接塵工人血清中抗核因子、人抗中性粒細胞漿抗體水平的檢測

王明君，孫雁玲，汪涵，姚武，郝長付

(1.中國平煤神馬能源化工集團有限責任公司醫療集團 河南 平頂山 467000;2.鄭州大學公共衛生學院勞動衛生與職業病學教研室 河南 鄭州 450001)

塵肺病是目前中國職業病中最嚴重的一類，但迄今為止，國內外已經對塵肺病進行了大量的相關研究，但塵肺病的形成機制目前還不十分清楚，另外，在塵肺病的早期預防、早期診斷以及接塵人群監測等方面也依然缺乏有效的檢測指標，因此，積極預防并盡早診斷對于增進病人生存質量及延長壽命尤為重要［1］。Otsuki［2］等認為矽肺的發生與免疫系統的調節變化密切相關，Wu等［3］認為塵肺病的發生之前可能出現CD4+CD25+調節的T細胞減少。總之，在塵肺發病過程中，塵肺患者機體免疫功能異常已屬無疑，但還有些問題尚未得到解答，為了探討自身免疫抗體在塵肺病發生、發展中的意義，進一步篩選塵肺病相關生物標志物，本研究以接塵工人為研究對象，采用ELISA法檢測研究對象血清中抗核因子(ANA)、人抗中性粒細胞漿抗體(cANCA)的表達水平，探討其變化水平與粉塵暴露之間的可能關聯。

1 對象和方法

1.1 研究對象 接塵組:河南省某煤業集團119例男性煤礦工人，年齡21～59歲，平均年齡為:(38.61±8.99)歲;接塵年限1～36年，平均年限為(17.74±9.92)年。對照組:鄭州大學第一附屬醫院男性健康體檢者84例，無粉塵接觸職業史，均排除心、腦、肝、腎等臟器的纖維化性疾病以及免疫疾病，年齡25～53歲，平均年齡為(45.50±9.55)歲。研究對象均知情同意。

1.2 樣品采集 全部研究對象取清晨空腹靜脈血3 ml，靜置 30min后，離心分離血清(3 000r/min，10min)，置－20℃保存待用。

1.3 自身免疫抗體的檢測 采用雙位點夾心酶聯免疫吸附法(ELISA法)測定血清自身免疫抗體ANA、cANCA的含量，自身免疫抗體試劑盒由安迪生物科技(上海)有限公司生產，操作均嚴格按照說明書進行，質量控制和定標結果均在要求范圍內。

①分別設空白孔、標準樣品孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品孔中加入標準品50μl;在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。每空加入酶標試劑50μl，空白孔除外。輕輕晃動搖勻，37℃溫育60min。

②棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，震蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干，如此重復5次，拍干。

③每孔加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩均勻，37℃避光顯色1 min。

④取出酶標板，每孔加終止液50μl，終止反應。

⑤測定:以空白孔調零，在450nm波長下測量各孔的吸光度值。測定應在加終止液后15 min內進行。

⑥根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。由于樣品經過稀釋，所以其實際濃度應再乘以總稀釋倍數。

⑦根據試劑盒說明書自身免疫抗體陽性判斷的閾值為 ANA 562.5 ng/L、cANCA 375 ng/ml。

1.4 統計學方法 采用SPSS 12.0統計軟件包對數據進行統計學處理，計數數據以()表示，進行t檢驗和單因素方差分析，計量數據以四格表形式表示，進行χ2檢驗，檢驗水準為α=0.05。

2 結果

2.1 接塵組與對照組血清中自身免疫抗體 ANA、cANCA含量和陽性率的比較 由表1可見，接塵組血清中自身免疫抗體ANA、cANCA的表達水平均高于接塵組，差異均有統計學意義(P＜0.05)。由表2可見，接塵組血清中自身免疫抗體ANA、cANCA表達的陽性率高于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)。

表1 接塵組與對照組血清自身免疫抗體ANA、cANCA含量()

表1 接塵組與對照組血清自身免疫抗體ANA、cANCA含量()

注:*方差齊性檢驗P＜0.05，方差不齊;#方差齊性檢驗P＞0.05，方差齊。

組別 n ANA(ng/L) cANCA(ng/L)接塵組0.001 0.001 119 401.79 ±96.11 356.68 ±123.16對照組 84 268.85 ±85.61 174.77 ±85.22 t 11.700# 18.445*P

表2 接塵組與對照組血清自身免疫抗體ANA、cANCA陽性率的比較

2.2 接塵組血清中自身免疫抗體含量與年齡的相關性分析 由表3可見，自身免疫抗體ANA、cANCA在接塵組中各年齡組間的含量差異無統計學意義(P＞0.05)，進一步進行相關分析(見表4)，接塵組自身免疫抗體 ANA、cANCA含量與年齡無相關性(P＞0.05)。

表3 接塵組不同年齡工人血清自身免疫抗體含量()

表3 接塵組不同年齡工人血清自身免疫抗體含量()

年齡(歲) n ANA(ng/L) cANCA(ng/ml)＜41 61 405.07 ±12.41 348.19 ±13.9041～ 58 398.34 ±12.60 365.61 ±18.03 t 0.723 0.770P 0.471 0.443

表4 接塵組工人血清中自身免疫抗體ANA、cANCA含量與年齡的相關性

2.3 接塵組血清中自身免疫抗體含量與工齡的相關性分析 由表5可見，自身免疫抗體ANA、cANCA在接塵組不同接塵工齡層間血清含量的差異無統計學意義(P＞0.05)。由表6可見，自身免疫抗體ANA、cANCA在接塵組血清中的含量與工齡無相關性(P＞0.05)。

表5 接塵組不同接塵工齡血清中自身免疫抗體含量()

表5 接塵組不同接塵工齡血清中自身免疫抗體含量()

接塵工齡(y) n ANA(ng/L) cANCA(ng/ml)＜11 40 386.48 ±115.55 350.28 ±110.9011～ 22 399.81 ±65.63 361.63 ±107.53 21～ 57 416.40±90.14 359.26 ±137.90F 1.202 0.083 P 0.304 0.920

表6 自身免疫抗體ANA、cANCA在接塵組血清中的含量與工齡的相關性

3 討論

塵肺是一種肺纖維化疾病，它的發生發展與機體自身內外因素密切相關，纖維化實質上是機體對肺損傷的一種修復機制，與多種纖維化有關的自身免疫抗體密切相關，它們的表達反映了受損害程度的大小，預示了疾病發展的結局，在早期的異常表達亦可做為判斷預防控制疾病的預警信息。塵肺患者出現自身抗體，其機理可能與巨噬細胞的吞噬活動有關，煤塵細胞的毒作用使巨噬細胞吞噬煤塵后變性、壞死、崩解，巨噬細胞的自身崩解，使細胞核內多種抗體成分暴漏，產生自身免疫抗體，自身抗體含量的升高可反映機體免疫應答的失調。煤礦工人塵肺和進行性大塊肺纖維化的血清學變化顯示塵肺患者的自身免疫抗體水平比正常人高的多，本次研究的目的就在于探討自身免疫抗體ANA、cANCA在塵肺病早期變化中表達水平的變化及其意義，探討其做為肺纖維化早期診斷指標的可能性。

cANCA是一組以中性粒細胞漿成分為抗原的自身抗體，已證明對很多疾病有診斷價值，并認為有致病作用。cANCA的主要靶抗原存在于中性粒細胞的嗜天青顆粒中，不同的抗原各有不同的生化功能，往往與臨床上不同的疾病有關［4］。ANA包含一組自身抗體，無種屬和器官特異性，見于多種疾病，缺乏特異性。在自身免疫性疾病中，細胞核常成為自身免疫反應的靶子。ANA主要是指對核內成分所產生的抗體，此外也包括對核內成分相同的物質所產生的抗體［5，6］。

本研究結果表明接塵工人血清ANA、cANCA含量高于對照組，同時接塵組表達水平的陽性率也高于對照組。研究結果表明，這2種與免疫性疾病有關的抗體分子可能與粉塵暴露之間存在一定的關系，有成為粉塵暴露生物監測指標的可能性，但其具體機制尚不明確，仍需進行進一步的研究。但其與年齡和接塵工齡之間未發現相關性，即與粉塵暴露量之間的關系尚不能明確，這需要在以后的研究中收集詳細的粉塵暴露資料來闡明。

總之，接塵工人體內存在自身免疫抗體水平的變化，可以進一步證明塵肺病患者機體存在免疫功能的異常變化。因此，自身免疫抗體指標有成為粉塵暴露監測，甚至做為早期篩查高危人群生物學指標的可能性，值得進行深入的研究。這對于提高接塵工人及塵肺病患者健康監護、生物監測和早期預警水平，提高預防控制效果，具有一定的的實際意義。

［1］金泰廙，孫貴范.職業衛生與職業醫學.第6版.北京:人民衛生出版社，2008.182-184.

［2］Otsuki T，Maeda M，Murakami S，et al.Immunological effects of silica and asbestos［J］.Cell Mol Immunol，2007，4(4):261-268.

［3］Wu P，Miura Y，Hyodoh F，et al.Reduced function of CD4+CD25+regulatory T cell fractions in silicosis patients［J］.Int J Immunopathol Pharmacol，2006，19(2):357-368.

［4］李莉，吳若芬.抗中性粒細胞胞漿抗體的檢測及意義［J］.寧夏醫學雜志，2006，28(6):205-207.

［5］劉勝勇，張冬平，李學軍.抗平滑肌抗體、抗核抗體與慢性乙肝肝纖維化程度相關性研究［J］.中國現代醫生，2008，46(3):450-453.

［6］王自正.現代醫學標記免疫學［M］.北京:人民軍醫出版社，2000.127-128，277-284.