乳腺癌C-erbB-2表達(dá)在新輔助化療療效中的預(yù)見性

蔡 媛 喬紅梅 鄭 甦 馮建麗 車瀟良 馬 蓉

原癌基因Her - 2 /neu(C - erbB2)是人類表皮生長因子受體家族的第2個成員，該家族中的受體均位于細(xì)胞膜上，在許多組織中都能發(fā)現(xiàn)。研究表明C-erbB-2過表達(dá)可導(dǎo)致乳腺上皮細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，增加腫瘤細(xì)胞的侵襲性，并對某些化療藥物耐藥[1]。本研究通過檢測化療前后乳腺癌組織中C-erbB-2的表達(dá)，以了解化療是否會影響C-erbB-2的表達(dá)；同時對新輔助化療的療效與C-erbB-2的表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行評測，以證實(shí)C-erbB-2在乳腺癌新輔助化療療效預(yù)測中的價值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2008年1月～2009年9月間滿足以下條件的53例乳腺癌患者：①化療前通過細(xì)針穿刺活檢首次確診為乳腺癌，并行C-erbB-2檢測；②臨床Ⅱ、Ⅲ期患者；③腫瘤病灶大小可以檢測；④無治療史；⑤心、肝、腎功能正常。初期檢查包括：體檢、乳腺鉬靶及B超，部分行乳腺M(fèi)RI檢查，常規(guī)行肝腎功能、心電圖、血常規(guī)、胸片或胸部CT、肝臟超聲檢查及全身骨掃描，部分患者加作胸部CT。原始腫瘤的大小通過乳腺B超或鉬靶測量，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的情況通過體檢及乳腺鉬靶、超聲或CT 的檢查獲得，每個化療周期結(jié)束后均重復(fù)進(jìn)行以上檢查項(xiàng)目來評估化療反應(yīng)。

所有患者均為女性，年齡38～65歲,中位年齡49歲。組織學(xué)類型：浸潤性導(dǎo)管癌46例,小管癌1例，浸潤性小葉癌2例,黏液癌3例，微乳頭狀癌1例。臨床分期均為Ⅱa以上。化療統(tǒng)一為2個周期，化療根據(jù)不同患者的身體狀況及經(jīng)濟(jì)情況給予不同化療方案，有以下幾種：主要選擇以含恩環(huán)類的聯(lián)合化療方案，部分與紫杉類聯(lián)合，僅1例給予CMF(環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶)方案。第1個周期結(jié)束后經(jīng)評價化療無效的患者更改化療方案重新進(jìn)入評價程序或改變總體治療計(jì)劃，改用手術(shù)、放療等。

1.2 方法

1.2.1 試劑 鼠抗人C-erbB-2單抗及其免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒均購自福建MAXin- Bio公司。

1.2.2 免疫組織化學(xué)方法 應(yīng)用Elivision免疫組化法分別測定化療前、后乳腺癌組織中C-erbB-2的表達(dá)。全部病例術(shù)前作細(xì)針穿刺活檢或腫物切取活檢，獲取的標(biāo)本經(jīng)10％中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm 厚切片，用于常規(guī)及C-erbB-2的檢測。組織經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度酒精至水化，pH 6.0檸檬酸緩沖液進(jìn)行高溫高壓抗原修復(fù)，滴加相應(yīng)一抗，室溫下孵育1 h，PBS沖洗，加生物素標(biāo)記的二抗，37℃30 min，PBS沖洗，DAB染色，蘇木精復(fù)染，脫水，透明，封片。以PBS代替一抗作為陰性對照，用試劑盒已知陽性片或組織內(nèi)殘存的正常乳腺組織作陽性對照。

1.2.3 結(jié)果判定 根據(jù)美國癌癥聯(lián)合委員會(AJCC)乳腺癌TNM分期第6版對腫瘤進(jìn)行臨床分期。根據(jù)Miller and payer分級對化療后的反應(yīng)情況進(jìn)行分類：完全無反應(yīng)、病理緩解(包括部分緩解及完全緩解)、病理完全緩解。病理完全緩解(pathologic complete response,PCR)指乳腺及腋窩組織中均無浸潤性癌，殘留的導(dǎo)管原位癌包括在PCR范疇中。

所有的免疫組化染色切片均采用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察，并由兩位高年資病理主治醫(yī)師雙盲法讀片。C-erbB-2陽性物質(zhì)定位于細(xì)胞膜。按陽性細(xì)胞數(shù)的所占比例以及染色程度分為4級：(-)為<10％腫瘤細(xì)胞染色或無染色；(+)為≥10％的腫瘤細(xì)胞胞膜不連續(xù)、較弱的淡黃色；(++)為≥10％的腫瘤細(xì)胞胞膜連續(xù)的染色，呈黃或深黃色；(+++)為≥50％的腫瘤細(xì)胞胞膜連續(xù)染色，呈棕黃色。陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：其中將(-)、(+)定為C-erbB-2(-)，(++)、(+++)定為C-erbB-2( + )。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

組間差異性比較采用卡方檢驗(yàn)或精確概率法。所有數(shù)據(jù)采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析處理。

2 結(jié)果

2.1 新輔助化療的療效

53例乳腺癌患者新輔助化療后，病理完全無反應(yīng)的12例(22.6％)，病理緩解(包括部分緩解及完全緩解)41例(77.4％)，其中病理完全緩解3例(5.7％)。

2.2 新輔助化療前后C-erbB-2表達(dá)變化情況

53例乳腺癌患者中，3例化療后病理完全緩解無癌組織進(jìn)行檢測，余50例患者中C-erbB-2的變化情況：化療前后表達(dá)一致的43例，一致性為86％；表達(dá)發(fā)生完全相反改變的是7(14.0％)例，其中由化療前3例陰性轉(zhuǎn)為化療后陽性，4例由陽性轉(zhuǎn)為陰性。化療前后C-erbB-2的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.051，P=0.822)(表1)。

2.3 C-erbB-2陽、陰性組化療有效率差異比較

C-erbB-2表達(dá)陽性的病例化療有效率為86.7％(13/15)、表達(dá)陰性的病例化療有效率為73.7％(28/38)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無差異性(P= 0.472)(表2)。

表1 新輔助化療前后ER、PR、C-erbB-2表達(dá)變化的比較(例)

表2 C-erbB-2表達(dá)陽性、陰性組化療有效率差異比較

3 討論

新輔助化療是乳腺癌規(guī)范化治療的一部分，研究[2～6]顯示其療效顯著。本研究中53例乳腺癌患者新輔助化療后病理緩解率達(dá)77.4％，病理完全緩解率達(dá)5.7％。化療的總有效率與文獻(xiàn)研究結(jié)果相近，但達(dá)到PCR者稍低于國外研究結(jié)果(10％～20％)[2～4]。新輔助化療后達(dá)到PCR的比率盡管不高，但研究[2～4]顯示達(dá)到PCR的患者相對化療后腫瘤依然有殘留的患者其無病生存率及總生存率均明顯增加。

新輔助化療有其不盡人意之處。一些新輔助化療無效的病例，由于手術(shù)治療時間的推延，使某些原本可經(jīng)手術(shù)切除的腫瘤變?yōu)椴荒芮谐换煏?dǎo)致腫瘤的真正病理分期變得模糊不清，從而影響后期的治療以及療效的評價；臨床反應(yīng)有效的病例又會造成某些腫瘤預(yù)后因素信息的丟失，如淋巴結(jié)狀況與腫瘤大小，有可能導(dǎo)致后期治療不當(dāng)。因此能在新輔助化療前即預(yù)知療效，從而選擇敏感病例，并選擇適宜藥物進(jìn)行化療將能彌補(bǔ)其不足，提供乳腺癌個體化治療的新模式。

目前臨床上入選新輔助化療方案的乳腺癌患者，均需要在化療前行細(xì)針穿刺活檢獲取病變組織，然后對病變組織分型確診，同時檢測ER、PR、C-erbB2的表達(dá)，檢測結(jié)果將作為后期治療、評判預(yù)后及研究的指標(biāo)[7]。細(xì)針穿刺活檢獲得的組織，相對于腫瘤而言組織很少，據(jù)其檢測的結(jié)果能否代表整個瘤體的特性呢？Taucher等[8]研究1994～2000年間722例乳腺疾病患者的術(shù)前穿刺標(biāo)本與術(shù)后大標(biāo)本的病理特征及ER、PR的檢測情況被對照研究，62.3％(450/722)的病例活檢診斷為惡性，術(shù)后證實(shí)無1例誤診，可見這樣的研究基礎(chǔ)是可行的。本研究通過測定乳腺癌患者新輔助化療前后C-erbB-2的表達(dá)，結(jié)果顯示化療前后C-erbB-2表達(dá)的一致性為86％；陽陰性發(fā)生改變的是14％，提示新輔助化療對乳腺癌組織中C-erbB-2的表達(dá)無明顯影響，以活檢標(biāo)本C-erbB-2的檢測結(jié)果做研究是可行的，活檢標(biāo)本C-erbB-2的檢測結(jié)果能代表整個瘤體的特性。已有一些C-erbB-2與新輔助化療療效相關(guān)性的研究，但結(jié)論不一。Miyoshi等[9]對78例患者給予4個周期的多西紫杉醇的新輔助化療方案后，對照研究了化療療效與腫瘤生物因子及病理參數(shù)的關(guān)系，PCR率的高低與是否絕經(jīng)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及ER、PR、c-erbB2、ki-67的表達(dá)均無關(guān)，僅與乳腺癌細(xì)胞核的級別有關(guān)，核的級別低者較級別高者PCR率更高。Tiezzi等[10]通過對68例患者行多西紫杉醇、表柔沙星聯(lián)合化療，并行多變量分析，只有c-erbB2的高表達(dá)與無病生存率、總生存率相關(guān)，而ER、PR、P51、P21等的表達(dá)及臨床病理特征均不能預(yù)示化療的病例緩解率。結(jié)論是僅僅c-erbB2的表達(dá)對化療后病例緩解是一重要的預(yù)示因子。還有研究顯示，c-erbB2在阿霉素和環(huán)磷酰胺化療方案中可提示化療的療效，c-erbB2陽性較陰性病例有較高的病例緩解率，但加入多西紫杉醇后c-erbB2陽性、陰性的化療效果一樣[11]。本研究結(jié)果顯示： C-erbB-2的表達(dá)與化療療效無相關(guān)性，提示C-erbB-2不能作為新輔助化療療效的預(yù)測因子。依靠靶向因子的表達(dá)進(jìn)行新輔助化療敏感病例的選擇方面可能還需要更多病例研究證實(shí)。

[1]高艷偉,高維實(shí),賴玉書,等.Her - 2與乳腺癌研究進(jìn)展〔J〕.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2008,30(1):69.

[2]Straver ME,van Adrichem JC,Rutgers EJ,et al.Neoadjuvant systemic therapy in patients with operable primary breast cancer:more benefits than breast-conserving therapy〔J〕.Ned Tijdschr Geneeskd,2008,152(46):2519.

[3]Shien T,Akashi-Tanaka S,Miyakawa K,et al.Clinicopathological features of tumors as predictors of the efficacy of primary neoadjuvant chemotherapy for operable breast cancer〔J〕.World J Surg,2009,33(1):44.

[4]Fuzhong T,Nan L,Jiajia G,et al.Clinical significance of t-he relationship between expression of survivin and effects of neoadjuvant chemotherapy in locally advanced breast cancer〔J〕.Gan To Kagaku Ryoho,2008,35(8):1319.

[5]Rastogi P,Anderson SJ,Bear HD,et al.Preoperative chemotherapy:updates of National Surgical Adjuvant Breast and Bowel Project Protocols B 18 and B 27〔J〕.J Clin Oncol,2008,26(5):778.

[6]熊德海，劉世德，劉 懿.乳腺癌新輔助化療的非隨機(jī)臨床觀察:附76例報(bào)告〔J〕.中華內(nèi)分泌外科雜志,2009,3(2):110.

[7]Kaufmann M,von Minckwitz G,Bear HD,et al.Recommendations from an international expert panel on the use of neoadjuvant(primary)systemic treatment of operable breast cancer:new perspectives 2006〔J〕.Ann Oncol,2007,18:1927.

[8]Taucher S,Rudas M,Gnant M,et al.Sequential steroid hormone receptor measurements in primary breast cancer with and without intervening primary chemotherapy〔J〕.Endocrine-Related Cancer,2003,10(1):91.

[9]Miyoshi Y,Kurosumi M,Kurebayashi J,et al.Low nuclear grade but not cell proliferation predictive of pathological complete response to docetaxel in human breast cancers〔J〕.J Cancer Res Clin Oncol,2008,134(5):561.

[10]Tiezzi DG,Andrade JM,Ribeiro-Silva A,et al.HER-2,p5-3,p21 and hormonal receptors proteins expression as predictive factors of response and prognosis in locally advanced breast cancer treated with neoadjuvant docetaxel plus epirubicin combination〔J〕.BMC Cancer,2007,26(7):36.

[11]Learn PA,Yeh IT,McNutt M,et al.HER-2/neu expression as a predictor of response to neoadjuvant docetaxel in patients with operable breast carcinoma〔J〕.Cancer,2005,103(11):2252.