F344大鼠常見非增殖性病變病理學(xué)觀察

尹紀(jì)業(yè)，董延生，袁本利，瞿文生，余壽忠，原 野，王和枚，丁日高

（軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 毒物藥物研究所國(guó)家北京藥物安全評(píng)價(jià)中心，北京 100850）

動(dòng)物自發(fā)性病變包括非增殖性和增殖性病變， 安評(píng)工作中需要首先排除自發(fā)性病變，因此對(duì)自發(fā)

性病變的認(rèn)識(shí)是安評(píng)工作的基礎(chǔ)。動(dòng)物自發(fā)性疾病的研究受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的普遍重視。F344大鼠非增殖性病變發(fā)病率高，種類多，目前對(duì)該品系自發(fā)性疾病仍缺乏系統(tǒng)的認(rèn)識(shí)。本課題受到國(guó)家科技部重大新藥專項(xiàng)資助，利用我中心屏障環(huán)境單純飼養(yǎng)F344大鼠336只，觀察2年內(nèi)非增殖性病變的種類和發(fā)生率等相關(guān)病理學(xué)背景資料，為藥物安全性評(píng)價(jià)奠定基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物 SPF級(jí)F344大鼠336只，雌雄各半，8周齡，購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司［SCXK（京）2006-0009］。

1.2 實(shí)驗(yàn)分組 按動(dòng)物剖殺時(shí)間分為6、12、18和24個(gè)月組，各組動(dòng)物數(shù)分別為32、64、64、176只。

1.3 飼養(yǎng)條件 在本中心屏障環(huán)境中，動(dòng)物自然生存狀態(tài)，不加任何影響和條件限制，動(dòng)物設(shè)施使用許可證號(hào)SYXK（軍）2007-008。

1.4 病理學(xué)檢查 每組動(dòng)物腹腔麻醉（戊巴比妥鈉，50 mg/kg）后放血處死，處死的動(dòng)物解剖檢查并選取各臟器標(biāo)本。檢查內(nèi)容包括動(dòng)物體質(zhì)、發(fā)育和營(yíng)養(yǎng)狀況等，臟器的位置、大小、色澤、有無粘連，以及臟器的質(zhì)地、有無積液等。

1.5 臟器系數(shù) 取心、肺、肝、脾、腎、胸腺、腎上腺、睪丸或卵巢、附睪或子宮和腦等器官稱重其重量并計(jì)算臟器系數(shù)。

1.6 組織病理學(xué) 試驗(yàn)結(jié)束后，取心、肺、肝、脾、腎、胃、十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸、胰腺、頜下腺、食管、氣管、甲狀腺、甲狀旁腺、胸腺、腎上腺、腸系膜淋巴結(jié)、睪丸、附睪、前列腺、卵巢、子宮、乳腺、皮膚、膀胱、腦（大腦皮質(zhì)、腦干和小腦皮質(zhì)）、垂體、頸髓、視神經(jīng)、主動(dòng)脈（弓）、胸骨骨髓和肌肉及坐骨神經(jīng)等組織10％中性福爾馬林固定。組織經(jīng)充分固定后，逐級(jí)乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，制備4μm切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡檢查。

1.7 診斷依據(jù) 將自發(fā)性病變分為非增殖性病變和增殖性病變，本文重點(diǎn)討論非增殖性病變，診斷術(shù)語和標(biāo)準(zhǔn)參見 Guides for Toxicologic Pathology.STP/ARP/AFIP，Washington，DC。

2 結(jié)果

2.1 大體檢查

大體檢查結(jié)果如表1所示，12個(gè)月開始出現(xiàn)肉眼可見的病理變化，包括垂體淤血腫大，子宮的腫大等，至18個(gè)月、24個(gè)月肝臟、腎臟外觀呈細(xì)顆粒狀改變可能與自發(fā)性炎癥等病變有關(guān)，脾臟多因動(dòng)物患白血病而腫大，睪丸因間質(zhì)細(xì)胞增生或間質(zhì)細(xì)胞瘤出現(xiàn)白色斑點(diǎn)或絮狀外觀。

表1 各組大體檢查出現(xiàn)病變的例數(shù)（n/N） Tab.1 The number of lesions in different group at gross appearance（n/N）

2.2 鏡下檢查結(jié)果

如表2所示，鏡下可見病變隨月齡增加病變種

類和發(fā)病率明顯增加。6、12、18、24個(gè)月病變種類

分別為5、6、9、14，其中24個(gè)月組9種病變發(fā)病率

均在50％以上。如心臟乳頭肌纖維化是鼠進(jìn)行性

心肌病的主要病變，各組發(fā)病率均在，對(duì)每種病變

其范圍和程度都較高，但范圍和程度上6個(gè)月組以輕度為主，局限在心內(nèi)膜淺層，范圍小，12個(gè)月組加重，至24個(gè)月范圍大，達(dá)中重度以上，且多伴隨炎細(xì)胞浸潤(rùn)心肌細(xì)胞變性壞死等改變。大鼠腎臟病變種類多樣，包括腎小管擴(kuò)張，管型，腎小管萎縮，鈣鹽沉積等，在6個(gè)月組可見少量動(dòng)物發(fā)病，24個(gè)月組上述改變加重，且伴有間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤(rùn)等慢性腎病的改變。

表2 各組鏡下檢查非增殖性病變出現(xiàn)的例數(shù)和發(fā)病率（n/N）Tab.2 The number of non-proliferative lesions in different group（n/N）

3 討論

3.1 F344大鼠出現(xiàn)的主要非增殖性病變包括：鼠進(jìn)行性心肌病、支氣管相關(guān)淋巴組織、自發(fā)性腎小管病變、胸腺萎縮和性腺退變等，主要特點(diǎn)及診斷要點(diǎn)簡(jiǎn)述如下。

3.1.1 心肌病理改變：

STP定義為鼠進(jìn)行性心肌病（murine progressive cardiomyopathy），組織學(xué)觀察可見心肌纖維化，常伴有炎細(xì)胞浸潤(rùn)，心肌纖維變性壞死，形成肉眼可見的白色斑點(diǎn)，文獻(xiàn)報(bào)道24個(gè)月大鼠發(fā)病率達(dá)100％［1］。

3.1.2 肺病理改變：

6個(gè)月至24個(gè)月動(dòng)物均可見細(xì)支氣管旁慢性炎癥灶，發(fā)病率分別為 78.1％、62.5％、87.5％、74.7％。為肺間質(zhì)血管旁及細(xì)支氣管旁淋巴細(xì)胞等單核細(xì)胞聚集增生，又稱為支氣管相關(guān)淋巴組織（bronchus-associted lymphoid tissue，BALT）［2，3］。

3.1.3 腎臟病理改變：

自發(fā)性病變以腎小管病變?yōu)橹鳎I小管擴(kuò)張和蛋白管型、腎小管萎縮、色素沉著和鈣鹽沉積等，在6個(gè)月組部分動(dòng)物即可見上述改變，發(fā)病率隨年齡增長(zhǎng)而增加，可能與營(yíng)養(yǎng)等多種因素有關(guān)［4］。

3.1.4 胸腺退行性改變：

12個(gè)月時(shí)可見胸腺的萎縮，胸腺淋巴細(xì)胞數(shù)量減少，至24個(gè)月時(shí)部分萎縮的胸腺會(huì)出現(xiàn)“荒蕪”圖像。3.1.5 生殖器官退行性改變：

24個(gè)月雌性大鼠的可見卵巢退化表現(xiàn)為卵母細(xì)胞變性壞死，成熟卵泡的減少和消失，子宮擴(kuò)張或萎縮，內(nèi)膜增生等改變均較常見。24個(gè)月雄性大鼠睪丸曲細(xì)精管萎縮，生精細(xì)胞減少，間質(zhì)細(xì)胞增生，及前列腺萎縮、上皮增生，炎癥等改變亦較常見。3.2 在本中心屏障環(huán)境及GLP條件下，F(xiàn)344大鼠自發(fā)性疾病種類和發(fā)病率文獻(xiàn)數(shù)據(jù)相差不大，隨動(dòng)物生存期的延長(zhǎng)，動(dòng)物增殖性和非增殖性疾病發(fā)病率均有所增加。12個(gè)月以內(nèi)，大鼠自發(fā)性病變種類少，程度較輕，12個(gè)月以上F344大鼠自發(fā)性疾病種類多病變程度重，24個(gè)月時(shí)病變種類10種以上，發(fā)病率60％以上的就有4種，另外，24個(gè)月腫瘤性病變尤為突出，并成為動(dòng)物死亡的主要原因。

4 結(jié)論

在本中心現(xiàn)有條件下，隨動(dòng)物生存期的延長(zhǎng)，F(xiàn)344大鼠自發(fā)性非增殖性疾病病變程度和發(fā)病率均有所增加，在范圍和程度上有逐漸加重的趨勢(shì)。本實(shí)驗(yàn)豐富了F344大鼠自發(fā)性病變的背景資料，為藥物安全性評(píng)價(jià)提供基礎(chǔ)。作為藥物毒性病理診斷的重要內(nèi)容，非增殖性疾病的認(rèn)識(shí)和研究，將對(duì)藥物毒性病理學(xué)發(fā)展起到重要的作用。

［1］任進(jìn)，榎本真，今井清主編，圖解毒性病理學(xué)［M］.云南出版集團(tuán)公司 .2006年10月第1版，P35.

［2］Pabst R，Gehrke I.Is the bronchus-associated lymphoid tissue （BALT）an integral structure of the lung in normal mammals，including humans?［J］.Am J Respir Cell Mol Biol.1990；3 （2）：131-5.

［3］Renne RA，Dungworth DL，Keenan CM，et al.Non-proliferative lesions of the respiratory tract in rats.R-1.In：Guides for Toxicologic Pathology.STP/ARP/AFIP.Washington，DC.

［4］Chandra M，F(xiàn)rith CH.Non-neoplastic renal lesions in Sprague-Daw ley and Fischer-344 rats［J］.Exp Toxicol Pathol.1994；45 （7）：439-47.