RP-HPLC法測定黃連上清片中黃芩苷和鹽酸小檗堿的含量

【摘要】目的:建立黃連上清片中黃芩苷和鹽酸小檗堿的RP-HPLC含量測定方法。方法:采用RP-HPLC法，以ODS-C18為固定相，流動相為乙腈-0.5%三乙胺水溶液(磷酸調pH3.0)采用梯度洗脫，檢測波長270nm;流速1.0mL·min-1。結果:黃芩苷和鹽酸小檗堿的線性范圍分別為:0.2249～2.249μg、0.3662～3.662μg(0.9997

【關鍵詞】RP-HPLC;黃連上清片;黃芩苷;鹽酸小檗堿

【中圖分類號】R284.2【文獻標識碼】A【文章編號】1007-8517(2010)18-036-2

黃連上清片是由黃連、黃芩、黃柏(酒炒)、石膏、梔子(姜制)、大黃(酒制)、連翹、菊花、荊芥穗、白芷、蔓菁子(炒)、川芎、防風、薄荷、旋覆花、桔梗、甘草等17味中藥材組成。具有散風清熱，瀉火止痛之功效。用于風熱上攻、肺胃熱盛所致的頭暈目眩、暴發火眼、牙齦疼痛、口舌生瘡、咽喉腫痛、耳痛耳鳴、大便秘結、小便短赤等癥。方中黃連、黃芩、黃柏、石膏清熱瀉火，燥濕解毒;梔子、大黃清熱涼血解毒并可引熱毒從二便而出，共為君藥。該藥原收載于《衛生部藥品標準》中藥成方制劑第六冊，該標準中對部分藥味采用了鑒別手段進行質量控制。為有效的控制產品質量，現采用RP-HPLC法同時測定黃連上清片黃芩苷和鹽酸小檗堿的含量，可以節約分析成本，減少分析誤差，提高藥品質量標準。本法適用于黃連上清片的含量測定及質量控制。

1儀器與試藥

Lc-2010A高效液相色譜儀(日本島津)，BP211D電子天平(北京塞多利斯)。對照品:黃芩苷(110715-200815)和鹽酸小檗堿(110713-200911)均由中國藥品生物制品檢定所提供;甲醇、乙腈為色譜純;水為重蒸水;其他試劑均為分析純。黃連上清片:鄭州豫密藥業股份有限公司(批號:20081203、20090203、20090603);黃連、黃柏、黃芩等藥材均為市售品，并按相關藥品標準鑒定，符合標準規定。

2方法與結果

2.1色譜條件及系統適用性試驗

SHIMADZU VP-ODS C18(250×4.6mm，5μm);柱溫為室溫;

流動相A:乙腈。

流動相B:0.5%三乙胺水溶液(用磷酸調pH3.0)。

流速:1ml`min-1。

洗脫梯度時間程序:

時間(分鐘)流動相A(V/V %)流動相B(V/V %)

檢測器:紫外檢測器，檢測波長270nm。

進樣量:10μL。

在此條件下樣品各組分分離良好，對照品溶液、樣品溶液及各陰性對照溶液的色譜圖見圖1。

A.對照品B.樣品C黃芩陰性對照D.黃連和黃柏陰性對照

1.黃芩苷;2.鹽酸小檗堿

2.2對照品溶液及供試品溶液的制備

對照品溶液的制備:精密稱取黃芩苷和鹽酸小檗堿對照品各0.01181g、0.01465g，至50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液，備用。精密量取5ml置20ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為黃芩苷、鹽酸小檗堿對照品溶液。

供試品溶液的制備:精密稱取黃連上清片細粉約0.4g置25mL量瓶，加甲醇適量，超聲30min，放冷，用甲醇稀釋至刻線，搖勻。取上清液，微孔濾膜過濾，取續濾液2mL置10mL量瓶用甲醇定容，搖勻作為供試品溶液。

2.3精密度試驗

取同一混合對照品溶液，重復進樣5次，每次進樣10μL，記錄色譜峰面積，計算黃芩苷、鹽酸小檗堿的色譜峰面積，其RSD分別為1.0%，1.3%(n=5)，結果表明精密度良好。

2.4重復性試驗

取同一批號黃連上清片細粉(批號20090603)，按2.1項下方法，精密稱定5份，制備供試品溶液，平行測定，計算含量，黃芩苷、鹽酸小檗堿的RSD分別為1.4%，0.9%，表明方法的重復性良好。

2.5穩定性試驗

取同一樣品溶液，分別在0，2，4，6，8，12小時進樣10μL，記錄色譜峰面積，計算黃芩苷、鹽酸小檗堿的色譜峰面積，RSD分別為0.9%，1.2%，說明樣品在12小時內穩定。

2.6線性試驗

精密吸取黃芩苷、鹽酸小檗堿對照品貯備液，分別配置成系列濃度的對照品溶液。注入液相色譜儀，照上述色譜條件測定黃芩苷、鹽酸小檗堿的峰面積。按上述色譜條件進行峰面積測定，以對照品進樣量(μg)為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸，結果見表1。

表1 各指標成分的線性關系

指標成分線性方程r線性范圍

黃芩苷Y=-4.393×104+2.025×104X0.99970.2249～2.249μg

鹽酸小檗堿Y=2.092×104+7.974×105X0.99990.3662～3.662μg

2.7加樣回收試驗

取已知黃芩苷、鹽酸小檗堿含量的同一批樣品(批號20090603)6份，每份約0.2g，精密稱定。分別加入黃芩苷、鹽酸小檗堿對照品儲備液適量置25mL量瓶中，揮干，按2.2項下的方法制備對照品溶液和供試品溶液，按2.1項下的方法進行測定，以25mL中的絕對含量計算加樣回收率，回收率結果見表2。

2.8陰性試驗

按處方制備不含黃芩、黃連和黃柏藥材的樣品，按2.2項下制備方法制備陰性對照溶液，取各陰性對照溶液10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1，由色譜圖可知陰性樣品溶液對樣品含量測定無干擾。

2.9含量測定

取黃連上清片樣品20片，精密稱定，除去包衣，研細。精密稱取細粉約0.4g，按2.2項下方法制備對照溶液和供試品溶液，分別吸取2種溶液各10μL，注入液相色譜儀，每份樣品測2次，依次測定3批樣品，結果見表3。

3討論

為了保證各指標成分都具有適宜的靈敏度，研究了黃芩苷、鹽酸小檗堿在紫外區吸收特性，黃芩苷在波長276nm，324nm處有最大吸收，鹽酸小檗堿在波長225nm，265nm，343nm處有最大吸收。各成分在270nm處均有較強吸收。