上皮型鈣黏附蛋白和增殖細胞核抗原在絨毛膜癌中的表達

[摘要] 目的 探討上皮型鈣黏附蛋白(E-cad)和增殖細胞核抗原(PCNA)在絨毛膜癌中的表達及其意義。方法 采用免疫組織化學的方法檢測15例正常絨毛組織和21例絨毛膜癌組織中E-cad和PCNA的表達。結(jié)果 21例絨毛膜癌患者中E-cad陽性率28.6%(6例，6/21)，正常絨毛組織中E-cad陽性率86.7%(13例，13/15)，兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=11.849，P<0.01)。21例絨毛膜癌患者中PCNA陽性率90.5%(19例，19/21)，正常絨毛組織中PCNA陽性率60.0%(9例，9/15)，兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=10.506，P<0.01)。在21例絨毛膜癌組織中E-cad表達與PCNA表達呈負相關(guān)(r=-0.513，P<0.05)。結(jié)論 E-cad低表達和PCNA高表達是絨毛膜癌的重要生物學特征。

[關(guān)鍵詞] 鈣黏附蛋白; 增殖細胞核抗原; 絨毛膜癌

[中圖分類號] R737.33 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701(2010)11-37-03

Expression of E-cadherin and Proliferating Cell Nuclear Antigen in Chorionic Carcinoma

KONG Huixiang WANG Xi

Department of Pathology，Zhuzhou Municipal Maternal and Child Health Hospital，Zhuzhou 412000，China

[Abstract] ObjectiveTo investigate the expression and value of E-cadherin and proliferating cell nuclear antigen(PCNA) in chorionic carcinoma. MethodsThe expression of E-cadherin and PCNA in 15 cases of normal villi and 21 cases of chorionic carcinoma was detected by using immunohistochemical method. ResultsSix in 21 cases of chorionic carcinoma showed the positive expression of E-cadherin and 13 in 15 cases of normal villi showed the positive expression(P<0.01). The positive expression of PCNA in chorionic carcinoma was higher than that in normal villi. The expression of E-cadherin was negatively correlated with PCNA(r=-0.513，P<0.05). ConclusionE-cadherin and PCNA might play an important role in chorionic carcinoma.

[Key words]E-cadherin; Proliferating cell nuclear antigen; Chorionic carcinoma

絨毛膜癌是一種高度惡性的滋養(yǎng)細胞腫瘤，其特點是滋養(yǎng)細胞失去了原來絨毛或葡萄胎的結(jié)構(gòu)，侵入子宮肌層，造成局部嚴重破壞，并可轉(zhuǎn)移至其他臟器或組織，以致病人迅速地死亡。增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)是與細胞周期密切相關(guān)的增殖細胞核蛋白，是檢測腫瘤細胞增殖活性的指標，有研究表明PCNA與腫瘤等細胞增殖性疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)[1]。上皮鈣黏附蛋白(E-cadherin，E-cad)是一種跨膜糖蛋白，是重要的細胞黏附分子和信號轉(zhuǎn)導分子，參與組織形態(tài)發(fā)生、胚胎發(fā)育和細胞生命過程，其作為細胞黏附分子的功能是控制細胞移動。越來越多的研究表明，E-cad的表達下調(diào)與人類惡性腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移及腫瘤病人的預(yù)后密切相關(guān)[2]。關(guān)于E-cad、PCNA基因在絨毛膜癌中表達情況的聯(lián)合研究，國內(nèi)外少見文獻報道。我們采用免疫組化法檢測了21例絨毛膜癌組織和15例正常絨毛組織中E-cad、PCNA的差異表達，并分析了二者與絨毛膜癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選擇1995年1月～2006年12月本院住院絨毛膜癌(chorionic carcinoma，CC)患者的組織標本21例作為研究組，其中臨床分期I期12例，Ⅱ期及其以上者9例。患者年齡22～50歲，平均32歲。以正常早期妊娠(6～12周)絨毛組織15例作為對照組。標本用中性甲醛固定，石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，HE染色行常規(guī)病理診斷。

1.2 主要試劑及免疫組化染色

鼠抗人E-cad單克隆抗體，購自ZYMED公司，鼠抗人PCNA單克隆抗體及S-P即用型免疫組化試驗盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。標本石蠟切片應(yīng)用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化酶連接(SP)免疫組化方法(按試劑盒說明進行染色)，DAB顯色，蘇木素復染，用已知陽性切片作為陽性對照，用磷酸鹽緩沖液PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷

PCNA定位于細胞核，陽性染色為淡黃色或棕黃色顆粒。按文獻報道[3]根據(jù)著色的強弱評分:不著色為0分，輕度著色為1分，中度著色為2分，強著色為3分。根據(jù)著色腫瘤細胞比例評分:無著色為0分，<25%為1分，25%～50%為2分，>50%為3分。兩種分值相加，0分為(-)，1～2分為(+)，3～4分為(++)，5～6分為(+++)。(++)和(+++)為陽性，(-)和(+)為陰性。

E-cad定位于細胞膜的黃色顆粒為陽性信號，結(jié)合著色強度及陽性細胞百分數(shù)進行半定量評分[4]。每例切片隨機選取5個高倍視野進行結(jié)果判定。依據(jù)鏡下陽性染色程度(A)分為四級:無著色為0分，淺黃色1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。依據(jù)鏡下陽性細胞百分數(shù)(B)分為4級:≤10 為0分，11～50 為1分，51～75 為2分，>75 為3分。每例綜合染色積分:A×B所得值如≥4分視為陽性，示表達正常;<4分為陰性，示表達下降。

1.4 統(tǒng)計學方法

計數(shù)資料采用率表示，比較采用Fisher’s 精確概率檢驗，所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS11.5軟件進行統(tǒng)計學分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 E-cad與PCNA在正常絨毛及絨毛膜癌組織中的表達

E-cad主要定位于絨毛膜癌細胞膜，黃色顆粒為陽性，21例絨毛膜癌患者中E-cad陽性率28.6%(6例)，陰性率71.4%(15例);正常絨毛組織中E-cad陽性率86.7%(13例)，陰性率13.3%(2例)，兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(P=0.001)。

PCNA蛋白染色定位于細胞核，陽性染色為淡黃色或棕黃色顆粒，21例絨毛膜癌患者中PCNA陽性率90.5%(19例)，陰性率9.5%(2例);正常絨毛組織中PCNA陽性率60.0%(9例)，陰性率40.0%(6例)，兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(P=0.002)。

2.2 絨毛膜癌組織中E-cad表達與PCNA表達的相關(guān)性

在21例絨毛膜癌組織中E-cad表達陽性者中4例PCNA表達陰性，分析兩者相關(guān)性呈負相關(guān)(r=-0.513，P<0.05)，見表2。

3 討論

妊娠滋養(yǎng)細胞疾病是一種與妊娠密切相關(guān)的疾病，包括葡萄胎、侵蝕性葡萄胎、絨毛膜癌和胎盤部位滋養(yǎng)細胞腫瘤，其本質(zhì)是胎盤絨毛細胞變性或過度增生[5]。近年來國外學者發(fā)現(xiàn)，許多癌基因、抑癌基因在滋養(yǎng)細胞的增殖、分化、轉(zhuǎn)移及滋養(yǎng)細胞疾病的預(yù)后中起著重要的作用。

研究腫瘤增殖動力學的一個重要方面是檢測腫瘤細胞的增殖活性，細胞增殖活性可以判斷腫瘤惡性程度及評估腫瘤的生物學行為。PCNA是DNA復制時所必需的調(diào)節(jié)蛋白，是與細胞增殖周期有關(guān)的周期蛋白，它參與DNA的合成和修復，為評價細胞增殖活性的重要指標之一。PCNA的陽性程度可直接反映出DNA復制的活躍程度。較高的PCNA指數(shù)預(yù)示著較高的腫瘤細胞增殖活性及較高的腫瘤組織侵犯特性[6]。孫詠梅等[7]研究發(fā)現(xiàn)PCNA在宮頸鱗癌中的表達率明顯高于慢性宮頸炎(P<0.05)，在Ⅲ級鱗癌及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者中的表達率高于I級、Ⅱ級鱗癌及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)，認為PCNA蛋白的表達率與宮頸癌的病理分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與宮頸癌的預(yù)后有關(guān)。Simionescu等[8]對子宮內(nèi)膜癌免疫組化檢測PCNA的表達，結(jié)果所有腫瘤均表達陽性，在高分化、低分化和未分化子宮內(nèi)膜癌中的PCNA指數(shù)分別為40%、60%和85%。本研究結(jié)果顯示，在正常絨毛組織中，PCNA的表達較低(40.0%)，而在絨毛膜癌組織中PCNA的表達明顯增強(90.4%)，兩者差異有統(tǒng)計學意義。

浸潤和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤最重要的生物學特征，腫瘤細胞首先脫離相鄰細胞離開原發(fā)灶，黏附在細胞外基質(zhì)上，然后經(jīng)血道或淋巴轉(zhuǎn)移[9]。細胞間黏附作用的喪失是惡性腫瘤發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟之一[10]。E-cad是一類鈣依賴性黏附分子，普遍存在于各類上皮細胞膜上，可促進上皮細胞間相互黏附、維持組織結(jié)構(gòu)完整性與保持上皮細胞極性[11]。Yuan等[12]對165例胃癌進行免疫組化染色檢測E-cad的表達，結(jié)果胃癌中E-cad的表達顯著降低(P<0.01)，并與腫瘤浸潤深度、分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等呈負相關(guān)(P<0.05)。Xue等[13]對妊娠性滋養(yǎng)層細胞病進行研究，結(jié)果與正常胎盤絨毛中相比，E-cad在絨毛膜癌和完全性葡萄胎中的表達顯著減少(P<0.01，P<0.05)。本研究結(jié)果顯示在絨毛膜癌組織中E-cad表達陽性率為28.6%，而正常絨毛中為86.7%，兩者之間差異有統(tǒng)計學意義。這表明E-cad的低表達，即E-cad的黏附功能喪失，引起細胞黏附連接處功能障礙，使瘤細胞得以脫離原發(fā)灶，獲得轉(zhuǎn)移潛能，可能是導致絨毛膜癌浸潤轉(zhuǎn)移起始的一個關(guān)鍵步驟。

本研究結(jié)果顯示，絨毛膜癌組織中E-cad、PCNA的表達呈負相關(guān)，提示二者之間可能以負反饋調(diào)節(jié)方式參與絨毛膜癌的發(fā)生、發(fā)展。

綜上所述，E-cad低表達和PCNA高表達是絨毛膜癌的重要生物學特征，參與絨毛膜癌發(fā)生發(fā)展的具體分子生物學機制尚需進一步深入研究。

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(收稿日期:2010-02-03)