HPLC法測定牛膝膠囊中β-脫皮甾酮的含量

陳玉敏* 曹 紅 水彩紅

（總后衛生部藥品儀器檢驗所，北京 100071）

牛膝膠囊由從牛膝提取物制成的膠囊劑，具有扶正補益，補肝腎，強筋骨[1-3]。用于預防和治療因機體受到放射物質或化學物質損傷引起的白血球下降[4-7]。為了有效控制制劑質量，本文建立了HPLC法測定方中牛膝中β-脫皮甾酮的含量。

1 儀器與試藥

儀器：島津LC-20A高效液相色譜儀。試劑：甲醇為色譜純級；水為雙重蒸餾水。對照品：β-脫皮甾酮（批號：111638-200402中檢所提供）。樣品：牛膝膠囊（批號100101，100102，100103），自制。

2 實驗方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：SHIMADZU VP-ODS（5μm，150×4.6mm）；流動相：甲醇-水（40∶60）；檢測波長：250nm（帶寬4nm）；流速：1.0mL/min；柱溫：40℃。

2.2 對照品溶液及供試品溶液的制備

對照品溶液的制備：取β-脫皮甾酮對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lmL含20μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備：取裝量差異項下的本品適量，研細，取0.5g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加甲醇25mL，稱定重量，超聲處理（功率300W，頻率40kHz）30min，放冷，再稱定重量，以甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3 專屬性試驗（陰性對照試驗）

陰性樣品的制備：按處方比例組不含牛膝藥材的方，按樣品制備工藝制成陰性對照的制劑，再按供試品溶液制備方法處理，即得。

按樣品測定的色譜條件進樣，對照品、樣品、陰性對照的液相色譜圖1～3如下，陰性對照無干擾峰。

2.4 線性關系

取β-脫皮甾酮對照品制成不同濃度對照品溶液，分別精密吸取對照品溶液10mL，注入高效液相色譜儀，按樣品測定色譜條件測定，以峰面積積分值為縱坐標，進樣量（μg）為橫坐標，繪制標準曲線，計算。

回歸方程：Y=1589.9X-2848.9，相關系數r=1（n=5）。

結果表明β-脫皮甾酮在40～400mg范圍內呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

精密吸取β-脫皮甾酮對照品溶液10μL，重復進樣5次，測定，結果RSD分別為0.05%，表明精密度良好。

2.6 穩定性試驗

取供試品溶液，在室溫條件下，于0、2、4、6、8、10h，測定含量，β-脫皮甾酮測定結果的RSD為0.09%，表明樣品溶液較穩定。

圖1 β-脫皮甾酮對照品HPLC色譜圖

圖2 樣品HPLC色譜圖

圖3 陰性對照HPLC色譜圖

2.7 重復性試驗

取牛膝膠囊（100101），精密稱取6份，平行操作，進行液相分析，樣品中β-脫皮甾酮平均含量為：RSD為1.76%，具良好重復性。

2.8 回收率試驗

采用加樣回收，精密稱取已知含量的牛膝膠囊（100101）0.25g，精確加入相當量的β-脫皮甾酮對照品，依法操作，測定牛膝膠囊中β-脫皮甾酮含量，計算回收率，測定結果見表1。

表1 樣品中β-脫皮甾酮的加樣回收率試驗結果

2.9 樣品測定

取牛膝膠囊3批，依法進行含量的測定，β-脫皮甾酮的含量結果見表2。

表2 牛膝膠囊中β-脫皮甾酮含量測定結果

3 討 論

3.1 收集β-脫皮甾酮對照品及樣品溶液光譜，在250nm處有最大吸收，因此選用250nm為檢測波長。

3.2 試驗選用甲醇、乙醇、無水乙醇作為提取溶媒進行比較，提取方法及含量測定方法相同，以甲醇為提取溶媒含量較高，選擇甲醇作為測定牛膝中β-脫皮甾酮的溶劑。

3.3 提取方法分別采用超聲提取15、30、45min，熱回流提取30min，測定方法相同，以超聲提取30min含量較高，選用甲醇作為提取溶媒、超聲提取30min的提取方法作為測定牛膝中β-脫皮甾酮的方法。

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