復合L-色氨酸發酵微生態制劑對土雞生長性能和非特異性免疫的影響

吳毅芳 周常義 蘇文金 張志剛 蘇國成

隨著食品安全引起的社會問題被廣泛關注，人們健康安全意識的逐步提高，抗生素、促生長素等與日常飲食息息相關的添加劑的生產和使用備受爭議。在這種情況下，對綠色畜禽產品的大量需求促進了微生態制劑在畜禽養殖過程中的應用和相關新型制劑的開發生產。

本試驗中使用的發酵制劑為復合L-色氨酸發酵微生態制劑，以枯草芽孢桿菌、多肽、蛋白酶、L-色氨酸、豆腐渣為主要成分，旨在實現豆腐渣、玉米漿等工業下腳料二次利用的同時，獲得既能平衡日糧氨基酸又具有益生效應、生產成本較低的微生態制劑。本試驗通過改變制劑在基礎日糧中的添加比例，考察該制劑對土雞生長性能和非特異性免疫活性的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

復合L-色氨酸發酵微生態制劑（本實驗室制得）；基礎日糧（直接從飼料店購得適合雛雞食用的小雞飼料）；雞苗（從雞苗場購得1日齡土雞120羽）；溶菌酶檢測試劑盒（南京建成公司購得）；實驗室常用檢測制劑。

1.2 方法

1.2.1 試驗分組及飼喂方式

土雞苗分成4組，每組30羽。A組飼喂基礎日糧；B組飼喂95%的基礎日糧和5%發酵制劑混合物；C組飼喂90%的基礎日糧和10%發酵制劑混合物；D組飼喂85%的基礎日糧和15%發酵制劑混合物。

從2日齡開始在B、C、D 3組日糧中添加適量的發酵制劑直到7日齡，作為適應期。

1.2.2 檢測方法

從7日齡開始對各組日糧按比例混合后飼喂，每日早晚飼喂兩次，每次飼喂時間為2 h，每日稱取各組日糧消耗量。8日齡、17日齡、27日齡時每組分別取樣6只進行稱重、解剖試驗。獲取各試驗組的肝臟、小腸上段內容物及糞便，對各組料肉比[1]、消化酶[2]、溶菌酶[3]、肝臟器官指數[4]、腸道及糞便中的大腸桿菌和乳酸桿菌[5]進行比較。

1.2.3 測定指標

1.2.3.1 料肉比

料肉比=每組飼料總消耗量/每組總增重量。

1.2.3.2 消化酶

消化酶主要針對腸道中蛋白酶和纖維素酶進行檢測，取每個小腸上段內容物0.5 g于50 ml離心管中，添加9.5 ml生理鹽水稀釋，置于37℃搖床150 r/min震蕩30 min后，參照Cüneyt Suzer[2]的方法進行測定。

1.2.3.3 溶菌酶

詳見南京建成公司溶菌酶檢測試劑盒說明書。

1.2.3.4 肝臟器官指數

肝臟器官指數=肝臟重量/體重。

1.2.3.5 大腸桿菌及乳酸桿菌檢測

通過選擇性培養基（伊紅美藍培養基和MC培養基）對以上兩種菌進行活菌平板計數。小腸上段內容物樣品以及糞便樣品的制法同1.2.3.2。

2 結果分析與討論

2.1 發酵制劑對土雞生產性能的影響（見表1）

表1 發酵制劑對土雞生產性能的影響

由表1可知，B、C、D 3個試驗組的料肉比均比對照組A有所下降，階段二料肉比均與對照組差異顯著（P＜0.05）。階段一即8日齡到17日齡，由于肉雞羽毛尚未發育完全，需要消耗較多的能量以維持體溫，另外戶外養殖期間氣溫較低等因素導致階段一料肉比較高。階段二即18日齡到27日齡，由于肉雞羽翼逐漸豐滿，維持體溫所需能量相對較少，試驗組逐漸適應添加了發酵制劑的日糧口味和養殖環境以及發酵制劑促進消化吸收作用逐步凸顯等原因，3個試驗組階段二的料肉比均較階段一有所減少，其中B組下降最為顯著，為10.7%。未添加發酵制劑的對照組階段二的料肉比比階段一提高了9%。27日齡時，B、C、D 3組料肉比分別相對A組下降了19.4%、16.1%和15.5%。理論上，發酵制劑促消化吸收能力與枯草芽孢桿菌、蛋白酶、多肽、L-色氨酸等營養成分相關，階段一3個試驗組的料肉比相對對照組有所下降，說明發酵制劑在促進土雞消化吸收方面具有一定程度的滯后性。由此可推斷，蛋白酶、多肽、L-色氨酸等成分在提高日糧吸收利用率方面起一定的作用。但其后料肉比顯著降低，關鍵是由于枯草芽孢桿菌在腸道中的定植以及相關消化酶的分泌，促進飼料中大分子的蛋白、纖維和脂肪在腸道中的再次分解和吸收，同時多肽促進氨基酸吸收的協同作用進一步提高了營養成分的吸收率，從而導致料肉比的下降。

2.2 發酵制劑對土雞消化道能力的影響（見表2）

表2顯示在雛雞生長的前27日齡，對照組腸道中的蛋白酶、纖維素酶酶活隨著日齡的增長逐漸降低并趨于穩定（總體上變化程度逐漸減小）。理論上該指標將穩定在一個適宜的水平直到生長后期隨著動物機能的衰退而進一步降低。A組腸道蛋白酶活性27日齡時下降到8日齡36.6%，B、C、D 3組分別達到8日齡時的66.1%、79.6%、66.7%，蛋白酶的下降程度與對照組相比差異顯著（P＜0.05）。其中B、C兩組的蛋白酶下降程度不及A組的50%。階段一中，蛋白酶和纖維素酶主要來源于日糧。表2中17日齡的纖維素酶和蛋白酶數據反映出3個試驗組與對照組蛋白酶活性差異顯著，3個試驗組蛋白酶降低程度不及對照組，說明日糧中的蛋白酶在胃酸性環境下具有一定程度的穩定性，即通過胃消化酶的作用后仍具有活性，有效增加腸道中蛋白酶作用效果，促進未完全分解的蛋白物質的消化吸收。階段二中3個試驗組的蛋白酶主要來自定植于腸道中的枯草芽孢桿菌的分泌和日糧供給。A、B、C、D 4組27日齡時纖維素酶活性分別是8日齡的42.9%、113.9%、90.7%和64.2%。階段二纖維素酶來自于定植后的枯草芽孢桿菌的分泌以及日糧的補充，導致B、C兩組纖維素酶活性有所提高，前者對纖維素酶活性的提高具有關鍵作用。D組纖維素酶和蛋白酶活性的下降，可能由于添加發酵制劑含量過高，一定程度上改變了蛋白質、纖維素等營養成分的平衡，纖維素攝取量比對照組有所下降并超過某一臨界點導致了D組纖維素酶活性整體偏低。

表2 發酵制劑對土雞腸道消化能力的影響（U/g）

2.3 發酵制劑對土雞非特異免疫活性的影響（見表3）

表3 發酵制劑對土雞非特異免疫活性的影響

本試驗中考察非特異性免疫力指標為血清中溶菌酶含量和肝臟指數。表3中，對照組溶菌酶含量隨日齡的增加不斷提高，17日齡時各組溶菌酶含量分別達到8日齡的3.92倍、4.54倍、4.66倍和4.25倍，試驗組和對照組差異顯著（P＜0.05）。27日齡時各組溶菌酶含量分別達到8日齡的4.25倍、4.64倍、4.67倍和4.61倍，試驗組與對照組差異顯著（P＜0.05）。由此推測，發酵制劑的添加可提前激活機體非特異性免疫活性，使機體溶菌酶含量迅速達到穩定閾值。表3中免疫器官指數即肝臟指數則隨日齡的增加不斷下降，27日齡時各組免疫器官指數分別為8日齡的65.7%、67.6%、70.5%和74.7%，試驗組與對照組相比差異不顯著（P＞0.05）。綜上所述，試驗組的非特異性免疫活性高于對照組，證明該發酵制劑有利于提高機體非特異性免疫力，可一定程度上促進機體非特異性免疫力提前達到穩定閾值。由階段一與階段二溶菌酶活性及免疫器官指數的變化程度可推測發酵制劑中的多肽是提高非特異性免疫的有效成分。多肽與枯草芽孢桿菌均能提高機體免疫力，但二者作用機理不同。目前關于二者作用機理的研究和探討還處于初步階段，未有成熟的理論體系和實驗進行驗證說明。多肽對于免疫力的提高作用可能與其參與體液循環有關，階段一由于雛雞個體較小，血液流量小，從日糧中吸收的多肽相對濃度較高，一定程度上加快了機體免疫力提高的速度。

2.4 發酵制劑對土雞腸道微生物菌群的影響（見表4）

表4 發酵制劑對土雞腸道微生物菌群的影響（×105CFU/g）

由表4可知，腸道中的大腸桿菌和乳酸桿菌數量隨日齡的增加逐漸減少。這可能與腸道長度和質量的增加有關，長度的增長使微生物的分布逐漸擴散開，一定程度上降低了分布密度。另外，由于所取腸道為上段，接近胃部，隨著日齡的增長，胃部和腸道上部消化能力的逐漸完善，腸道上端環境中存在的蛋白酶、酸堿消化液等均不利于微生物的生長繁殖，故大腸桿菌和乳酸桿菌密度隨著日齡的增長逐漸減小，理論上將趨于穩定。糞便中的菌群首先來源于腸道，其次是空氣和環境。表4顯示糞便中的相關菌密度高于腸道上段，這是由于糞便中來自于腸道的菌群主要來自于腸道中段和下段，這些部位的菌密度由于腸道生存環境的改善而有所提高，高于腸上段菌群密度。表4中，試驗組17 d、27 d B、C、D 3組的腸道和糞便中的大腸桿菌數均顯著低于對照組（P＜0.05)，而乳酸桿菌數則顯著高于A組（P＜0.05）。兩種菌群數量變化主要由于腸道中氧氣的變化，即枯草芽孢桿菌的定植及其需氧特性，降低了腸道中的氧氣濃度，促進了乳酸桿菌的生長，同時抑制了大腸桿菌。

3 結論

本試驗考察了自制復合L-色氨酸微生態制劑對土雞生長性能和非特異性免疫等生理活性的影響。通過試驗既驗證了復合L-色氨酸微生態制劑具有降低土雞料肉比、提高非特異性免疫、促進腸道益生菌生長等生理作用，也為該制劑日后生產實踐中粗蛋白、纖維素等相關比例的調整提供了依據，即粗蛋白濃度過高、纖維素濃度過低均可最終提高料肉比，降低經濟效益。通過綜合比較，以添加5%制劑的混合日糧為最佳配方，該添加比例能平衡日糧中的氨基酸、顯著降低土雞的料肉比、提高非特異性免疫活性、有效促進其腸道益生菌的生長，滿足了微生態制劑對于提高生長性能、提高經濟效益的基本要求。今后可以其中L-色氨酸含量、多肽含量、枯草芽孢桿菌數為基準，調整混合日糧中的粗蛋白、纖維素比例，以實現更高的經濟效益。

[1] 吳健.微生態制劑代替抗生素對肉用仔雞生產性能影響的研究[J].中國家禽,2009,31(11):55-56.

[2] Cüneyt Suzer,Deniz ?oban,H.Okan Kamaci.Lactobacillus spp.bacteria as probiotics in gilthead sea bream(Sparus aurata,L.)larvae:Effects on growth performanceanddigestiveenzyme activities[J].Aquaculture,2008(280):140-145.

[3] Yanbo Wang,Ziqiang Tian,Jiangtao Yao,et al.Effect of probiotics,Enteroccus faecium,on tilapia(Oreochromis niloticus)growth performance and immune response[J].Aquaculture,2008(277):203-207.

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