氨來呫諾含片的制備與質量控制*

符旭東，劉祖雄，李瑞花

(1.廣州軍區武漢總醫院藥劑科，430070;2.咸寧學院藥學院臨床藥學系，437100)

復發性口腔潰瘍是臨床常見口腔黏膜病，目前尚無特效治療方法［1］。復發性阿弗他潰瘍(recurrent aphthous ulcer，RAU)發病率約20%，其中輕型阿弗他潰瘍(minor aphthous ulcer，MAU)約占80%。RAU疼痛明顯，反復發作，且缺乏特效治療方法，嚴重影響患者生活質量。因此，尋找安全、有效、方便的局部用藥很有必要［2］。氨來咕諾(amlexanox)是抗炎抗變態反應藥，由武田公司于1987年在日本開發上市［3］，是治療復發性阿弗他口腔炎(recurrent aphthous stomatitis，RAS)的一種有效藥物，1996年美國食品藥品管理局批準該藥作為治療有免疫活性的口腔潰瘍疾病的首選藥物。氨來呫諾可抑制白三烯生成，防止組胺的游離，從而起到抗炎作用［4］。

目前國內有氨來呫諾糊劑和貼片上市。但氨來呫諾糊劑在口腔黏膜局部貼附時間較短(1.0～1.5 h)，且糊劑中加入了液體石蠟，影響口感。貼片的口感較糊劑有改善，但異物感明顯。將氨來呫諾制成含片，既能增加藥物在病變部位的滯留時間，又可以改善糊劑和口腔貼片使用過程中的不適感，能夠增加患者的依從性，而且含片的制備工藝更簡單，更容易實現制劑的批量配制。為此，筆者開發了氨來呫諾的新劑型、新工藝，制備了氨來呫諾含片，并建立了質量控制方法，現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 1100HPLC儀，AB204-N型電子分析天平(瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司)，78X-2B型片劑四用測定儀(上海黃海藥檢儀器有限公司)，RC-806型溶出實驗儀(天津市天大天發科技有限公司)，BY-300A片劑硬度計(上海黃海藥檢儀器有限公司)，CH-30型混合機(武昌隆昌制藥機械廠)，CT-C-IA型熱風循環烘箱(江蘇一步干燥設備有限公司)，VFP-9型旋轉式變速壓片機(常州市龍城晨光藥化機械公司)，DPB-88型自動鋁塑包裝機(浙江瑞安華聯制藥機械股份有限公司)。

1.2 試藥 氨來呫諾對照品及原料(山東科源制藥有限公司，批號:1001001，純度:99.2%)，甘露醇原料(mannitol，青島明月海藻集團有限公司，批號:100806029)，羥丙甲基纖維素(HPMC-K4M，上海卡樂康包衣技術有限公司，批號:080703)，卡波姆(CP-940，固安希星藥業有限公司，批號:20090101)，硬脂酸鎂原料(magnesium stearate，安徽山河藥用輔料有限公司，批號:090320)，二氧化硅原料(aerosil，安徽山河藥用輔料有限公司，批號:090301)，乙醇(ethanol，湖南九典制藥有限公司，批號:F12101004)，純化水(purified water，廣州軍區武漢總醫院藥劑科自制)，磷酸二氫銨(ammonium phosphate monobasic，天津市廣成化學試劑有限公司，分析純，批號:20080521)，甲醇(methanol，國藥集團化學試劑有限公司，色譜純，批號:T20100824)。

2 處方與制備

2.1 處方 氨來呫諾2.0 g，甘露醇17.5 g，羥丙甲基纖維素(k4M)22.5 g，卡波姆 940 7.5 g，硬脂酸鎂0.5 g，二氧化硅0.5 g，30% 乙醇適量，制成 1 000 粒。甘露醇為填充劑，羥丙甲基纖維素(k4M)、卡波姆940為粘合劑，硬脂酸鎂為潤滑劑，二氧化硅為助流劑，30%乙醇為潤濕劑。

2.2 制備工藝及操作要求 分別稱取氨來呫諾［過篩孔內徑0.180 mm(80目)篩］、羥丙甲基纖維素(k4M)、卡波姆940、甘露醇，依照等量遞加，分次加入，初步混合。將30%乙醇加入上述混合的物料中，制成適用于制粒的軟材，過篩孔內徑1.18 mm(16目)篩制粒，將制好的濕顆粒烘干至含水1% ～3%，過篩孔內徑0.850 mm(20目)篩整粒;再加入處方量硬脂酸鎂和二氧化硅混合均勻。混勻后的顆粒經含量測定后計算片質量，按每片含氨來呫諾2 mg壓片，制得的素片應完整光潔，硬度＞80 N。生產過程中注意將空氣濕度盡量控制在＜50%。將制得的片劑按每板7片的規格進行鋁塑壓膜包裝。

3 質量控制

3.1 含量限度 本品含氨來呫諾(C16H14N2O4)應為標示量的90.0% ～110.0%。

3.2 性狀 本品為白色或類白色片。

3.3 檢查

3.3.1 含量均勻度 取本品1片，置100 mL量瓶中，加甲醇約35 mL，置80℃水浴加熱15 min，充分振搖，使藥物溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，置冰箱冷藏室中30 min，取出立即過濾。取經孔徑0.45μm微孔濾膜濾過的續濾液進樣，按含量測定項下方法測定，應符合《中華人民共和國藥典》2010版二部附錄X E規定。3批樣品的含量均勻度檢查結果分別為10.3，9.8，10.2。3 批樣品的 A+1.80S 均≤15.0，含量均勻度符合規定。

3.3.2 溶化性 照《中華人民共和國藥典》2010版二部附錄X A崩解時限檢查法檢查，10 min內不應完全崩解或溶化。3批含片10 min內均沒有全部崩解或溶化，結果符合規定。

3.3.3 脆碎度檢查 依照《中華人民共和國藥典》2010版附錄脆碎度檢查法XG檢查，3批含片的減失質量分別為0.2%，0.1%和 0.2%，均＜1%，符合標準規定。

3.4 含量測定 照《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄ⅤD高效液相色譜法測定。

3.4.1 色譜條件與系統適用性實驗 色譜柱為漢邦Lichrospher C18(250 mm ×4.6 mm，5μm)，甲醇-0.01 moL·L-1磷酸二氫氨溶液(70∶30)為流動相，流速1.0 mL·min-1，檢測波長350 nm，柱溫25 ℃，進樣體積20 μL。理論塔板數按氨來呫諾計算應不低于2 000。

3.4.2 供試品溶液的制備 取本品20片，精密稱定，研細，精密稱定適量(相當于氨來呫諾10 mg)，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇約35 mL，置80℃水浴加熱15 min，充分振搖，使藥物溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，置冰箱冷藏室中30 min，取出立即過濾，精密量取續濾液5 mL，置于50 mL量瓶，加流動相稀釋至刻度，搖勻，用孔徑0.45μm微孔濾膜濾過，續濾液作為供試品溶液。

3.4.3 對照品溶液的制備 取氨來呫諾10 mg，精密稱定，置50 mL量杯中，加甲醇約35 mL，超聲使藥物溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置25 mL量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用孔徑0.45μm微孔濾膜濾過，制成每毫升含氨來呫諾20 μg的溶液，對照品溶液。

3.4.4 陰性對照溶液 按處方組成比例，制備不含氨來呫諾的陰性對照樣品，再按供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。

3.4.5 專屬性實驗 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各20 μL，按照“3.4.1”項下的色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果供試品在與氨來呫諾對照品色譜相應的位置上出現相同的色譜峰，而陰性對照液在與對照品相同保留時間處無色譜峰出現，表明陰性對照無干擾。

3.4.6 線性關系考察 精密稱取氨來呫諾對照品10 mg，加甲醇適量，超聲處理5 min，使溶解并定容至100 mL，配制成100 μg·mL-1作為標準儲備液。分別精密量取不同體積的標準儲備液 0.25，1.5，3.0，4.5，6.0 mL，置25 mL容量瓶，加甲醇稀釋成濃度分別為1，6，12，18，24 μg·mL-1標準溶液，精密吸取各溶液20 μL，注入液相色譜儀中測定。以標準稀釋液的濃度為橫坐標，以氨來呫諾峰面積為縱坐標，繪制標準曲線并進行線性回歸，得方程:Y=10 103X+1 347.2，R2=0.999 8。結果表明氨來呫諾在 1 ～24 μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。

3.4.7 重復性實驗 精密制備同一批號(批號:20091111)樣品溶液6份，照給定的色譜條件測定，平均含量為100.02%，RSD 為0.36%(n=6)。

3.4.8 方法回收率實驗 采用空白回收率實驗法［5］，按照處方量比例不含主藥輔料混合物，分別稱取0.25 g各9份分置于50 mL量瓶中，分別精密稱取氨來呫諾對照品8，10，12 mg各3份，置于上述裝有空白輔料的50 mL量瓶中，按照“3.4.2”項方法配制供試液。按照“3.4.3”方法配制 20 μg·mL-1氨來呫諾對照品溶液。按照上述色譜條件測定峰面積，按照外標法以峰面積計算各樣品的測得量，計算回收率和平均回收率及 RSD，測定結果見表2。平均回收率100.07%，RSD=1.46%。

表1 氨來呫諾回收率實驗結果Tab.1 Recovery of amlexanox n =9

3.4.9 精密度實驗 取15 μg·mL-1氨來呫諾對照品溶液，連續進樣6次，結果平均峰面積119 798.67，RSD 為0.79%。

3.4.10 溶液穩定性實驗 將20 μg·mL-1氨來呫諾供試品溶液在25℃分別放置6 h，測定溶液的穩定性，結果平均峰面積183 955，RSD為0.03%。表明溶液在6 h內穩定。

3.4.11 含量測定結果 按照制訂的含量測定方法測定3批供試品含量，結果批號為20091111，20091112，20091113的樣品，標示含量分別為101.3%，100.8%，101.9%。平均標示含量101.33%，RSD=0.54%。3批樣品含量均在標示量的90.0% ～110.0%范圍內。3.5 鑒別 在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時間應與氨來呫諾對照品主峰的保留時間一致。取陰性樣品(不含主藥的輔料)，按照“3.4.5”項下操作，說明輔料不干擾藥物檢測，鑒別方法可行。

4 討論

氨來占喏是唯一獲美國食品藥品管理局批準的治療口腔潰瘍的藥物。1996年氨來占喏糊劑在美國上市(商品名:Aphthasol)，用于治療口腔黏膜潰瘍。國外采用多中心、隨機、雙盲、對照基質和不治療的平行對照的方法對氨來呫諾糊劑治療復發性口腔潰瘍的療效及安全性進行評價，結果顯示其可加速潰瘍愈合［6-8］。

本制劑的處方根據《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄片劑通則下有關含片的要求，結合藥物的理化性質和劑型特點，制備了氨來呫諾含片，并建立了測定氨來呫諾含片的高效液相色譜法。

參照氨來呫諾口腔貼片的規格，將氨來呫諾含片的規格確定為每片2 mg。制得含片外觀、硬度、含量均勻度、溶化性、脆碎度均符合規定。口感無異味、無沙粒感、無刺激性，酸苦甜適中，表面光滑美觀、色澤均勻、硬度適中、服用方便。氨來呫諾含片的處方采用正交因子設計，在處方中甘露醇為填充劑;羥丙甲基纖維素(k4M)、卡波姆940為粘合劑;硬脂酸鎂為潤滑劑;二氧化硅為助流劑;30%乙醇為潤濕劑。甘露醇化學穩定性好，無引濕性，常用作片劑的填充劑(10% ～90%)，其顆粒易干燥，可以改善片劑的口感。考慮到本品為含片，所以選擇甘露醇作為填充劑。甘露醇在處方中的含量為34.65%。

因為本品是用于治療口腔潰瘍，因此應在兼顧口感的同時，盡量延長藥物在口腔的滯留時間。參考有關文獻，擬選擇卡波姆和羥丙甲基纖維素k4M作為粘合劑。少量水分可以使卡波姆的分子鏈伸展，與黏膜組織產生相互滲透，產生粘附作用，但是大量水分滲入到分子鏈中，可減弱了粘附劑與黏膜組織的相互作用，導致粘附時間降低。羥丙甲基纖維素的吸水性小于卡波姆，其纏繞的長鏈結構可阻止水分的過度進入。兩者以不同比例配伍，可以使水分以適宜的速度滲入片芯，因而可延長粘附時間。以顆粒的休止角盡可能小、含化時間盡可能長作為優化目標，選定卡波姆和羥丙甲基纖維素在處方中的總量為60%，卡波姆和羥丙甲基纖維素的比例為1∶3。硬脂酸鎂做為常用的潤滑劑，易與顆粒混勻，常量下可顯著改善素片外觀。微粉硅膠可以是良好的助流劑，考慮到甘露醇制得的顆粒，流動性較差，經單因素考察后選定潤滑劑和助流劑的用量為處方量的1%。

筆者在本實驗中建立了有效的控制氨來呫諾含片質量的方法。該方法快速、簡便，精密度、重復性、穩定性好。

［1］朱紅君.口炎清沖劑聯合多功能頻譜治療儀治療復發性口腔潰瘍151 例［J］.醫藥導報，2010，29(4):490.

［2］陳方淳，范志國，黃姣，等.氨來咕諾口腔膜治療輕型復發性口腔潰瘍的臨床研究［J］.重慶醫學，2008，37(3):297.

［3］鐘曉波，陳方淳，黃姣，等.氨來咕諾口腔貼片治療輕型復發性口腔潰瘍的臨床研究［J］.中國藥房，2006，17(6):447.

［4］張長宋.復發性阿弗他口腔炎局部和系統藥物的選擇［J］.國外醫學:皮膚性病學，2002，28(6):380.

［5］李自明，閔敏，賀國芳.高效液相色譜法測定復方水楊酸中水楊酸的含量［J］.醫藥導報，2010，29(10):1353.

［6］EISEN-DLYNCH D P.Selecting topical and systemic agents for recurrent aphthous stomatitis［J］.Cutis，2001，68(3):201－206.

［7］BARRONS R W.Treatment strategies for recurrent oral aphthous ulcers［J］.Am J Health Syst Pharm，2001，58(1):41－50.

［8］KHANDWALA A，VAN INWEGEN R G，ALFANO M C.5%aml2exanox oral pastea new treatment for recurrentminor aphthous ul2cers:I.Clinical demonstration of acceleration of healing and resolution of pain［J］.Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod，1997，83(2):222－230.