bFGF對慢性酒精中毒大鼠腦組織ATP酶活力的影響

黃俊杰 王彩冰 黃麗娟 趙善民 何顯教 黃彥峰 梁祚仁 李倩茗 黃巨恩

過量飲酒及酗酒對人類健康的危害正成為日益嚴重的社會問題，長期大量飲酒可導致人各種器官的損傷，以肝、腦受損最為嚴重[1]。由于目前沒有找到治療酒精中毒所致腦損傷的有效藥物，因而預防酒精中毒對腦的損傷極為重要。bFGF具有多種生物活性，對組織創傷具有修復作用[2]。本研究采用白酒灌胃建立慢性酒精中毒大鼠模型，觀察給予bFGF治療后檢測大鼠腦組織Na+-K+-ATP酶活力和Ca2+-M g2+-ATP酶活力，探討bFGF對慢性酒精中毒所致的腦損傷的保護作用。

1 材料與方法

1.1 動物慢性酒精中毒模型及與分組

取成年清潔級W istar雄性大鼠40只，體質量250g左右，由廣西醫科大學動物實驗中心提供（動物合格證號：SCXK（桂）2009-0003）。慢性酒精中毒模型[3-4]大鼠（30只）每日按10g/（kg·d）白酒，分2次灌胃（間隔12h），連續白酒灌胃60d后，大鼠毛發無光澤，性情不穩定，輕者煩躁不安，精神萎靡、反應淡漠、食欲減退和行動遲緩，重者出現流涎、體態呆板、嗜睡，睡眠時間明顯增多，活動明顯減少，進食量少于正常對照組，體重增長緩慢，證明慢性酒精中毒模型成功建立。正常對照組大鼠毛發有光澤，體態活潑，食量及大便正常，無嗜睡現象。慢性酒精中毒模型建立成功的動物隨機抽簽法分為酒精中毒對照組、NS對照組和bFGF治療組，每組10只。bFGF治療組大鼠白酒灌胃的同時，1h后按12g/kg劑量肌肉注射，1次/d，共14d，bFGF由廣州暨南大學生物工程研究所提供；NS對照組大鼠白酒灌胃的同時，1h后肌肉注射與bFGF治療組相同容量的生理鹽水，1次/d，共14d；酒精中毒對照組只白酒灌胃，不作任何干預。另外10只大鼠不灌白酒，灌服與白酒同體積的生理鹽水作為正常對照組。各組動物飼養環境、條件均相同：分籠普通飼養，自由飲水攝食。室溫26℃，濕度50%～60%飼養。各組大鼠到相對應的時間點分別迅速取出腦組織，用生理鹽水洗去表面殘血，準確稱取組織重量，按重量體積比加9倍生理鹽水制成10%的腦組織勻漿，1500r/ m in離心10m in后取其上清液，再用生理鹽水將上清液稀釋成2%腦組織勻漿待測定。

1.2 腦組織Na+-K+-ATP酶活力和Ca2+-M g2+-ATP酶活力的測定

Na+-K+-ATP酶活力及Ca2+-M g2+-ATP酶活力的測定試劑盒說明書操作，測定儀器為UV 755B紫外分光度計（上海分析儀器總廠）。規定每小時每毫克組織蛋白的組織中ATP酶分解ATP產生1μmol無機磷的量為一個ATP酶活力單位，即（μmolPi/mgprot/ hour）。腦勻漿蛋白定量按采用考馬斯亮藍染色法測定。

1.3 統計學分析

采用SPSS13.0軟件對實驗數據進行統計學處理，所有數據用±s表示，組間比較采用t檢驗。

2 結果

bFGF對慢性酒精中毒大鼠腦組織Na+-K+-ATPase活力和Ca2+-Mg2+-ATPase活力的影響。酒精中毒組與正常對照組相比，腦組織Na+-K+-ATP酶活力和Ca2+-M g2+-ATP酶活力均顯著降低，差異均有統計學意義（P＜0.01）；NS對照組與酒精中毒組相比，腦組織Na+-K+-ATP酶活力和Ca2+-M g2+-ATP酶活力差異均無統計學意義（P＞0.05）；bFGF治療組與酒精中毒組和NS對照組相比，腦組織Na+-K+-ATP酶活力和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力均明顯升高，差異均有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01）。見表1。

表1 b FGF對酒精中毒大鼠腦組織Na+-K+-ATPase活力和Ca2+-M g2+-ATPase活力的影響±s，n=10）

表1 b FGF對酒精中毒大鼠腦組織Na+-K+-ATPase活力和Ca2+-M g2+-ATPase活力的影響±s，n=10）

注：與正常對照組比較，**P＜0.01；bFGF治療組與酒精中毒組和正常對照組相比，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

組別Na+-K+-ATPase活力 Ca2+-M g2+-ATPase活力（μmolPi/mgprot/hour） （μm olPi/mgprot/hour）正常對照組 0.92±0.11 1.05±0.15酒精中毒組 0.63±0.13** 0.71±0.12** NS對照組 0.69±0.12 0.59±0.13 bFGF治療組 0.86±0.09▲▲ 0.85±0.17▲

3 討論

過量飲酒對機體健康的危害已受到廣泛關注，長期大量飲酒可導致人各種器官的損傷，乙醇作為一種親神經性毒性物質，對中樞神經和周圍神經均可造成損傷，因此酒精對腦的損傷最為嚴重之一[5]。乙醇代謝產生氧自由基增多、細胞氧化應激增強是造成線粒體損傷的主要原因：線粒體既是內源性氧自由基產生的部位又是氧自由基作用的靶點，腦組織代謝旺盛[6-7]，耗氧量大，神經細胞對氧自由基尤為敏感，若線粒體呼吸鏈受損會進一步增加活性氧的生成并形成惡性循環，同時酒精代謝產生的外源性氧自由基耗竭細胞內谷胱甘肽，同時線粒體DNA接近內源性氧自由基發源地，因此更易受到損傷，以上因素均可導致線粒體膜損傷和通透性的改變而誘發細胞損傷。

ATP酶是存在于組織細胞及細胞器生物膜上的一種蛋白酶，其在物質運送、能量轉換、信息傳遞以及維持細胞膜的完整、組織代謝等方面具有重要的意義，可作為代謝紊亂及損傷組織恢復能力的可靠指標。ATP酶是逆離子梯度進行細胞膜內外轉運的離子泵，其中重要的為Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶[8-9]。而作為神經營養因子之一的bFGF，具有多種生物活性，可促進神經元的存活及突起生長，對神經有保護作用[9-11]。在正常組織與細胞中，bFGF主要分布于腦、肝、腎、骨、軟骨等組織，bFGF的受體廣泛分布于神經元、膠質細胞、平滑肌細胞、成纖維細胞和內皮細胞等多種細胞中，其中尤以神經元中含量最為豐富。bFGF與其受體結合，能產生廣泛的細胞效應，促進細胞增生分化和血管生成，修復損傷組織。本實驗研究結果表明，慢性酒精中毒后大鼠腦組織的Na+-K+-ATP酶活力和Ca2+-M g2+-ATP酶活力均明顯高低于正常對照組，說明慢性酒精中毒后使大鼠腦細胞發生損傷。經過用bFGF治療酒精中毒大鼠后腦組織的Na+-K+-ATP酶活力和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力均明顯升高，提示bFGF對慢性酒精中毒所致的腦損傷具有保護作用。

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