北蟲草提取物延緩皮膚衰老的實(shí)驗(yàn)研究

[摘要]目的：研究北蟲草提取物對(duì)延緩D-半乳糖所致小鼠皮膚組織衰老的作用。方法：昆明種3月齡小鼠72只，雌雄各半，隨機(jī)分為高劑量組、中劑量組、低劑量組、模型對(duì)照組、正常對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組。各給藥組、模型組和陽(yáng)性組每日頸背部皮下注射D-半乳糖，連續(xù)注射42天造成亞急性衰老模型，正常組注射相同劑量生理鹽水。各給藥組造模的同時(shí)皮膚涂布給藥，42天后取背部皮膚檢測(cè)。結(jié)果：北蟲草提取物能夠增加衰老小鼠的含水量和SOD活力，降低皮膚中MDA含量。結(jié)論：北蟲草提取物具有延緩皮膚衰老的作用。

[關(guān)鍵詞]北蟲草提取物；延緩；皮膚衰老；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

[中圖分類號(hào)]R332[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1008-6455（2011）04-0612-03

Experimental study on anti-skin-aging action of Cordyceps extract

HUANG Guo-xin，YAN Qin-hui，ZHANG Zhong-min，LV Zai-kun，REN Wei，SU Zi-ren，ZHAO Xue-jun

（RD Center of Herbal Cosmetics，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，Guangdong，China）

Abstract:ObjectiveWeresearched the role to delay aging whichtake in the skin of mice duing to D-galactose about the extractive of Cordyeps militaris.Methods72 healthy Kunming mice of three months were randomly divided into 6 groups-control group， high dose group， middle dose group， low dose group， model control group，normal control group and positive control group. Daily giving subcutaneous injection of D-galactose on the nape back for 42 days to make the subacute senile mouse model at each medical group， model group and positive group，normal control group gave the same doses of normal saline water injection. At the same time，each medical group were coated for medicine on the skin，and we getted the unhairing skin on back to determination after 42 days.ResultsThe extractive ofCordyepsmilitariscan remarkably improve skin water contents and SOD activity， and decrease significantly MDA content. ConclusionThe extractive ofCordyepsmilitaris can delay skin aging.

Key words： extractive of Cordyeps militaris; delay ;skin aging; animal experiments

隨著人們對(duì)延緩皮膚衰老的關(guān)注，各種預(yù)防和延緩皮膚衰老的有效途徑和方法不斷被提出和總結(jié)。中草藥因其獨(dú)特機(jī)理和優(yōu)良的美容效果現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用于各類抗衰老的產(chǎn)品中。

北蟲草[Cordyceps militaris(L.)Link]，又稱北冬蟲夏草、蛹蟲草，為子囊菌亞門核菌綱球殼目麥角菌科蟲草屬，與冬蟲夏草同屬異種?！吨腥A藥?！酚涊d：“蛹草，性味甘、平，入肺、腎二經(jīng)。” 《全國(guó)中草藥匯編》記載：“蛹蟲草(北蟲草)的子實(shí)體及蛹體也可作為冬蟲夏草入藥。”北蟲草中含有蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖以及豐富的蛋白質(zhì)、18種氨基酸、17種微量元素、12種維生素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，其中維生素A、B1、B2、B6、B12、C、D、E等含量高于菇類。目前，口服北蟲草已被證實(shí)有良好的滋肺補(bǔ)腎、止血化痰、降血壓、抗菌等功效，但對(duì)其采用經(jīng)皮給藥方式，用于評(píng)價(jià)其延緩皮膚衰老的實(shí)驗(yàn)研究，則少見(jiàn)報(bào)道[1-3]。因此，本課題對(duì)北蟲草提取物延緩皮膚衰老的作用進(jìn)行了研究，以期為其在抗衰老產(chǎn)品的開發(fā)運(yùn)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 動(dòng)物：昆明小鼠，體重（20±2）g，SPF級(jí)，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證明號(hào)0062558。

1.1.2 藥品：北蟲草提取物，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥開發(fā)研究中心提供，含量為1g/ml；維生素E由廣州星群藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：Ge50008；D-半乳糖由上海市晶純?cè)噭┯邢薰旧a(chǎn)，批號(hào)：18565；生理鹽水由佛山雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)：0909204D；考馬斯亮藍(lán)試劑盒，南京建成生物工程研究所提供，批號(hào)：20100812；超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒，南京建成生物工程研究所提供，批號(hào)：20100805；丙二醛（MDA）試劑盒，南京建成生物工程研究所提供，批號(hào)：20100804。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分組：健康昆明種3月齡小鼠72只，雌雄各半，體重18～22g，隨機(jī)分為北蟲草提取物高劑量組、北蟲草提取物中劑量組、北蟲草提取物低劑量組、模型對(duì)照組、正常對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組，每組12只（n=12）。

1.2.2 造模方法：每日頸背部皮下注射12.5%D-半乳糖1000mg/kg，連續(xù)注射42天制造亞急性衰老模型[2]，正常對(duì)照組注射相同劑量生理鹽水。

1.2.3 給藥方法：造模的同時(shí)給藥；用8%硫化鈉酒精溶液脫毛法背部脫毛（2cm×3cm），分別給以北蟲草提取物高劑量組20g/kg，北蟲草提取物中劑量組10g/kg，北蟲草提取物低劑量組5g/kg，VE陽(yáng)性對(duì)照組50mg/粒/只，模型對(duì)照組和正常對(duì)照組給生理鹽水10ml/kg，皮膚涂布給藥，連續(xù)給藥42天。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，每天記錄小鼠表征和活動(dòng)情況。末次給藥1h后頸椎脫臼處死小鼠，取1cm2左右的皮膚供測(cè)定皮膚含水量之用；再取背部皮膚約0.2g作皮膚組織勻漿，用于測(cè)定皮膚生化指標(biāo)。

1.2.4 8%硫化鈉酒精溶液的配制方法[4]：稱取硫化納8g， 加溫水60ml，待全溶解后再加入體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精40ml， 制成硫化鈉酒精溶液。

1.2.5 皮膚含水量測(cè)定方法：頸背部皮膚去毛清潔后，切取lcm2皮膚，精密稱其濕重，隨即將其放入烘箱中，于80℃烘干12h，稱其干重，計(jì)算。皮膚含水百分率=（濕重-干重）/濕重×100%。

1.2.6 10%皮膚勻漿的制備方法：取脫毛背部皮膚組織0.2g左右，經(jīng)預(yù)冷生理鹽水漂洗，除去皮下脂肪和其它結(jié)締組織，濾紙拭干，稱重，量取該組織塊9倍重量預(yù)冷生理鹽水，先取2/3量倒入裝有組織塊燒杯中，剪碎組織塊后倒入勻漿管中，將剩余l(xiāng)/3生理鹽水沖洗燒杯壁，用內(nèi)切式組織勻漿機(jī)制成10%組織勻漿(在冰水中進(jìn)行) ，反復(fù)凍融3次，使細(xì)胞完全破碎，內(nèi)容物全部游離在液相中。

1.2.7 皮膚勻漿生化指標(biāo)的測(cè)定方法：參照南京建成考馬斯亮藍(lán)試劑盒、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒說(shuō)明書方法和MDA試劑盒說(shuō)明書方法測(cè)定超氧化物歧化酶（SOD）活力和皮膚中丙二醛（MDA）的含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，所得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多個(gè)樣本均數(shù)的比較采用單因素方差分析（One-Way ANOVA），當(dāng)總體方差齊時(shí)選擇LSD法分析；當(dāng)方差不齊時(shí)選擇Dunnet C法分析。

2結(jié)果

2.1 皮膚含水量實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，衰老模型組皮膚含水量正常組相比，具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01），提示造模成功；給藥高、中劑量組與模型組相比，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，說(shuō)明北蟲草提取物有保持皮膚組織水分的作用；給藥高、中劑量組與正常組相比，高劑量與陽(yáng)性對(duì)照組相比，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，提示高劑量北蟲草提取物與陽(yáng)性藥VE效果相當(dāng)，能夠使衰老皮膚的水分含量恢復(fù)到正常水平。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 皮膚生化指標(biāo)含量測(cè)定結(jié)果(表2)

2.2.1 在SOD活力的測(cè)定中，衰老模型組與正常對(duì)照組相比，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，說(shuō)明模型組皮膚組織中SOD活力顯著下降，提示衰老模型造模成功。陽(yáng)性組、給藥高劑量組、中劑量組與正常對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；且與模型對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說(shuō)明給藥高、中劑量組能提高衰老皮膚組織中SOD的活力，使其恢復(fù)至正常水平。給藥高、中劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）， 提示給藥高、中劑量組與陽(yáng)性藥VE效果相當(dāng)。

2.2.2 在MDA含量的測(cè)定中，衰老模型組與正常對(duì)照組相比，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，說(shuō)明模型組皮膚組織中MDA含量顯著升高，提示衰老模型造模成功。陽(yáng)性組、給藥高、中、低劑量組與正常對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；且陽(yáng)性組、給藥高劑量組與模型組相比，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；中、低劑量組與模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明各給藥組均能提高降低皮膚組織中MDA的活力，使其恢復(fù)至到常水平。各給藥組和陽(yáng)性組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），提示給藥高、中、低劑量組與陽(yáng)性藥VE效果相當(dāng)。

3討論

皮膚組織中水分含量以及SOD活力和MDA含量是判定受試動(dòng)物皮膚衰老程度的一個(gè)特殊而敏感的指標(biāo)。D-半乳糖所致的小鼠皮膚亞急性衰老模型，是根據(jù)衰老代謝學(xué)說(shuō)而研制的衰老模型，研究已證明D-半乳糖誘導(dǎo)的亞急性衰老模型是可靠的衰老實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。因此，本課題采用D-半乳糖造成小鼠皮膚亞急性衰老模型[5-6]。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，北蟲草提取物能明顯提高衰老小鼠皮膚中水分含量和SOD活力，降低衰老小鼠皮膚組織中MDA含量，且與公認(rèn)的抗氧化劑維生素E相比，有相同的抗衰老作用。

中醫(yī)藥理論認(rèn)為，“肺主皮毛”，“腎主水”；蟲草具有“補(bǔ)肺益腎”之功。而從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，北蟲草提取物具有延緩皮膚衰老、提高皮膚含水量的作用，正反映了我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)藥理論對(duì)于北蟲草功效的正確認(rèn)識(shí)，同時(shí)也在一定程度上說(shuō)明了中藥采用經(jīng)皮給藥的方式，可以起到和內(nèi)服相同的結(jié)果。

[參考文獻(xiàn)]

[1]馬吳偉，潘蘇華.蛹蟲草的研究進(jìn)展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2008，4(11):148-150.

[2]王常鑫，楊春偉.人工栽培蟲草的工藝研究和分析[J].醫(yī)藥界，2005， 12(1):76-78.

[3]鐘石，計(jì)東風(fēng)，陳詩(shī)等.蛹蟲草的研究進(jìn)展[J].蠶桑通報(bào)，2006，37(4)：6-10.

[4]李峰，吳軍正，劉斌，等.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)用脫毛劑配方的改進(jìn)[J].實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志，1998，14（4）：208-209.

[5]王倩.中藥延緩皮膚衰老的研究現(xiàn)狀[J].中國(guó)美容醫(yī)學(xué)，2006，15(2):219-221.

[6]丁克祥.老化皮膚的生物學(xué)特征及表皮改變[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)·老年醫(yī)學(xué)冊(cè)，1999，20(1):36-38.

[收稿日期]2011-01-29[修回日期]2011-03-14

編輯/張惠娟