腦血管畸形患者VEGF的表達及臨床意義

[摘要] 目的 觀察腦血管畸形(CVM)患者血管內皮生長因子(VEGF)蛋白的表達情況，探討VEGF蛋白在腦血管畸形患者中的表達特點與意義。方法 應用免疫組織化學方法檢測62例腦血管畸形患者標本中VEGF蛋白的表達。結果 62例腦血管畸形標本中，VEGF蛋白在畸形血管中陽性表達率為72.6%(45/62)，畸形血管周圍正常腦組織中血管的VEGF蛋白陽性表達率為51.6%(32/62)，兩者比較有差異(P<0.05)。結論 VEGF參與CVM的發生發展。

[關鍵詞] 血管內皮生長因子; 腦血管畸形; 免疫組化

[中圖分類號] R743.4 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701(2010)11-156-02

The Expression of VEGF in Cerebral Vascular Malformation and Its Significance

YANG Yanli1 WEI Maofu2 LIU Jingwen2

1.Department of Medicine;2.Department of Pathology，Humen Hospital，Dongguan 523900，China

[Abstract] ObjectiveTo investigate the expression of VEGF in Cerebral Vascular Malformation(CVM)and find out its significance. MethodsThe expression of VEGF were assessed by immunohistochemistry staining. ResultsIn 62 cease of CVM positive expression rates of VEGF was 72.6%(45/65)and 51.6%(32/62)in normal brain tissues. The positive rate was higher in CVM than in normal brain tissues(P<0.05). ConclusionVEGF might take part in the pathogenesis of cerebral CVM development and growth.

[Key words]VEGF; CVM; Immunohistochemistry

近年來研究發現，血管內皮生長因子(VEGF)在血管的發生、發展、血管結構的穩定及增生、退變中起著非常重要的作用[1]。我們采用免疫組織化學方法對62例腦血管畸形患者組織中VEGF表達的情況進行研究，探討VEGF在腦血管畸形中的表達特點及意義。

1 材料與方法

1.1 標本來源

收集東莞市虎門醫院及東莞市厚街醫院1995年1月～2010年2月期間進行手術的腦血管畸形患者62例，男28例，女34例，年齡19～35歲，平均25.4歲。術后均經病理證實。

1.2 試劑及免疫組化染色方法

鼠抗人VEGF單克隆抗體、抗體稀釋液及試劑盒均購自基因公司。其稀釋度為1∶50。所有標本均用10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，4μm連續切片，按二步法進行免疫組化染色，染色前標本切片進行抗原修復處理，一抗在室溫孵育1h，二抗在室溫下孵育0.5h，DAB顯色，蘇木素復染。用已知陽性的對照片作VEGF抗體的陽性對照，用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照。

1.3 判斷標準

所有免疫組化片子用奧林帕斯BX50顯微鏡進行定性和半定量評估。請三個高職稱病理醫生在不知道臨床信息的情況下獨立地對所有免疫組化片子進行評估。陽性判斷標準為胞質和(或)胞膜出現了黃色或棕黃色顆粒狀，并用陽性片作為對照。每張切片隨機選擇10個視野，40×10高倍顯微鏡下觀察計數。參照文獻[2]方法根據染色的強度及陽性細胞的數量分別計分。A:染色強度:不著色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。B:陽性細胞所占百分率:<5%為0分，5%～25%為1分，25%～50%為2分，50%～75%為3分，>75%為4分。根據染色強度與陽性細胞數得分之積分為4級，即(-)為0分，弱陽性(+)為1～2分，陽性(++)為3～4分，強陽性(+++)為5～6分。將A×B作為其染色的計數，只有A×B > 3 分才算免疫反應陽性，并按乘積分數將染色結果分為4 個等級:-(0～2 分)、+(3～5 分)、+ +(6～8分)和+ + +(9～12分)。

1.4 統計學方法

統計學處理應用SPSS10.0軟件進行χ2檢驗和Fisher確切概率法，P<0.05差異有統計學意義。

2 結果

VEGF表達于胞質和(或)胞膜中。62例腦血管畸形標本中，VEGF蛋白在畸形血管中陽性表達率為72.6%(45/62)，畸形血管周圍正常腦組織中血管的VEGF蛋白陽性表達率為51.6%(32/62)，兩者比較有差異(P<0.05)。見表1。

3 討論

人類血管內皮生長因子(VEGF)的編碼基因全長14kb，由8個外顯子和7個內含子構成，基因編碼產物為34～35kD的同源二聚體蛋白，亞基之間由二硫鍵相連。血管內皮生長因子可產生5種不同的轉錄因子，分別由23、121、165、189和206個氨基酸殘基組成，大部分組織以VEGF165表達為主，是典型的分泌蛋白。血管內皮生長因子是一種特異地作用于血管內皮細胞的多功能因子，與內皮細胞的Flk-1/KDR/VEGF-R2、Flt1/VEGF-R和FLT4/VEGF-R具有高度的親和力，具有促進小靜脈、微靜脈通透性增加、血管內皮細胞增殖、誘導血管生成等作用。促使血液中的纖維蛋白原等大分子物質進入細胞外基質中，形成纖維蛋白凝膠等，細胞外纖維蛋白凝膠作為基質支持新生血管的生成和基質細胞的生長。血管內皮生長因子引起的血管通透性增加是血管生成的先決條件，通過改變內皮細胞基因的活化形式上調uPA、tPAI及PAI-1的表達，誘導蛋白水解酶、間質膠原酶和組織因子在內皮細胞的表達，從而促使內皮細胞的有絲分裂，增殖游走，最終形成新生血管[3，4]。Ferraral等[5]研究發現血管內皮生長因子由神經外胚層細胞合成和釋放，促使毛細血管向神經周圍血管層內生長，這可能是腦血管發育和形成的重要因素。在正常情況下，人體組織中血管內皮生長因子呈低表達，來保持內皮細胞的相對靜止狀態。在某些異常情況下，例如類風濕關節炎、傷口愈合及腫瘤等，星形細胞、肌細胞及成纖維細胞等可合成和分泌血管內皮生長因子，血管內皮生長因子的表達升高并不意味著遺傳因素的改變，而是由于蛋白酶C、腺苷酸環化酶激活劑、雌激素及缺氧環境等誘導血管內皮生長因子的表達[6，7]。本實驗結果顯示，62例腦血管畸形標本中，VEGF蛋白在畸形血管中陽性表達率為72.6%(45/62)，畸形血管周圍正常腦組織中血管的VEGF蛋白陽性表達率為51.6%(32/62)，兩者比較有差異(P<0.05)，結果表明了血管內皮生長因子與腦血管畸形(CVM)的發生發展關系密切。

[參考文獻]

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(收稿日期:2010-03-01)