MUC-1與β-Catenin在賁門癌組織中的表達及意義

甄 強 高麗娜 劉家寶

（1 石家莊第一人民醫院胸外科，河北 石家莊 050000；2 河北省人民醫院整形骨二科，河北 石家莊 050000）

世界范圍內，腫瘤尤其是惡性腫瘤的發生和死亡仍呈上升趨勢。食管癌賁門癌是世界常見的六大腫瘤惡性腫瘤之一，從19世紀起，許多專家對食管癌做了深入研究，人們逐漸認識到腫瘤細胞的轉化、演進以及侵襲、轉移等涉及到多種原癌基因的激活和抑癌基因的缺失，以及許多腫瘤相關因子的異常表達。MUC-1作為一種大分子跨膜黏蛋白在人體內多種臟器的腺細胞內均有表達，而其在于賁門癌組織中表達的相關文獻報道甚少。Wen等對體外胰腺癌細胞研究發現，癌細胞中MUC-1過度表達可使核內β-Catenin的穩定性增加[1]。而MUC-1和β-Catenin協同表達在賁門癌組織中發生、發展的研究未見報道。因此研究二者在賁門癌組織中的表達既有理論意義又具有現實意義。

1 材料與方法

1.1 研究對象

本實驗采用河北醫科大學附屬第一人民醫院胸外科2000至2005年70例賁門癌的手術切除標本。所有標本均為福爾馬林固定，常規石蠟包埋。患者均有完整的病理資料可供查詢。年齡39～75歲，其中男27例，女43 例。每例均分別取材癌組織、癌旁組織、遠癌組織。按腫瘤分化程度、TNM分期、淋巴結陽性結果等進行分組。

1.2 方法

采用鏈霉菌抗生物素過氧化酶（SP）免疫組織化學法。所有樣本經體積分數為10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，制成厚 4 μm的切片，60 ℃烘烤，脫蠟，體積分數為 3%過氧化氫滅活內源性過氧化物酶，微波修復抗原，體積分數為10%非免疫血清封閉，加入1∶50的鼠抗人黏蛋白1（MUC-1）單克隆抗體（ZM-0391，克隆系：Ma695為北京中杉金橋生物技術有限公司產品）和鼠抗人β-連接素（β-Catenin）單克隆抗體（ZM-0442，克隆系：CAT-5H10為北京中杉金橋生物技術有限公司產品），4 ℃過夜孵育，PBS液沖洗，滴加1∶300生物素標記二抗，室溫下30min，沖洗，滴加1∶40的SP液，室溫下30min，沖洗后DAB（北京中杉金橋生物技術有限公司）顯色，蘇木素-伊紅（HE）染色，封片。PBS液代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判定

首先通過HE染色在顯微鏡下觀察，確定組織標本的病理分型。免疫組織化學染色在光鏡下閱片，隨意選取5個高倍視野，每視野計數100個，以其平均數作為最后評定。分別由2位病理專業醫師獨立閱片，對有分歧者請第三位專業醫師一同閱片，最后取意見一致者作為判定標準。MUC-1染色陽性判定標準：采用雙盲法以胞質染出黃色或黃棕色為陽性。每例切片隨機記數5個高倍視野（×400倍），每視野計數陽性細胞100個，按陽性細胞所占的百分比，將MUC-1陽性病例分為4級：“-”表示無陽性細胞，“+”表示陽性細胞≤25%，“++”表示陽性細胞數在26%～50%之間，“+++”表示陽性細胞數≥50%，其中“-”和“+”作為MUC-1陰性表達，“++”為低表達，“+++”為高表達。后二者作為陽性表達。其中“-”記1分，“+”記2分，“++” 記3分，“+++” 記4分。然后進行相關統計學分析。β-Catenin染色陽性判定結果：同MUC-1染色陽性判定標準。

1.4 統計學分析方法

基本資料在計算機上經統計軟件SPSS13.0處理，不同率的比較采用行×列表的χ2檢驗，MUC-1與β-Catenin表達之間的關系行相關分析。P＜0.05視為有顯著差異。

2 結 果

2.1 MUC-1的表達

MUC-1多表達于癌細胞的胞質中，為粗細不等的黃色顆粒，或為彌散性胞質染色，MUC-1在遠癌組織賁門黏膜上皮細胞中的陽性表達率為15.71%（11/70），在癌旁組織中的表達率為34.29% （24/70），而在賁門癌中的陽性表達率是54.29%（38/70）。經統計學分析顯示：MUC-1在賁門遠癌組織和癌旁組織中的表達具有顯著性差異（P＜0.05），在癌旁組織與癌組織中的表達有統計學意義（P＜0.05），遠癌組織與癌組織中的表達也同樣具有顯著性差異（P＜0.05） （表1）。在腫瘤大小、分化程度、TMN分期、淋巴結轉移、性別、年齡方面MUC-1的表達則無明顯的差異。

2.2 β-Catenin的表達

β-Catenin同樣多表達于癌細胞的胞質中，為粗細不等的黃色顆粒，或為彌散性胞質染色，β-Catenin在遠癌組織賁門黏膜上皮細胞中的陽性表達率為1.43%（1/70），在癌旁組織中的表達率為41.43%（29/70），而在賁門癌中的陽性表達率是58.57%（41/70）。經統計學分析顯示：三者比較具有顯著性差異（P＜0.05）。β-Catenin在賁門遠癌組織和癌旁組織中的表達具有顯著性差異（P＜0.05），在癌旁組織與癌組織中的表達無統計學意義（P＞0.05），遠癌組織與癌組織中的表達也同樣具有顯著性差異（P＜0.05）（表2）。在腫瘤大小、分化程度、TMN分期、淋巴結轉移、性別、年齡方面MUC-1的表達則無明顯的差異。

2.3 MUC-1與β-Catenin之間的關系

在賁門癌組織中，38例MUC-1陽性表達中β-Catenin的陽性表達率為81.58%（31/38），41例β-Catenin陽性表達中MUC-1陽性表達率為75.61%（31/41），二者陽性表達一致率為75.71%。兩者之間既有回歸關系也具有相關關系（表3）。

表1 MUC-1在不同組織部位的表達

表2 β-catenin在不同組織部位的表達

表3 MUC-1與β-catenin的相關性

3 討 論

本實驗應用免疫組織化學的方法，對賁門癌、癌旁組織、和遠癌組織中的黏蛋白-1（MUC-1）和β-連環蛋白（β-Catenin）的表達進行檢測。研究腫瘤增殖活性，與免疫組織化學的方法加以對照，研究了上述兩種因子在賁門癌發生、發展中的作用，并結合臨床、病理資料分析其相關性得到以下幾點：①MUC-1的表達在遠癌組織及癌旁組織中有顯著差異，在癌旁組織與癌組織及遠癌組織與癌組織中表達均有差異。越接近癌中心MUC-1表達越明顯。說明在賁門癌的發生中MUC-1有促癌作用。其表達與賁門癌的侵襲性有關。②MUC-1的表達在不同的TNM分期中無差異，與分化程度、淋巴結轉移、腫瘤大小、年齡、性別等諸多因素無明顯關系。③β-Catenin的表達在遠癌組織及癌旁組織中有顯著差異，在遠癌組織與癌組織中表達有顯著差異，而在癌旁組織與癌組織中表達無明顯差異。說明β-Catenin可能在賁門腫瘤早期發生、發展過程中起作用。④β-Catenin的表達在不同的TNM分期中無差異，與分化程度、淋巴結轉移、腫瘤大小、年齡、性別等諸多因素無明顯關系。⑤本組研究證實MUC-1與β-Catenin二者陽性表達一致率為75.71%。在癌組織的表達中兩者之間具有相關關系，且為正相關。說明MUC-1和β-Catenin不僅可單獨作為賁門癌生物學行為的標記，而且二者在賁門癌表達中具有協同作用。

大量研究表明[2-4]，MUC-1可以的通過Wnt信號通道輔助活化因子作用促進Wnt/β-Catenin信號通道異常活化，從而促進β-Catenin對腫瘤細胞增殖的調控。本研究顯示在賁門癌發生、發展和局部轉移過程中MUC-1與β-Catenin兩種因子均發揮著重要作用，而且二者在賁門癌的發展過程中的陽性表達具有協同一直性。實驗結果也有利于我們更好的認識賁門癌發生的分子生物學機制，并可以進一步擴展到其他腫瘤中，提高人們對腫瘤的認識。

[1]董志偉,谷銑之.臨床腫瘤學[M].北京：人民衛生出版社,2002：659-662.

[2]Shiozaki H,Oka H,Inoue M,et al.E-cadherin mediatedadhesion system in cancer cells[J].Cancer,1996,77(8)：1605-1613.

[3]Utsunomiya T,Yonezawa S,Sakamoto.H,et al .Expression of MUC-1 and MUC-2 mucins in gastric carcinomas：its relationship with the prognosis of the patients[J].Clin Cancer Res,1998,4(11)：260.

[4]Takao S,Uchikura K,Yonezawa S,et al.Mucin core protein expression in extrahepatic bile duct carcinoma is associated with metas-tases to the liver and poor prognosis [J].Cancer,1999,86(10)：1966.