中的培養基進行常規檢查，如容器密閉性復查、首次開封日期、內容物的感官檢查，如果培養基發生結塊、顏色異常和其他變質跡象就不能再使用［1］。

3 培養基的制備

3.1 培養基用水 培養基制備用水應使用蒸餾水或與其同質的水，最好不使用離子交換器生產的去離子水。

3.2 稱量 稱量時要用專用的角匙，避免交叉污染而影響檢驗結果;干粉培養基易吸潮，如有條件，盡量在濕度較低的房間稱取培養基。干粉培養基應嚴格按照生產商提供的有關說明準確配制。

3.3 復水 復水時不得用銅鍋或鐵鍋，以防有離子混入培養基中，影響微生物的生長;容器的大小需大于復水后培養基總體積的2倍以上，避免在加熱溶解過程中培養基溢出;含有瓊脂粉的培養基，在加熱溶解之前可以浸泡數分鐘;加熱培養基時一定要進行攪拌，特別是瓊脂類培養基。為避免燒焦和沸騰溢出，對于少量的培養基最好使用沸水浴進行加熱。燒糊的培養基營養物質被破壞，并可產生有毒物質，如發現焦化，或未溶解均勻前培養基有溢出，該培養基即不能使用，應重新制備。對于瓊脂類培養基進行再融化時應使用沸水浴或流動蒸汽進行加熱，最多只能加熱兩次，第二次再融化后仍未用完的培養基應棄去。

3.4 滅菌 培養基應按培養基配方中規定的條件及時進行滅菌，通常是121℃15 min，以保證滅菌效果和不損傷培養基的有效成份。已配制好的培養基必須立即滅菌，避免微生物生長繁殖而消耗養分，改變培養基的酸堿度。，因此必須嚴格控制滅菌溫度和時間，并且不可重復滅菌。

3.5 pH測定 微生物必須在適宜的pH范圍內才能正常生長繁殖或體現其生物特性。滅菌前后PH會有所變化，所以滅菌前就要準備好，可以用1 mol/L的NaOH或者1 mol/L的鹽酸事先調高或調低。注意不可反復調pH，否則會影響培養基的滲透壓。

3.6 配制好的培養基保存 滅菌以后培養基應該迅速冷卻至所需溫度，避免長時間保存在滅菌鍋內造成過度滅菌，影響培養基的營養成分或選擇性效果。建議平板傾注后立即使用。保存時，盡可能貯存在不會改變其成分的條件下，即避光或在4℃～12℃冰箱密閉保存。如果保存時間超過2 d，應將其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉湯類培養基如果保存時間超過2個星期，應將其放在帶有螺旋蓋的試管或其他密閉的試管或容器中防止蒸發［2］。

4 培養基的性能測試

4.1 物理學控制 制備好的培養基應有相應的顏色，一般的培養基應澄清、無渾濁、無沉淀。使用前應檢查培養基的顏色是否發生變化，是否蒸發/脫水。

4.2 污染控制 從每批制備好的培養基中選取部分進行污染測試(無菌試驗)，確定無微生物生長方可使用。

5 討論

培養基的質量是微生物實驗室檢測工作的基礎，事關檢測工作的準確性可靠性，在微生物實驗室檢測工作中舉足輕重。如果在工作中忽視任何一個環節的質量問題，都將導致檢驗結果科學性、客觀性的偏離。因此，加強培養基的實驗室質量控制，認真地做好培養基的質控工作，不斷完善和提高培養基的質控水平，才能為微生物檢測實驗室提供高質量的培養基。

［1］唐細良，史娟，唐紫琳，等.影響衛生微生物檢驗質量的兩個因素研究.實用預防醫學，2000，7(4):314-315.

［2］饒紅，陳廣全，馮騫，等.微生物實驗室培養基的質量保證措施.檢驗檢疫科學，2006，6(4):31-33.

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