微柱凝膠技術(shù)在新生兒溶血病檢測中的應(yīng)用

[摘要] 目的 應(yīng)用微柱凝膠檢測技術(shù)探討新生兒溶血篩查試驗(yàn)在診斷新生兒溶血病(HDN)中的臨床應(yīng)用。方法 采用微柱凝膠試驗(yàn)技術(shù)對疑為新生兒溶血病的157例黃疸患兒做直接抗人球蛋白試驗(yàn)、游離試驗(yàn)、放散試驗(yàn)。結(jié)果 在157例患者中證實(shí)由血型抗原不合引起的新生兒溶血病患者69例(43.9%)，其中ABO-HDN64例(92.8%)，Rh-HDN5例(7.2%)。在64例ABO-HDN的患兒中，A型29例，占45.3%，B型35例，占54.7%。ABO-HDN患兒A型與B型分布率經(jīng)卡方檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 0.936，P>0.05)。出生天數(shù)≤3d的新生兒溶血病檢出率65.2%(58/89)，明顯高于4～7d的新生兒溶血病檢出率20.8%(11/53)，>7d的15例未檢出陽性標(biāo)本。結(jié)論 微柱凝膠檢測技術(shù)具有操作簡便、敏感性高、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，值得推廣。新生兒血標(biāo)本早期檢測可提高陽性檢出率。

[關(guān)鍵詞] 新生兒溶血病; 微柱凝膠檢測技術(shù)

[中圖分類號] R722.18 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-9701(2010)13-38-02

Application of Microcolumn Gel Immunoassay in Detection of Neonatal Hemolytic Disease

LU Lei LIU Yan

Linyi City Maternity and Child Health Hospital，Linyi 276001，China

[Abstract] ObjectiveTo explore the clinical application of microcolumn gel technique in the diagnosis of neonatal hemolytic disease(NHD). MethodsDirect antiglobulin test，antibody release test and free antibody test were performed in 157 cases suspected of NHD by using microcolumn gel assay. ResultsIn 157 case，69 cases of NHD(43.9%)caused by maternal-fetal blood type incompatibility were identified，in which 64 cases belonged to ABO-NHD(92.8%)and 5 case to Rh-NHD (7.2%). In thoseABO-NHD cases，29 cases(45.3%)were A blood type and 35 cases(54.7%) were B blood type. There was no significant difference in the distribution rates of A blood type and B blood type in ABO-NHD cases(χ2=0.936，P>0.05);And the NHD detection rate in newborns aged ≤3 days was higher than that in newborns aged 4 to 7 days(65.2% vs 20.8%)，and the NHD detection rate was 0% in those aged >7days. ConclusionThe microcolumn Gel immunoassay is sensitive，simple and accurate. Earlier detection of peripheral blood samples from newborns conduces to the diagnosis of NHD.

[Key words]Neonatal hemolytic disease; Microcolumngel immunoassay technique

新生兒溶血病是由于母嬰血型不合，胎兒紅細(xì)胞進(jìn)入母體循環(huán)致使母體產(chǎn)生了相應(yīng)的IgG類抗體。該抗體作用于胎兒紅細(xì)胞而引起的同種被動免疫性疾病。HDN可引起嬰兒貧血、黃疸、水腫、肝脾腫大，嚴(yán)重者可導(dǎo)致膽紅素腦病，引起新生兒死亡或智力發(fā)育障礙。因此，對HDN進(jìn)行早期、準(zhǔn)確的診斷有重要意義。由于微柱凝膠技術(shù)具有操作簡單、結(jié)果準(zhǔn)確、敏感且易于判讀等優(yōu)點(diǎn)，我們對我院2007年12月～2009年11月檢測的157例標(biāo)本進(jìn)行分析，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源

本院2007年12月～2009年11月新生兒科病房高膽紅素血癥疑為HDN的患兒標(biāo)本157例。

1.2 儀器與試劑

①儀器:BYL型血型血清學(xué)多用離心機(jī)與FYQ免疫微柱孵育器由長春博研科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn);②試劑:新生兒溶血病微柱凝膠檢測卡和6%牛蛋白血清標(biāo)準(zhǔn)購于長春博迅生物技術(shù)有限公司，ABO紅細(xì)胞購于上海血液生物醫(yī)藥有限公司。

1.3 方法

1.3.1 ABO、Rh血型鑒定及直接抗人球蛋白試驗(yàn) 將患兒待檢紅細(xì)胞用生理鹽水配成1%的懸液，然后取50μL依次加入新生兒溶血病檢測卡Ⅰ內(nèi)用BYL型血型血清多用離心機(jī)離心5min(900rpm，2min;1500rpm，3min)，取出判定結(jié)果。

1.3.2 游離試驗(yàn) 取新生兒溶血病檢測卡Ⅱ，1、2、3孔各加入患兒血漿50μL，再分別加入50μL 1%的A、B、O標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液。

1.3.3 放散試驗(yàn) ABO血型系統(tǒng)所致的HDN采用熱放散法，Rh血型系統(tǒng)所致的HDN采用乙醚放散法，具體操作步驟見《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[1]。在新生兒溶血病檢測卡Ⅱ的第4、5、6孔中各加入患兒放散液50μL，再分別加入50μL 1%的A、B、O標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液，37℃孵育15min，用BYL型血型血清多用離心機(jī)離心5min(900rpm，2min;1500rpm，3min)。

1.4 結(jié)果判讀

紅細(xì)胞留在微柱上端或分布在凝膠中為試驗(yàn)結(jié)果陽性;紅細(xì)胞沉降至微柱底部為試驗(yàn)結(jié)果陰性。

2 結(jié)果

2.1 檢測結(jié)果

通過對疑為新生兒溶血病的157例黃疸患兒檢測確診為HDN的69例，占送檢標(biāo)本的43.9%。ABO血型系統(tǒng)所致的HDN 64例，占92.8%(64/69)，Rh-HDN 5例(7.2%)。在64例ABO-HDN的患兒中A型29例，占45.3%，B型35例，占54.7%;其血清學(xué)檢測結(jié)果見表1。5例由Rh引起的HDN直接抗人球蛋白試驗(yàn)均為強(qiáng)陽性。

2.2 HDN檢出率與新生兒出生天數(shù)的關(guān)系

見表2。

3 討論

傳統(tǒng)的試管法抗球蛋白檢查方法在手工操作中受到血清與紅細(xì)胞比例、離心速度和時間等因素的干擾，操作過程中需反復(fù)洗滌紅細(xì)胞，結(jié)果判斷人為影響因素較多，重復(fù)性較差;

而且在洗滌過程中由于抗原和抗體之間的親和力較弱，抗體易被洗脫掉，易出現(xiàn)假陰性。微柱凝膠技術(shù)是建立在傳統(tǒng)血型血清學(xué)基礎(chǔ)上的一項(xiàng)免疫學(xué)檢測技術(shù)，是通過調(diào)節(jié)凝膠的濃度來控制凝膠間隙的大小，利用離心力將抗原和抗體反應(yīng)后的凝集紅細(xì)胞留在微柱上端或分布在凝膠中，未凝集紅細(xì)胞通過間隙到達(dá)微柱底部。同時不用洗滌紅細(xì)胞可使抗人球蛋白被殘留蛋白質(zhì)中和，抗人球蛋白被洗滌后殘留的鹽分稀釋所產(chǎn)生的假陰性不再發(fā)生[2]。因此，微柱凝膠法與傳統(tǒng)試管法相比，具有操作簡便、敏感、易于標(biāo)準(zhǔn)化、影響因素少、重復(fù)性好、結(jié)果可保存等優(yōu)點(diǎn)，適用于大批量標(biāo)本的檢測。

我院臨床送檢的157例黃疸患兒檢測確診為HDN的69例，占送檢標(biāo)本的43.9%。ABO血型系統(tǒng)所致的HDN 64例，占92.8%(64/69)，符合臨床HDN以ABO-HDN為常見。母-嬰血型O-A者，HDN的檢出率46.8%(29/62)，O-B者HDN的檢出率38.9%(35/90)，兩者檢出率經(jīng)卡方檢驗(yàn)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

直接抗人球蛋白試驗(yàn)在HDN診斷中有非常重用的作用，陽性提示患兒體內(nèi)紅細(xì)胞被抗體致敏，陽性程度提示發(fā)生溶血的程度。確診為HDN的69例中Rh引起的5例直接抗人球蛋白試驗(yàn)為強(qiáng)陽性，而ABO引起的直接抗人球蛋白試驗(yàn)均為陰性，這是由于Rh引起的HDN較重，而ABO引起的較輕。紅細(xì)胞上的抗體分子數(shù)目較少，不足以和抗人球蛋白產(chǎn)生可見反應(yīng)，而有足夠抗體分子的年輕紅細(xì)胞大部分已被溶解[3]。64例ABO-HDN中，50例放散試驗(yàn)和游離陽性，10例僅放散試驗(yàn)陽性，4例僅游離試驗(yàn)陽性，僅游離試驗(yàn)陽性的患兒結(jié)合臨床后診斷為HDN。理論上HDN放散試驗(yàn)都應(yīng)該是陽性，考慮可能是在制備放散液時，離心的時間和溫度沒有控制好，放散出的抗體又重新吸附到紅細(xì)胞表面，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的假陰性。

HDN可引起新生兒黃疸、貧血、水腫、肝脾腫大，嚴(yán)重的出現(xiàn)膽紅素腦病，使患兒神經(jīng)細(xì)胞受到損害，導(dǎo)致生存質(zhì)量嚴(yán)重下降。因此，采用敏感可靠的實(shí)驗(yàn)檢測手段對HDN早期、準(zhǔn)確的診斷有重要的意義。本組病例研究發(fā)現(xiàn)，出生天數(shù)≤3d的患兒HDN檢出率為65.2%，出生天數(shù)37d的未檢出HDN陽性。游離抗體只在出生后幾天存在，之后會逐漸消失，致敏的紅細(xì)胞也會在出生后逐漸破壞，使真正的HDN漏檢。因此發(fā)現(xiàn)新生兒黃疸的患兒應(yīng)盡早送檢，提高HDN的檢出率，并及時治療。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜. 全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M]. 第3版. 南京:東南大學(xué)出版社，2006:256.

[2] 武建. 微柱凝膠技術(shù)的臨床應(yīng)用及其實(shí)驗(yàn)研究現(xiàn)狀[J]. 中國輸血雜志，2003，16(5):369-371.

[3] 謝世榮，張興明. 凝聚胺技術(shù)在產(chǎn)前血型抗體及新生兒溶血病檢查中的應(yīng)用[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2008，5(4):218-219.

(收稿日期2010-03-10)