落葵果實中總黃酮提取條件的研究

趙建芬，董 基，嚴子軍，林奕云

（肇慶學院 化學化工學院，廣東 肇慶 526061）

黃酮類化合物是廣泛存在于自然界的一大類化合物,其在植物體內大部分與糖結合,一部分以游離形式存在.黃酮類成分具有抗氧化、增強免疫力、降血脂[1]、血糖等功效[2],它已成為近年來的研究熱點[3－4].

落葵為落葵科落葵屬植物（Basella rubra L.），又名胭脂菜.其成熟果實為紫黑色漿果，含有黃酮類化合物.目前，尚未見到采用超聲提取的方法從落葵果實中提取黃酮類化合物的研究報道.本文采用超聲提取法，通過正交實驗對影響落葵果實總黃酮提取效率的乙醇濃度、料液比、提取時間三因素進行考察，選擇最佳提取條件,并且采用比色法以蘆丁為對照品對落葵果實中總黃酮的含量進行測定.目的在于尋找較為簡單、快速和有效的提取方法，為以后落葵中黃酮類天然物質的研究和開發提供借鑒參考.

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

實驗所用材料、試劑及儀器如下：紅花落葵成熟果實（采自高要市蓮塘鎮農家菜園）；蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用）、體積分數為95%的乙醇、亞硝酸鈉，硝酸鋁、氫氧化鈉等（均為A.R.級）；SB25－12D臺式超聲波清洗器（寧波新芝生物科技股份有限公司）；UV/VIS916型紫外－可見分光光度計（澳大利亞，GBC公司）；S22/S22PC可見分光光度計（上海棱光技術有限公司）；SHZ－D循環水式真空泵等.

1.2 標準溶液與樣品液的制備

精確稱取蘆丁對照品0.005 2 g，用體積分數為70%的乙醇溶解并定量轉移至25 mL的容量瓶中定容至刻度，即得濃度為0.208 0 g/L的蘆丁標準品溶液.

稱取新鮮落葵果實適量，破皮，置于100 mL帶塞錐形瓶中.按實驗設計條件進行超聲提取，提取液減壓抽濾，取其濾液.將濾液定量轉移至50mL的容量瓶中，用相同濃度的乙醇溶液定容至刻度，即得樣品液.

1.3 實驗方法

1.3.1 蘆丁標準曲線的繪制[5]

精密量取蘆丁標準溶液1.50 mL，置于10 mL的容量瓶中，加入體積分數為70%的乙醇3.5 mL.加質量濃度為5%的亞硝酸鈉溶液0.30 mL，搖勻，放置6 min；再加入質量濃度為10%的硝酸鋁溶液0.30 mL，搖勻，放置6 min；加入1.0 mol/L的氫氧化鈉溶液4.00 mL，加水至刻度，搖勻，放置15 min.以試劑空白為參比，在400～600 nm波長范圍內對顯色液進行掃描.結果顯示蘆丁標準品在510 nm處有最大吸收，故選擇510 nm為檢測波長.

取系列體積的蘆丁標準溶液，按上述顯色反應體系配制成系列濃度的蘆丁顯色液，以試劑空白為參比，在波長510 nm處測定各溶液的吸光度，以蘆丁濃度C(g/L)為橫坐標，吸光度A為縱坐標，繪制標準曲線.結果表明：在0.008 32～0.049 9 g/L范圍內，回歸方程為A＝12.878C－0.001 9，相關系數γ＝0.998 5，線性關系良好.

1.3.2 落葵總黃酮提取工藝條件的選擇

落葵總黃酮提取工藝流程如下：落葵果實→破皮→乙醇超聲提取→減壓過濾→取濾液→比色法測定總黃酮的含量.

分別對提取劑濃度、料液比和提取時間進行單因素實驗.根據實驗結果，設計了L9(33)正交實驗，對提取劑濃度、料液比和提取時間3個因子在3個不同水平進行優選（見表1）.

表1 正交實驗因素和水平

2 結果與討論

2.1 檢測方法精密度的測定

取適當濃度的蘆丁顯色液，在已建立的檢測方法下重復測定6次，結果如表2所示.

由表2數據分析可知RSD小于0.2%，說明該方法具有良好的精密度，可將其用于測定同一勻質樣品.

2.2 正交實驗確定落葵總黃酮的提取工藝條件

分別取樣品液2.00 mL，按所建立的比色法測其吸光度A值，分別計算落葵果實中總黃酮的含量，結果如表3所示.

表2 精密度的實驗結果（n＝6）

表3 正交實驗結果

由表3正交實驗結果可知，影響落葵總黃酮提取因子的主次順序為B＞A＞C，即料液比是落葵總黃酮提取的主要影響因素，其次是乙醇濃度和提取時間.綜合分析正交實驗結果，發現總黃酮超聲提取條件最佳組合為A2B1C3，即以體積分數為70%的乙醇為提取劑，料液比為1∶20，提取時間為35 min.

2.3 提取工藝的驗證實驗分析

為進一步考察最佳提取條件的穩定性和合理性，稱取適量的落葵果實，在最佳工藝條件下進行3次平行實驗，用所建立的比色法分別測定落葵果實總黃酮的含量.結果如表4所示.

表4 最佳工藝的驗證實驗（n＝3）

由表4數據分析可知，在優化條件下，提取的落葵總黃酮量均高于上面正交實驗的9個實驗點，所以最佳提取條件A2B1C3是合理的而且該工藝穩定可行，從而證明了優選結果的科學性.

3 結論

通過正交實驗，確定了乙醇超聲提取落葵果實總黃酮含量的最佳工藝條件為A2B1C3，即以體積分數為70%的乙醇為提取劑、物料比為1∶20、提取時間為35min，在此條件下提取出的總黃酮含量為5.3mg/g.總的來說，超聲波提取法簡單、易操作，在優化條件下落葵果實總黃酮提取率高，實驗的重復性好，具有一定的實用價值.

[1] 唐浩國.黃酮類化合物研究[M].北京:科學出版社,2009.

[2]郭長江.食物類黃酮物質有營養學意義[J].中國食物與營養,2004(5):38-40.

[3] 汪遠紅,汪洪武,鄭俊輝.分光光度法測定玉蘭總黃酮的含量[J].西北藥學雜志,2008,23(6):357.

[4] 張澤英.大蒜總黃酮提取工藝研究[J].安徽農業科學,2009,37(22):10 673-10 674.

[5] 閆克玉,于靜.超聲波強化提取懷菊中總黃酮的試驗研究[J].科技信息,2007,34:363-364.

[6] 耿敬章.香樟葉中黃酮類化合物的提取工藝[J].西北農業學報,2009,18(1):267-270.