鹽酸巴尼地平β-環糊精包合物的制備

李艷

(華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院藥學部，武漢 430030)

高血壓用藥的研制一直是新藥開發的重點和熱點，鈣離子阻滯藥是公認的重要一線抗高血壓藥，其中二氫吡啶類鈣拮抗劑因其降壓療效和降壓幅度相對較強，而療效個體差異較小，近年來得到快速發展。鹽酸巴尼地平(barnidipine hydrochloride，BN)是新型長效二氫吡啶類鈣離子拮抗劑，由于該藥水溶性差，脂溶性強，首關效應較明顯，口服生物利用度低，從而大大影響了療效［1］。目前市場上劑型比較單一，只有膠囊和片劑，因此開發新型藥物給藥系統是研究的關鍵。環糊精包合技術在藥劑學中應用日益廣泛，能增加難溶性藥物的溶解度，筆者擬通過采用 β-環糊精(βcyclodextrin，β-CD)包合技術［2］，對 BN-β-CD 包合物的制備工藝進行優化，確定最佳制備工藝條件，并對制得的包合物進行鑒定和溶出度測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 DF-101T型集熱式恒溫加熱磁力攪拌器(鞏義市予華儀器有限責任公司)，SHZ-E-14小型循環水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責任公司)，UV-754型紫外可見分光光度計(上海分析儀器廠)，Diamond DSC(美國 Perkin Elmer公司)，VERTEX70傅立葉變換顯微紅外/拉曼光譜儀(德國Bruker公司)，RC806型智能藥物溶出儀(北京中西泰安技術服務有限公司)。

1.2 試藥 鹽酸巴尼地平原料藥(含量99.86%，武漢福鑫化工有限公司，批號:20100806)，β-CD(含量99.58%，武漢遠河化工股份有限公司，批號:20100612)，甲醇(色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司)，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 包合物藥物含量的測定

2.1.1 測定波長的選擇 精密稱取鹽酸巴尼地平對照品適量，加入10%甲醇水溶液，配制成一定濃度的鹽酸巴尼地平溶液，在200～400 nm波長范圍進行掃描，結果表明鹽酸巴尼地平在355 nm處有強吸收峰，輔料β-CD在此波長無吸收。因此確定355 nm為測定波長。

2.1.2 標準曲線的繪制 精密稱取鹽酸巴尼地平對照品5 mg，置于50 mL的棕色量瓶中，加入甲醇5 mL使之完全溶解后，純化水定容，即得鹽酸巴尼地平貯備液。分別精密吸取貯備液 0.2，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，置于10 mL棕色量瓶中，加水定容至刻度，鹽酸巴尼地平濃度分別為 2.0，10.0，20.0，30.0，40.0，50.0 μg·mL-1的 水溶液。以純化水作空白對照，在波長355 nm處測其吸光度(A)，以濃度(C)對A做線性回歸，得標準曲線方程為 A=0.013 2C+0.015，r=0.999 9。表明鹽酸巴尼地平在 2.0 ～ 50.0 μg·mL-1范圍內線性關系良好。

2.1.3 回收率實驗 分別稱取處方量的鹽酸巴尼地平和β-CD，溶解在混合溶劑(10%甲醇)中，得低、中、高 3 個濃度(2.00，25.00，48.00 μg·mL-1)的鹽酸巴尼地平溶液，每個濃度平行3份，按“標準曲線的繪制”項下方法測定，求得濃度與實際濃度相比得到相對回收率。低、中、高濃度的回收率分別為99.3%，101.8% 和 100.5%，RSD 分別為 0.08%，0.12% 和0.15%(n=5)。

2.1.4 精密度實驗 分別配制低、中、高三個濃度(2.00，25.00，48.00 μg·mL-1)的鹽酸巴尼地平溶液，分別測定日內及日間精密度。測得日內精密度RSD分別為1.51%，0.96% 和 0.88%(n=5)，日間精密度RSD 分別為 1.78%，1.02%和 0.81%(n=5)。

2.2 載藥量和包合率的測定 精密稱量制備的包合物凍干粉(約50 mg)置于25 mL的量瓶中，用純化水溶解并稀釋至刻度，搖勻。取上述溶液5 mL，0.22μm微孔濾膜過濾，精密吸取續濾液，用純化水稀釋一定倍數，作為供試品溶液。以含處方量的輔料溶液為空白，按“標準曲線的繪制”項下方法測定，代入標準曲線計算鹽酸巴尼地平的含量(W包)。包合物的包合率和載藥量按照下列公式計算:包合率(%)=W包/W投×100%，載藥量(%)=W包/W總×100%，W總表示稱量的包合物質量，W投表示鹽酸巴尼地平的投入量。

2.3 包合物的制備 根據相關文獻［3-7］，采用飽和水溶液法制備BN-β-CD包合物。步驟如下:精密稱取適量β-CD加純化水置于燒杯中，加熱溶解，制成飽和溶液。將鹽酸巴尼地平緩慢加入飽和的β-CD溶液中，恒溫攪拌一定時間后，取出，置冰箱中冷藏24 h，抽濾分離包合物，置真空干燥器中干燥24 h，即得BN-β-CD包合物。

2.4 正交實驗設計 根據前期預實驗結果，影響BN-β-CD包合物制備的主要因素有:鹽酸巴尼地平與β-CD的投料摩爾比(A)，攪拌速度(B)、包合溫度(C)和包合時間(D)。按照L9(34)正交實驗設計方案，對載藥量和包合率加權綜合評分，賦予包合物載藥量的權重因子為0.7，包合率為0.3進行綜合評分計算。將包合物載藥量中最大值(18.31)設定為100，包合率中最大值(80.81)設定為100，計算公式為:Y=(Y1+100－18.02619)×0.7+(Y2+100-81.34055)×0.3。因素水平表結果見表1，正交實驗結果見表2。

表1 正交實驗因素水平表Tab.1 Factors and levels of orthogonal experiment

表2 正交實驗結果Tab.2 Results of orthogonal experiment

表3 方差分析結果Tab.3 Results of ANOVA

由正交實驗表結果可知，A、C為主要影響因素，最佳制備工藝為A2B3C3D2，即鹽酸巴尼地平與β-CD的投料摩爾比為1:2，攪拌速度為200 r·min-1，包合溫度為70℃，包合時間為2 h。由方差分析結果可知，因素A(主客分子投料摩爾比)對包合物的載藥量和包合率有顯著性影響(P＜0.05)。

2.4 驗證性實驗 根據最佳工藝處方，采用飽和水溶液法制備BN-β-CD包合物樣品3批，依法測定包合物的包合率和載藥量，考察制備工藝的重現性。3批樣品的平均包合率80.57%，RSD=0.92%;平均載藥量為17.66%，RSD=0.67%，結果表明該制備工藝重現性好，穩定可行。

2.5 包合物的確證

2.5.1 紅外光譜測定 采用溴化鉀壓片法，對BN原料藥、β-CD，BN-β-CD 包合物、BN 和 β-CD 的物理混合物分別進行紅外光譜測定。由光譜圖可知，BN物理混合物的圖譜基本為BN與β-CD兩組份圖譜的疊加，在1 696 cm-1有強羰基吸收峰，而在BN-β-CD包合物的圖譜中，1 696 cm-1處的羰基峰完全消失，說明BN分子已經被包埋于β-CD的空腔內，形成新的物相。

2.5.2 差示掃描量熱法(differential scanning calorimetry，DSC) 將 β-CD、BN 原料藥、BN-β-CD 包合物及物理混合物置于空鋁坩堝樣品池中進行掃描，結果BN約235出現一個尖銳的熔融峰，在物理混合物的DSC圖譜中，該峰仍然存在，而在BN-β-CD包合物的DSC圖譜中，該峰消失，與藥物的圖譜有明顯的差異，說明β-CD已經包合藥物。

2.5.3 溶出度的測定 精密稱取一定量的BN以及相應含藥量的物理混合物、BN-β-CD包合物各3份，根據《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄溶出度漿法測定溶出度，分別考察了水、0.1 ol·L-1鹽酸和pH 6.8的磷酸鹽緩沖液的 BN-β-CD包合物溶出情況，結果表明:BN-β-CD 包合物在水中和0.1 ol·L-1鹽酸中溶出較好，溶出結果相似，筆者在本研究選擇最常用的純化水作為溶出介質。測定條件為:溶出介質為經脫氣處理的純化水 900mL，調節轉速為100 r·min-1，水溫恒定在(37.0±0.5)℃，于 5，10，15，20，30，45，60，90，120，180 min 取樣 5 mL，經 0.22μm微孔濾膜過濾后，棄去初慮液，取續濾液做為供試品，在自取樣至濾過均須在30 s內完成，同時立即補加同溫等量的溶出介質5 mL。樣液于分光光度計測定A值，代入標準曲線計算濃度，累積溶出百分率(%)=(已溶出的 BN的量/樣品中藥物的實際含量)×100%。實驗結果表明，藥物BN在180 min內僅溶出15.56%，BN與β-CD物理混合物在水中的溶出度為32.60%，該結果表明β-CD對藥物BN具有一定的增溶作用。而包合物在15 min能溶出98.52%，溶出速率得到顯著提高。

3 討論

筆者在本研究利用正交實驗設計，采用飽和水溶液法優化鹽酸巴尼地平β-CD包合物的制備工藝，得出最佳工藝條件為:即鹽酸巴尼地平與β-CD的投料摩爾比為1∶2，攪拌速度為200 r·min-1，包合溫度為70℃，包合時間為2 h。同時對包合物物相進行了鑒定，紅外光圖譜證實在包合物的形成的過程中，β-CD與鹽酸巴尼地平發生了作用，形成了新的物相。同時，示差掃描量熱法也驗證β-CD包合了藥物鹽酸巴尼地平。為了進一步考察鹽酸巴尼地平經β-CD包合后，對鹽酸巴尼地平溶出行為的影響。本研究平行測定原料藥、包合物和物理混合物的溶出速率。結果表明，藥物BN在180 min內僅溶出15.56%，物理混合物在水中的溶出度為32.60%，而包合物在15 min能溶出98.52%，結果表明β-CD對藥物BN具有一定的增溶作用，而制備的包合物溶出速率顯著提高。

目前，鹽酸巴尼地平只有膠囊和片劑上市，劑型比較單一，國內有關鹽酸巴尼地平新型給藥系統開發報道也不多［8］，筆者擬以提高鹽酸巴尼地平的溶解度和溶出速率為目的，為鹽酸巴尼地平新制劑的開發提供一定的思路和基礎。

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