復方中草藥對斜帶石斑魚生長性能及消化酶活性的影響

孔江紅 劉襄河 謝欽銘

隨著海水魚類養殖規模不斷擴大，養殖環境趨于惡化，各種病害日益劇增，大量抗生素和化學藥品的濫用引起抗藥性增加，嚴重影響海水魚類的品質和人類健康。中草藥作為一種新型飼料添加劑，具有天然性、高效、毒副作用小和性能多樣化等優點而漸受青睞。中草藥含有多種營養成分和生物活性物質，如多糖、甙類、生物堿、有機酸、揮發油等，既能提高水產動物的非特異性免疫功能[1-4]，又能提高消化酶活性，促進營養物質的消化吸收，從而提高水產動物的生長性能[5-9]。斜帶石斑魚(Epinephelus coioides)隸屬于鱸形目、鱸亞目、鮨科、石斑魚屬，為暖水性中下層魚類，是我國南方海水網箱養殖的主要經濟魚類之一，因其生長快、肉質細嫩、味道鮮美而受到人們的青睞。本研究在飼料中添加不同劑量的復方中草藥，研究對斜帶石斑魚生長性能、體成分和消化酶活性的影響，探討其適宜添加量及應用的可行性，旨在為開辟中草藥在海水養殖魚類飼料中的應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗魚與飼養管理

試驗魚為福建漳浦水產基地人工培育的斜帶石斑魚幼魚，平均體重為(19.72±0.22)g，體長為(11.0±0.5)cm。石斑魚魚苗運到集美大學海水養殖試驗場，放入暫養池馴養15 d后，用濃度為150 ml/m3的福爾馬林溶液消毒，選取體格健壯、規格基本一致的個體，隨機放入12個150 L的循環流水過濾水族箱中，每組3缸，每缸15尾，稱初始體重后開始試驗。

每天8:00和17:00定時投喂，每次達到表觀飽食。每天監測水質狀況，每周清洗玻璃缸，并用氟苯尼考消毒。試驗用水為一級沙濾海水，光照為自然光源，用增氧機晝夜持續增氧，每次投喂后半小時吸出糞便，并換水約1/4～1/3，以保持水質清新。試驗期間水溫25～28℃，pH值8.2±0.3，溶氧濃度＞7.0 mg/l，氨氮濃度＜0.2 mg/l。試驗期為42 d。

1.2 試驗飼料的配制

中草藥為按照一定比例混合的大黃、柴胡、白茅根、槐花、貫眾、苦參等13種中草藥粉碎后，過80目篩，在飼料中分別添加0%、0.5%、1.0%、2.0%（飼料配方見表1），分別為對照組(CK)、0.5%組(F1)、1.0%組(F2)和2.0%組(F3)。各組飼料原料混勻后，制成3 mm粒徑的顆粒飼料，自然風干后裝入自封袋中，置于-20℃冰箱中冷藏保存備用。

1.3 樣品采集

試驗結束后，禁食24 h，每缸魚整體稱重后，隨機取5尾魚，用50 mg/l丁香酚進行麻醉處理，待魚側翻即可，測體長、體重，然后將魚解剖分離出肝臟、胃和腸，用預冷的生理鹽水沖洗，濾紙吸干水分，并于-80℃下保存，用于制備粗酶液。解剖后的魚體，去頭、尾及鰭，于-20℃下保存，用于測定體成分。

表1 飼料組成及營養水平（%）

1.4 生長指標分析

魚體稱重后絞碎，于70℃烘干，用微型粉碎機粉碎，制備魚體風干樣品。測定魚體風干樣品和飼料樣品常規成分：水分含量測定采用105℃常壓烘箱干燥恒重法；粗蛋白含量測定采用半微量凱氏定氮法（總氮×6.25）；粗脂肪含量的測定采用索氏抽提法（乙醚為抽提液）；灰分含量測定采用馬福爐灼燒法（550℃）。

分別按下式計算增重率(weight gain rate,WGR)、飼料系數(feed conversion rate,FCR)、特定生長率(specific growth rate,SGR)、蛋白質效率(protein efficiency ratio,PER)、肝體指數(hepatosomatic indexes,HSI)、肥滿度(condition factor,CF)、腹脂率(mesenteric lipid-somatic index,MSI)和存活率(survival rate,SR)。

增重率(%)=100×(Wt-W0)/W0；

飼料系數=FI/(Wt-W0)；

特定生長率(%/d)=100×(lnWt-lnW0)/t；

蛋白質效率(%)=100×(Wt-W0)/Wp；

肝體指數(%)=100×Wl/Wb；

肥滿度(%)=100×Wb/L3；

腹脂率(%)=100×Wf/Wb；

存活率(%)=100×Nf/Ni。

式中：W0——平均每尾魚初始體重(g)；

Wt——平均每尾魚終末體重(g)；

FI——平均每尾魚攝食飼料總量(g)；

t——飼喂天數(d)；

Wp——平均每尾魚攝入蛋白質總量(g)；

Wl——每尾魚肝臟重量(g)；

Wf——每尾魚腹脂重量(g)；

Wb——每尾魚終末體重(g)；

L——每尾魚終末體長(cm)；

Ni——初始魚尾數；

Nf——終末魚尾數。

1.5 粗酶液的制備和消化酶活力測定

稱重組織樣品，加入10倍體積(V/W)的預冷生理鹽水(0～4℃)，并在冰水浴中勻漿10 min。勻漿液用高速冷凍離心機進行離心(4℃、3 000 r/min、20 min)，取上清液，即為消化酶粗提液。

蛋白酶活力的測定參考QB/T 1803—93。準確稱取酪素，用少許濃NaOH溶液潤濕，溶于一定的緩沖液，調節pH值(肝胰臟、腸7.5，胃2.6)，配成1%的酪素溶液。將1 ml 1%酪素溶液與1 ml粗酶液混合，在一定恒溫水浴中反應10 min，用0.4 mol/l三氯乙酸2 ml終止反應，對照為先加三氯乙酸終止反應再加酪素。離心10 min，取1 ml反應液于0.4 mol/l Na2CO35 ml混合，再加1 ml福林試劑，混勻，37℃顯色20 min，于660 nm測吸光值。

淀粉酶和粗酶液蛋白含量采用南京建成生物工程研究所生產的試劑盒進行測定。

1.6 數據處理

所有試驗數據均以平均值±標準差(Mean±SE)表示，用SPSS13.0分析軟件進行單因素方差分析(ANOVA)，若存在顯著的差異，則采用Duncan's法進行多重比較，P＜0.05為差異顯著。

2 結果

2.1 復方中草藥對斜帶石斑魚生長性能的影響（見表2）

由表2可知，F1和F2組FAW分別比對照組高4.59%和3.85%，差異顯著(P＜0.05)。F1和F2組WGR顯著高于對照組和F3組(P＜0.05)，但F1組和F2組差異不顯著(P＞0.05)。F2組的FCR和MSI顯著低于對照組和F1組(P＜0.05)，F2組與F3組差異不顯著(P＞0.05)。F1和F2組SGR顯著高于對照組和F3組(P＜0.05)。F1、F2和F3組PER與對照組相比差異顯著(P＜0.05)，且F2組顯著大于F1和F3組(P＜0.05)，F3組顯著大于F1組(P＜0.05)。F2組的CF顯著高于對照組和F3組(P＜0.05)，與F1組差異不顯著(P＞0.05)。F2組的HSI顯著高于F1、F3和對照組(P＜0.05)，F3組也顯著高于對照組(P＜0.05)。

表2 復方中草藥對斜帶石斑魚生長性能的影響

2.2 復方中草藥對斜帶石斑魚體成分的影響（見表3）

表3 復方中草藥對斜帶石斑魚體成分的影響(%)

由表3可知，各組水分含量和粗蛋白含量差異不顯著(P＞0.05)。F2組粗脂肪含量顯著高于對照組(P＜0.05)，但與F1和F3組差異不顯著(P＞0.05)。F3組灰分含量顯著高于對照組(P＜0.05)，但與F1和F2組差異不顯著(P＞0.05)。

2.3 復方中草藥對斜帶石斑魚蛋白酶活力的影響(見表4）

由表4可知，隨著復方中草藥添加量的增加，各消化道部位蛋白酶活力呈現先升高后降低的趨勢。F2和F3組胃蛋白酶活力顯著高于對照組和F1組(P＜0.05)，且F2組高于F3組，但差異不顯著(P＞0.05)。F1、F2和F3組腸蛋白酶活力顯著高于對照組(P＜0.05)，且F2組顯著高于F1和F3組(P＜0.05)。F1、F2和F3組肝胰蛋白酶活力顯著高于對照組(P＜0.05)，且F2組顯著高于F1組(P＜0.05)。

表4 復方中草藥對斜帶石斑魚蛋白酶活力的影響（U）

2.4 復方中草藥對斜帶石斑魚淀粉酶活力的影響(見表5）

表5 復方中草藥對斜帶石斑魚淀粉酶活力影響(U)

表5所示，各消化道部位淀粉酶活力于蛋白酶活力的變化趨勢相同。F2組胃淀粉酶活力顯著高于對照組、F1和F3組(P＜0.05)；F1、F2和F3組腸淀粉酶活力顯著高于對照組(P＜0.05)，且F2組顯著高于F1組(P＜0.05)；F2組肝胰淀粉酶活力顯著高于對照組、F1和F3組(P＜0.05)。

3 討論

本試驗中選用的苦參、大黃、柴胡等13種中草藥含有大量皂苷、多糖、甙類、生物堿、有機酸、揮發油等活性物質，進行復方配合后作為飼料添加劑具有促進生長、提高營養物質的利用率和降低飼料系數等作用。邱小琮等[10]在飼料中添加山楂、麥芽等中草藥后，異育銀鯽(Carassius auratus gibelio)的增重率明顯提高。王吉橋等[11]在飼料中添加金銀花、人參、山楂等中草藥，牙鲆(Paralichthys olivaceus)的增重率和飼料轉化率顯著提高。姜志強[12]等在真鯛(Pagrosomus major)幼魚飼料中添加山楂、麥芽、當歸等中草藥，2.0%的添加量可極顯著提高增重率(P＜0.01)，顯著降低飼料系數(P＜0.05)。陸志款等[13]將黃芪、當歸、甘草和山楂等配成復方中草藥，按0.5%、1.0%、1.5%和2.0%的添加量連續喂養紅笛鯛(Lutjanus sanguineus)56 d，發現試驗組魚的增重率均顯著高于對照組。湯菊芬等[14]在羅非魚(Oreochromis niloticus)的商品飼料中添加1.5%的復方中草藥制劑，發現增重率提高10.82%，蛋白質效率提高15.68%，飼料系數降低4.71%。本試驗結果表明，在飼料中添加1.0%的復方中草藥，斜帶石斑魚的增重率較對照組提高了7.50%(P＜0.05)，蛋白質效率提高了11.99%(P＜0.05)，飼料系數降低了10.85%(P＜0.05)，說明本復方可有效提高斜帶石斑魚的生長性能。

人工養殖魚類與野生魚類相比肉質風味有較大差異，源于決定肉質風味的主要成分的含量和比例，如蛋白質、脂肪、游離氨基酸、醛、酯及酚等，而中草藥中的某些成分在養殖魚類體內沉積，可改善肌肉品質。羅慶華等[15]研究報道，杜仲提取物、大蒜素及兩者復方制劑能促進草魚(Ctenopharyngodon idella)生長，改善肌肉品質，添加復方0.04%～0.08%可以協同改善草魚的生長性能和肉質。胡先勤等[16]在鯽魚(Carassius auratus L.)的基礎飼料中添加500 mg/kg的中藥提取物，能顯著提高鯽魚體蛋白質和脂肪含量，改善魚肉品質。本研究在飼料中添加1.0%的復方中草藥，斜帶石斑魚的腹脂率降低35.70%(P＜0.05)，脂肪含量提高7.49%(P＜0.05)，說明本復方中草藥能夠提高脂肪的利用率，改善石斑魚的肌肉品質。

消化酶主要是由消化腺和消化系統分泌的具有消化作用的酶類，魚類的消化主要在消化道中進行，消化酶活性是反映魚類消化機能的一項重要指標，適宜的中草藥添加劑可以提高魚類的消化酶活性。劉慧吉等[6]將炒蒼術、炒白術等中藥制成的兩種復方中草藥添加劑分別以0.5%、1%和2%的劑量添加到花鱸(Lateolabrax japonicus)的基礎飼料中，發現花鱸的淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性均有顯著提高(P＜0.05)。邱小琮等[7]研究表明，異育銀鯽攝食添加中草藥的飼料后，腸道和肝胰臟的蛋白酶和淀粉酶活性明顯提高。吉紅等[5]在泥鰍(Misgurnus anguillicaudatus)的飼料中添加不同水平的中草藥添加劑，能顯著提高泥鰍的淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性(P＜0.05)。本試驗結果表明，添加復方中草藥后，斜帶石斑魚胃、腸和肝胰臟的蛋白酶和淀粉酶活性均有所提高，尤其添加量為1.0%時，蛋白酶和淀粉酶活性均顯著高于對照組(P＜0.05)。復方中草藥進入石斑魚魚體消化道后，可以促進消化酶分泌，提高消化酶活性，從而增強魚體對飼料營養物質的消化吸收，最終提高魚體的生長性能。

本研究結果表明，在斜帶石斑魚飼料中添加1.0%的復方中草藥，可明顯提高其生產性能和消化酶活力。

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