五淋丸中梔子苷含量的研究

2011-01-30 06:39:40謝雄瑞

中國醫(yī)藥指南 2011年6期

魏素謝雄瑞

（河源市藥品檢驗所，廣東河源 517000）

現(xiàn)行五淋丸質量標準收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑第四冊，只有簡單的定性鑒別和檢查。為更好地控制和提高五淋丸的質量，本文根據(jù)五淋丸中梔子含有梔子苷，用反相高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充柱，以乙腈-水（15∶85）為流動相，可準確測定五淋丸中梔子苷的含量[1-5]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters-515高效液相色譜儀（美國公司）；KQ-250DA型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司；功率250W，頻率40kHz）；CP225D電子天平（德國賽多利斯公司）。

梔子苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110749-200410）。五淋丸（廣東國醫(yī)堂制藥有限公司，批號：20060101、20060201、20060301、20060302、20060303、20060304、20060305、20060306、20060307、20060308）。乙腈：色譜純（J.T.Baker）；甲醇：分析純、色譜純（山東禹王實業(yè)有限公司禹誠化工廠）；水為超純水；其他試劑：均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Gemini 5μ C18 110A phenomenex○R色譜柱（250mm×4.6mm 5μm）；流動相：乙腈-水（15∶85）；檢測波長：238nm；流速：1.0mL/min柱溫：25℃。進樣量：20μL。理論板數(shù)按梔子苷色譜峰計為3000，分離度為4.2。

2.2 對照品溶液的制備

取梔子苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL中含30μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

稱取供試品約0.75g，精密稱定，置于50mL容量瓶中，加甲醇50mL，用超聲處理（功率250W，頻率40kHz）60min，取出，放冷，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性對照試驗

按處方和制法，同法制成缺梔子（姜制）藥材的陰性對照樣品，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，按含量測定的方法測定。結果未見陰性對照品溶液對試驗有干擾（圖1）。

2.5 線性關系考察

精密稱取梔子苷對照品25.53mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為梔子苷對照品母液。分別精密吸取對照品母液1、2、3、4、5mL至25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為梔子苷對照品溶液B、C、D、E、F；另精密吸取對照品溶液D2mL至20mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為梔子苷對照品溶液A。分別精密吸取上述梔子苷對照品溶液20μL，分別注入液相色譜儀測定峰面積，以峰面積為縱坐標，梔子苷濃度為橫坐標，繪制曲線，得回歸方程：Y=19509X＋1395.5（r2=0.9999）。結果表明，梔子苷在6.1272-102.12μg/mL范圍內呈良好的線性關系。

圖1 A：梔子苷對照品 B：五淋丸供試品 C：梔子陰性對照

2.6 回收率試驗

精密稱取同一供試品（批號：20060301）約0.375g共6份，分置于50mL容量瓶中，分別精密加入梔子苷對照品溶液（0.19mg/mL）3mL，按“2.3”項下方法制備所需溶液。按照色譜條件測定梔子苷的峰面積，外標法計算，測得梔子苷回收率，結果見表1。

表1 回收率試驗結果

2.7 精密度試驗

精密吸取同一供試品溶液20μL，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進樣6次，測得峰面積，計算RSD為0.7%（n=6）。

2.8 穩(wěn)定性試驗

取同一份供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、24h測定，RSD為1.2%。結果表明，供試品溶液在24h內穩(wěn)定。

2.9 樣品含量測定

對10批樣品進行測定，結果見表2。

3 討論

藥典收載“梔子”含量測定項下的流動相為乙腈-水（15∶85），亦有文獻報導采用甲醇-水（25∶75），對比這兩種流動相，發(fā)現(xiàn)以前種流動相時分離效果較好，故選擇乙腈-水（15∶85）作為流動相。采用50%甲醇提取時提取雖較完全，但陰性有干擾，故選用甲醇為提取溶劑。同時，本實驗還分別采用超聲處理30、45、60、75、90min進行提取，結果表明超聲處理60min時含量最高，故選擇超聲處理60min作為提取方法。