樂脈膠囊中芍藥苷含量的HPLC測定方法

董月輝,趙金,王承平

(1.山東省濟南衛生學校,山東濟南 250023;2.山東省分析測試中心,山東濟南 250014;3.月旭材料科技(上海)有限公司,上海 201203)

樂脈膠囊是中藥類硬膠囊,理血/降脂藥,是廣泛應用的OTC藥品,是由丹參、川芎、赤芍、紅花等7味中藥制成的復方制劑,具有行氣活血、化瘀通脈之功效,用于氣滯血瘀所致的頭痛、眩暈、胸痛,心悸、冠心病、心絞痛、多發性腦梗死的治療,赤芍為該制劑的主藥之一,其主要有效成分為芍藥苷。為了提高該制劑的質量標準,本研究建立了HPLC[1]測定該制劑中芍藥苷含量的方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀(上海伍豐儀器,LC100二元高壓系統,紫外檢測器),Ultimate·AQ-C18(4.6×150mm,5μm)色譜柱(月旭公司);1/1萬電子天平(上海舜宇恒平);超聲波清洗機(昆山超聲波儀器廠)。

芍藥苷對照品：中檢所提供;樂脈膠囊：市場購買;乙腈(色譜純)：HoneyWell;磷酸二氫鈉(分析純)：國藥集團;三乙胺(分析純)：國藥集團;氫氧化鈉(分析純)：國藥集團;水：重蒸餾水。

1.2 色譜條件

U ltim ate·AQ-C18(4.6×150 mm 5μm)色譜柱;檢測波長230 nm;流動相乙腈-0.2%磷酸溶液10∶90;溫度25℃;流速1.0 m L/min;進樣量10 μL,見圖1。

1.3 樣品溶液制備

芍藥苷標準品溶液儲備液：精密稱取對照品8.4mg至25m L容量瓶中,用稀乙醇定容至刻度,使其濃度含芍藥苷為0.336 m g/m L,超聲使其溶解搖勻即得。

芍藥苷標準品溶液：精密量取對照儲備液1m L至25 m L容量瓶中,用流動相定容至刻度,使其濃度為13.44μg/m L,搖勻即得。

樂脈膠囊樣品溶液：取20粒樂脈膠囊,取出內容物混勻,精密稱取0.5 g樂脈膠囊內容物,置100 m L的具塞錐形瓶中,精密量取稀乙醇50m L,稱定重量,浸泡兩小時,超聲處理30 min;放冷,稱重,用稀乙醇補足損失的重量,搖均,過濾,精密量取5m L置于25 m L的量瓶中加入稀乙醇至刻度,搖勻,用0.45μm濾膜過濾。

陰性樣品溶液：取缺赤芍陰性樣品粉末,精密稱取0.5 g,按樣品溶液項方法處理。

2 結果

2.1 色譜圖

取芍藥苷標準品溶液、樂脈膠囊樣品溶液和陰性樣品溶液各10μL,按照1.2項條件測試,譜圖如圖1～3。

圖3 缺赤芍陰性樣品溶液Fig.3 Negative sample solution(with no paeony)

2.2 精密度實驗

取芍藥苷對照品溶液10μL,按照1.2項色譜條件,連續進樣6針,計算其峰面積的相對標準偏差RSD為0.33%,說明精密度良好。

2.3 重復性試驗

取混勻的樂脈膠囊內容物粉末,按照1.3項方法,同時制備6份樣品溶液,按照1.2項色譜條件,各取10μL進樣測定,同時對對照品溶液進行檢測,按照外標法定量,6份樣品檢測結果計算相對標準偏差RSD為0.83%,說明重復性良好。

2.4 樣品溶液穩定性試驗

制備樂脈膠囊樣品溶液分別于0、1、2、3、5、6、8、10 h檢測,其峰面積沒有明顯的變化,其相對標準偏差RSD為0.39%,說明該樣品溶液在10 h內穩定。

2.5 線性試驗

取芍藥苷對照儲備液適量,用稀乙醇作為溶劑,配置成濃度分別為6.72μg/m L、10.08μg/m L、13.44μg/m L、20.16μg/m L、26.88μg/m L、67.2 μg/m L、168μg/m L,按1.3項色譜條件,依次分析各標準溶液,以峰面積(A)對進樣量(μg)做圖,繪制相應值與濃度的關系曲線。芍藥苷的線性回歸方程及相關系數分別為：Y=1 374X-912.43,r=0.999 8,線性范圍為6.72μg/m L～168μg/m L。

2.6 回收率試驗

取市售的樂脈膠囊20粒,取出內容物,混勻,共稱取6份,每份為0.25 g,加入芍藥苷儲備液3m L、3m L、3.7 m L、3.7 m L、4.5m L、4.5 m L,按照1.2樣品溶液項方法處理,照1.3項色譜條件檢測,其平均回收率為98.09%,RSD 0.71%。

2.7 樣品測定

取市場上隨機購買5盒樂脈膠囊,按照1.2項樣品溶液方法處理,按照1.3項色譜條件進行含量測定(見表1)。

表1 樂脈膠囊中藥藥苷含量測定結果Tab.1 Determ ination of paeoniflorin in lemai capsule

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

取芍藥苷對照品溶液進行紫外掃描,在紫外波長230 nm有最大吸收,參考2010版藥典樂脈顆粒[2]項下含量測定和相關文獻,選擇230 nm為檢測波長。

3.2 柱溫的選擇

溫度也是影響峰分離度的一個因素,在20℃、25℃、30℃、35℃、40℃對樣品的雜質分離進行考察,發現柱溫對分離度沒有太大的影響,為了使保留時間穩定,不影響柱子的使用壽命,綜合考慮選擇25℃。

3.3 色譜條件的選擇

參考2010版藥典樂脈顆粒項下含量測定和相關文獻[3-4],考察了甲醇-異丙醇-醋酸-水體系,發現壓力較高,而且不同時間配置的流動相檢測樣品時保留時間差異較大,可能是異丙醇洗脫能力強,微小的變化也會引起流動相洗脫能力的較大變化,乙腈-水-冰醋酸體系,主峰峰形拖尾,且與雜質分離不好,經過選擇,最后確定了乙腈-0.2%磷酸溶液10∶90體系,主峰峰形好,并且樣品與雜質能很好的分離。

對該方法進行考察驗證時,各項試驗均滿足藥品含量測定檢測方法的驗證要求,故該方法簡單可行,專屬性強。

[1] 黃逸維,傅超美,胡慧玲,等.清利通膠囊質量標準研究[J].成都醫學院學報,2010,5(2)：141-144.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[M].北京：化學工業出版社,2010：660.

[3] 周麗,高家榮,夏倫祝.HPLC測定樂脈軟膠囊中芍藥苷的含量[J].安徽中醫學院學報,2008,27(1)：52-53.

[4] 杜志謙,王廣強,薛素娟.芍藥苷檢測在中藥質控中的應用[J].時珍國醫國藥,2002,13(9)：57-59.