宮頸癌患者聯合檢測血清suPAR及SCC-Ag的意義

[摘要] 目的 聯合檢測子宮頸癌患者血清中可溶性尿激酶受體(suPAR)及血清鱗狀細胞癌抗原(SCC-Ag)水平，探討其臨床意義及兩者的相關性。方法 通過酶聯免疫吸附試驗法(ELISA)檢測60例宮頸癌患者及30例子宮肌瘤患者(對照組)血清中可溶性uPAR(suPAR)及血清鱗狀細胞癌抗原(SCC-Ag)的水平。結果 宮頸浸潤癌患者和宮頸原位癌患者血清suPAR水平均比子宮肌瘤患者(對照組)升高。具有統計學意義(P<0.01);經SNK-q檢驗，與淋巴結轉移及浸潤程度有關，差異有統計學意義(P均<0.05);與分化程度無關，差異無統計學意義;宮頸癌患者血清中SCC-Ag水平為(0.971+0.263 )μg/mL，與子宮肌瘤良性組對照比較顯著升高，具有統計學意義(P<0.01);宮頸癌患者血清suPAR水平與SCC-Ag水平存在正相關關系;同一宮頸癌患者術后半年血清suPAR水平明顯低于術前血清suPAR水平，具有統計學意義(P<0.01)。結論 聯合檢測宮頸癌患者血清中suPAR與SCC-Ag水平有助于判斷患者的病情及預后，在臨床上必將有著廣闊的應用前景。

[關鍵詞] 宮頸癌; 可溶性尿激酶受體; 血清鱗狀細胞癌抗原; 酶聯免疫吸附測定法

[中圖分類號] R737.33 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701(2010)07-09-03

Significance of Joint Detection of suPAR and SCC-Ag in Cervical Cancer

YAN Zhongping1 ZHENG Shumin2

1.Department of Postgraduate，Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China;2.Shanxi Provincial Tumor Hospital，Taiyuan 030001，China

[Abstract] ObjectiveTo detect the levels of serum suPAR and SCC-Ag in cervical cancer and investigate their correlation and clinical application. MethodsThe levels of serum suPAR and SCC-Ag were measured by ELISA in 30 cases of benign uterine leiomyoma(control group)and 60 cases of cervical cancer. ResultsThe serum suPAR levels in both invasive carcinoma of cervix and carcinoma in situ of cervix were higher than those of control group，with a significant difference between them(P<0.01). The SNK-q test showed the serum suPAR level was correlated with the degree of lymph node metastasis and invasion，with a significant difference(P<0.05)，but the level had no correlation with the degree of differentiation，with no significant difference. The serum SCC-Ag level in cervical cancer was(0.971±0.263)μg/mL，significantly higher than that in benign uterine leiomyoma，with a significant difference between on them(P<0.01). There was a positive correlation between the serum suPAR level and the serum SCC-Ag level in cervical cancer. The serum suPAR level half-year after treatment was higher than that before treatment，with a significant difference(P<0.01). ConclusionThe joint detection of serum suPAR and SCC-Ag levels helps determine patient's condition and prognosis，promoting its clinical application.

[Key words]Carcinoma of the uterine cervix; Solubility urokinase-type plasminogen activator receptor; Serum squamous cell carcinoma antigen; Enzyme linked immunosorbent assay

尿激酶受體(urokinase type plasminogen activator receptor，uPAR)是近年來發現的一種多功能受體，它主要表達于單核細胞、中性粒細胞以及活化的T淋巴細胞表面，在其他多種非造血細胞如血管內皮細胞、肌細胞和肝細胞等表面均有表達。最近人們發現腫瘤細胞的表面亦有大量的uPAR 表達，它不僅有利于腫瘤細胞的生長、侵襲和轉移，而且與腫瘤病人的預后相關。然而大多數研究局限于腫瘤組織，由于取材困難以及標本處理過程復雜 ，限制了其在臨床上的廣泛運用，因此尿激酶受體的變異體可溶性尿激酶受體(soluble uPAR，suPAR)已成為當前腫瘤研究的一個新的方向。血清鱗狀細胞癌抗原(SCC-Ag)作為宮頸癌血清學的腫瘤標記物已經在大量的研究中被證實。為此聯合檢測宮頸癌患者血清中suPAR和SCC-Ag水平，并對此兩項腫瘤標記物進行比較統計以便探討其在臨床上的應用價值。

1 資料與方法

1.1 研究對象

收集2008年5月～2009年7月山西省腫瘤醫院婦科收治入院的60例子宮頸癌患者，均經病理檢查確診，采血前均未經化療、放療和免疫治療。按2000年國際婦產科聯盟(FIGO)修訂標準:0期9例，Ⅰ期14例，ⅡA期32例，ⅡB期～Ⅳ期(未手術)5例。組織學類型:高分化12例，中分化34例，低分化14例。淋巴結轉移:陰性38例，陽性22例。(其中0～ⅡA期為術后病理檢查，ⅡB～Ⅳ期為盆腔CT確診)。以此期間住院的子宮肌瘤患者30例作為對照，宮頸刮片均為無癌變證據。

1.2 標本采集與制備

晨起采集空腹靜脈血2～4mL，用3.2%枸櫞酸鈉1:9抗凝處理，4℃離心半徑13cm，3000r/min離心10min，分離血漿置于 -80℃冰箱凍存，待檢。手術患者均為術后3個月門診復查時采血。

1.3 儀器與試劑

human uPAR ELISA試劑盒采購自美國Assaypro 公司、全自動酶標儀、TECANM8/2R 型全自動洗板機、TGL-32G高速離心機。SCC-Ag ELISA試劑盒采購自瑞典Fujirebio Diagnostics AB公司。

1.4 實驗方法

用ELISA法檢測血清中suPAR水平，在聚苯乙烯微量反應孔板中加入預先配制的標準品，室溫下孵育2h。用洗板機洗滌5次后控干，再加入抗uPAR抗體室溫下孵育30min，再將微量反應孔板放入洗板機洗滌5次控干，每孔加入50μL抗生物素蛋白鏈菌素-過氧化物酶復合物室溫下孵育30min，打開酶標儀設定好程序。每孔加入50μL顯色劑室溫下孵育大約10min直到生成最佳藍色，每孔加入50μL終止液直到顏色由藍變黃。最后將微量反應孔板放入全自動酶標儀在450nm波長下讀取光密度值(OD值)，實驗過程中的具體步驟和方法嚴格按照試劑盒說明書操作。用ELISA法檢測血清中的SCC–Ag水平的方法和前面基本一樣，具體操作步驟同樣按照試劑盒說明書嚴格操作。

1.5 統計學方法

采用SPSS11.5軟件包進行數據處理，所有數據均以χ±s表示，組間差異用單因素方差分析，各組均數間兩兩比較采用SNK-q檢驗，Spearman秩相關進行相關性分析。

2 結果

2.1 子宮頸癌患者與子宮肌瘤對照組血清中uPAR含量的比較

見表1。

表1提示:宮頸浸潤癌患者和宮頸原位癌患者血清suPAR水平均比子宮肌瘤對照組顯著升高。具有統計學意義(P<0.01)，宮頸浸潤癌患者與宮頸原位癌患者血清suPAR水平之間沒有差別(P>0.05)。

2.2 子宮頸癌患者血清中suPAR與臨床病理學特征的關系

見表2。表2提示:60例子宮頸癌患者血清中suPAR含量，經SNK-q檢驗，與淋巴結轉移及浸潤程度有關，差異有統計學意義(P均<0.05);與分化程度無關，差異無統計學意義。

2.3 子宮頸癌患者與子宮肌瘤對照組血清中SCC-Ag含量比較

見表3。

表3提示，宮頸癌患者血清中SCC-Ag水平與子宮肌瘤良性組對照比較顯著升高，具有統計學意義(P<0.01)。

2.4 子宮頸癌患者術前與術后半年血清suPAR水平的變化

本研究還收集了同一患者術前及術后半年血清標本共42例，比較其suPAR水平的變化。見表4。

表4提示，同一宮頸癌患者術后半年血清suPAR水平明顯低于術前血清suPAR水平，具有統計學意義(P<0.01)。

2.5 子宮頸癌患者血清suPAR水平與SCC-Ag水平的關系

采用Spearman秩相關對35例宮頸癌患者血清suPAR與SCC-Ag中進行相關性分析，經統計學處理，suPAR與SCC-Ag的相關系數(rs=0.515，P<0.01))。說明宮頸癌患者血清suPAR水平與SCC-Ag水平存在正相關關系。見表5。

3 討論

宮頸癌是危害婦女健康的主要惡性腫瘤之一。根據WHO報道，世界每年新發生的宮頸癌患者約44萬人，其中我國每年的新發病人數為13.5萬人，占世界新發生人數的28.7%。尿激酶受體(uPAR)是近年來新發現的一個單鏈膜糖蛋白[1]，它以糖基化磷酯酰肌(GPI)錨定形式結合在體內許多細胞的表面，如血管內皮細胞、平滑肌細胞以及血液粒、單核系細胞等。在多種病理狀態如腫瘤、炎癥時，細胞表面的uPAR 表達增高，后者從細胞表面脫落釋放入外周循環中成為可溶性uPAR(suPAR)[2，3]。近年來，通過監測血清(漿)suPAR水平的改變來研究各種疾病過程已成為研究uPAR的一個重要方向，國外已有檢測suPAR 的試劑盒問世[4]。SCC-Ag作為宮頸癌血清學的腫瘤標記物已在大量研究中證實。

有研究表明，uPAR在子宮頸癌患者的癌組織中呈現高表達趨勢，其與腫瘤的惡性程度、發生、發展、侵襲及轉移密切相關[5]。Ploug等首先在陣發性睡眠性血紅蛋白尿(PNH)患者的外周血液中發現suPAR，這些患者由于缺乏合成和加工GPI的能力，使得細胞膜表面的uPAR 脫落，血漿中suPAR 含量明顯高于正常。然而到目前為止，suPAR 形成的具體機制還不完全清楚，由于血液中的單核細胞、中性粒細胞表面有uPAR 的表達，因此推測這些細胞的衰老、死亡以及骨髓中巨核細胞的分化和血小板的形成可能是健康者血液中suPAR的來源，聯合檢測宮頸癌患者血中suPAR和SCC-Ag國內外的報道極少。目前尚無可靠的無創性指標來預測宮頸癌的復發、轉移及預后。本研究聯合檢測宮頸癌患者血清中suPAR及SCC-Ag水平，旨在探討其是否可能成為一種新的腫瘤標記物，希望能為臨床診斷、治療及監測預后提供新的靶點。及時發現有復發或轉移的患者，并進行補充治療，降低復發率，延長患者的生存期，使提高患者的生存質量成為可能。

[參考文獻]

[1] Vassalli JD，Baccino D. A cellular binding site for the Mr 55，000 form of the human plasminogen activator，urokinse[J]. J Cell Biol，1985，100:86291.

[2] Holst Hansen C，Hamers MJ，Johannessen BE，et al. Soluble urokinase receptor released from human carcinoma cells:a plasma parameter for xenograft tumor studies[J]. Br J Cancer，1999，81:203-206.

[3] G yetko MR，Chen GH，McDonald RA，et al. Urokinase is required for the pulmonaryin flammation response to cryptococcus neoformans[J]. J Clin Invest，1996，97:1818-1826.

[4] Mizukami IF，Faulkner NE，Gyetko MR，et al. Enzyme-linked immun- oabs orbentassay detection of as oluble form of urokinase plasminogen activator receptor in vivo[J]. Blood，1995，86:203-211.

[5] 郭勇峰，鄭曙民. 尿激酶受體在宮頸癌患者中的表達[J]. 國際腫瘤學雜志，2007，34(7):121-123.

(收稿日期:2009-11-23)