不同分期肺癌組織中Beclin1\\p53\\p16表達情況分析

[摘要] 目的 本文旨在通過對肺癌組織中Beclin1、p53和p16表達的分析，為肺癌早期診斷及其惡性度評估提供可靠數據。方法 選擇2009年1～12月在山西省汾陽醫院就診的肺癌患者，取肺組織50例，檢測樣本中不同分期肺癌組織Beclin1、p53、p16的表達情況，對該表達情況與對應的分期進行方差分析與LSD-t檢驗。結果 不同肺癌分期的Beclin1、p53、p16的表達情況之間的差別有統計學意義(P<0.05)。結論 肺癌各臨床分期的Beclin1、p53、p16表達情況不一樣。隨肺癌分期的增高p53表達量增高，p16表達量下調，Beclin1表達量降低。

[關鍵詞] 肺癌; Beclin1; p53; p16

[中圖分類號] R734.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701(2010)07-26-02

Expression of Beclinl，p53 and p16 in Different Stages of Lung Cancer

LI Xiaoyan1 WANG Guiqin2

1.Affiliated Fenyang Hospital of Shanxi Medical University，Fenyang 032200，China;2.Teaching and Research Section of Microbiology and Immunology，Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

[Abstract] ObjectiveTo investigate expression of Beclinl，p53 and p16 in lung cancer tissue of different stages and provide reliable data for early diagnosis of lung cancer and the assessment of its m alignant degree. MethodsWe selected 50 patients with lung cancer from Shanxi Fengyang Hospital between Jan.2009 and Dec.2009. The expression levels of tissue Beclinl，p53 and p16 in different stages of lung cancer were detected and the analysis of variance and LSD-t test were used for their expression and their corresponding stage. ResultsThere were significant differences in the expression levels of Beclinl，p53 and p16 in different stages. ConclusionThe expression levels of Beclin1，p53 and p16 in the tissue of lung cancer in different clinical stages are different. With the increase in staging of lung cancer，the p53 expression level is increased，the p16 expression level is down-regulated and the Beclin1 expression level is decreased.

[Key words]Lung cancer; Beclin1; p53; p16

肺癌是世界上發病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一。多數患者在確診時已失去根治的機會，早期發現和診斷肺癌及其惡性度的評估對其治療和預后都有重要意義。肺癌早期診斷與惡性度評估分子標志物的篩選是臨床腫瘤工作者亟待解決的課題[1，2]。

自噬現象是一種高度保守的細胞行為，存于所有的物種。研究表明Beclin1是唯一發現的哺乳動物的自噬基因，是自噬的執行者;又是一類新的抑癌基因，只有在雙等位染色體都表達時才發揮抑癌作用。Beclin1基因的缺失性突變導致自發性腫瘤發生率提高。Beclin1基因表達異常(減少或缺失)是否為腫瘤細胞早期事件?如果研究結果是肯定的，那么我們可以將其作為早期診斷的指標之一，甚至有可能成為高危人群篩選指標之一。

p53是迄今為止發現的與人類腫瘤相關性最高的腫瘤抑制蛋白，在多種惡性腫瘤中有異常表達。正常狀態下，其效應分子的基因產物可防止細胞轉化癌變，當發生突變時可成為一個直接的腫瘤基因，在細胞惡性轉化中起作用，被認為是早期癌標志。p16蛋白是迄今為止發現的第一個直接控制細胞增殖周期的固有蛋白，通過調節Rb蛋白的活性防止細胞過度增殖。p16蛋白的丟失、突變廣泛存在于人類惡性腫瘤中，因此p16蛋白既可作為早期診斷癌變的指標，也可用于評估預后。

本文旨在通過分析處于肺癌各個分期的50例肺癌患者的Beclin1、p53、p16的表達情況，探討Beclin1、p53、p16與肺癌惡性度的關系，從而為臨床診斷、治療肺癌提供依據[3]。

1 資料與方法

1.1 標本與來源

選擇2009年1～12月在山西省汾陽醫院就診的肺癌患者，取肺組織50例(每期10例)。入選條件和排除條件如下:(1)手術切除標本。所有標本均經病理學診斷證實，術前均未接受放、化療。(2)均經病理確診為肺癌。(3)另取癌旁正常肺組織(至少距癌邊緣3cm)。(4)病理排除合并炎性改變等的可能。

1.2 方法

1.2.1 分組方法 依據1997年UICC公布的肺癌TNM分期，同時結合臨床、胸部CT、X線檢查將入選病例進行分組:按腫瘤分期0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分為5組，各組年齡、性別等控制情況基本匹配。

1.2.2 實驗方法 肺癌及相應癌旁手術標本經10%甲醛固定，石蠟包埋連續切片，蘇木精-伊紅染色，進行組織病理學觀察后，采用PV-9000通用型二步法免疫組化法進行Beclin1、p16和p53基因表達水平的檢測。

1.2.3 結果判斷 定性:光學顯微鏡觀察Beclin1、p16和p53，陽性著色部位分別為細胞漿和細胞核，呈棕黃色，而陰性細胞不著色而顯示復染的藍色。定量:每張切片隨機地在200倍顯微鏡下取5個視野，錄入GD-6多媒體彩色病理圖像分析系統，測定Beclin1、p53、p16的積分光密度。

1.3 統計學方法

用SPSS10.0軟件包對Beclin1、p53、p16的表達情況與其各自對應的分期分別進行方差分析與LSD-t檢驗。

2 結果

肺癌分期的五組Beclin1、p53、p16的表達情況差別有統計學意義(P<0.05)。見表1。

本研究顯示:各期肺癌組織中Beclin1、p53、p16表達的高低與肺癌的臨床分期有關聯;隨肺癌分期的增高，p53表達量增高，p16表達量下調，同時Beclin1表達量降低。見圖1。

3 討論

國內外學者對Beclin1的研究大多集中在宮頸癌等生殖系統腫瘤，對其與肺癌的關系研究很少。對于p53、p16及Beclin1的測定方法大多是RT-PCR法、Western blot等，這些方法只能判斷陽性病例而不能定量診斷[4，5]。Beclin1與肺癌相關性的研究目前國內報道較少，與肺癌病理分期相關的研究尚未見報道。

本文通過檢測不同分期肺癌組織中Beclin1、p53、p16的表達情況，揭示自噬蛋白與凋亡蛋白在肺癌發生發展中的相互作用，研究三者之間及其與肺癌臨床病理分期的關系，為早期診斷肺癌提供理論依據。通過研究了解肺癌發生、發展過程中Beclin1、p53、p16的表達情況，通過對肺癌組織中Beclin1、p53和p16表達的定量分析揭示自噬蛋白與凋亡蛋白在肺癌發生發展中的相互作用，為腫瘤早期診斷提供一條新思路。

[參考文獻]

[1] Gorski DJ，Chittaranjan S，Pleasance ED，et al. A SAGE approach to discovery of genes involved in autophagic cell death[J]. Curr Biol，2003，13(4):358-362.

[2] Tan EM，Zhang J. Autoantibodies to tumor-associated antigens:reporters from the immune system[J]. Immunol Rev，2008，22(5):328-340.

[3] Gadducci A，Ferdeghini M，Buttitta F，et al. Assessment of the prognostic relevance of serum anti-p53 antibodies in epithelial ovarian cancer[J]. Gynecol Oncol，1999，72(3):76-81.

[4] Tang R，Ko MC，Wang JY，et al. Humoral response to p53 in human colorectal tumors:a prospective study of 1，209 patients[J]. Int J Cancer，2001，94(13):859-863.

[5] Lokshin RA，ZaKeri Z. Apoptosis，autophagy，and more[J]. Int J Bochem Cell Biol，2004;36(12):2405-2419.

(收稿日期:2009-12-09)