淺談ELISA的影響因素

【摘要】ELISA即酶聯免疫吸附試驗，ELISA是一種敏感性高、重復性好的固相酶聯免疫測定廣泛用于各種抗原抗體的檢測，但影響因素較多，有時易出現假陽性或假陰性，本文重點針對內源性、外源性因素對ELISA測定結果的影響進行探討。

【關鍵詞】酶聯免疫吸附試驗(ELISA);測定結果;影響因素

【中圖分類號】R392.33【文獻標識碼】A【文章編號】1007-8517(2010)18-032-1

如今病毒性疾病的診斷主要依賴對其抗原、抗體的檢測。而檢測方法大多采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)，如何保證實驗結果的準確性，現結合自己的實際工作經驗，總結了下列影響因素，希望對檢驗工作者有所幫助。

1內源性干擾因素

1.1類風濕因子(RF)在類風濕患者、其他自身免疫性疾病及正常人的血清中，常含有較高或不同濃度的RF，RF一般為IgM型，能和多種動物IgG的Fc段結合。用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF，它可以充當抗原成份，同時與固相抗體和酶標抗體結合，表現出假陽性反應。

1.2補體補體易激活C1q起到鉸鏈作用，結果易出現假陽性。

1.3嗜異性抗體人類血清中含有天然的嗜異性抗體，將ELISA系統中一抗和二抗連接起來，造成假陽性。

1.4自身抗體由于B細胞的超反應性，患者血清中常出現一些自身抗體，能與靶抗原結合形成復合物。

1.5溶菌酶可致假陽性。

2外源性干擾因素

2.1標本溶血，分離不完全、加有血球。

2.2標本被細菌污染。

2.3標本儲存時間過長。

2.4標本凝固不全。

2.5冰凍保存標本反復凍融。

2.6試劑在室溫下平衡<30分鐘，配洗液的水不符合要求。

2.7加樣速度過快，加樣時加在孔壁上或產生氣泡。

2.8溫育時關鍵因素之一，盡量選擇溫度低的，溫育時間長的試劑盒。

2.9洗滌要徹底。

2.10雙波長比色可減少容器上的劃痕和指印等造成的光干擾。

2.11試劑質量的影響。選用高質量的試劑是保證結果準確的關鍵因素之一。

3高值鉤狀效應(HOOK效應)

在一步法測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時出現鉤狀效應。過量抗原分別和固相抗體和酶標抗體結合，而不再形成“夾心復合物”類同于沉淀反應中抗原過剩的后帶現象，此時反應后顯色的吸光值(位于抗原過剩帶上)與標準曲線(位于抗體過剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同，如按常規法測讀，所得結果將低于實際的含量，這種現象被稱為鉤狀效應，因為標準曲線到達高峰后鉤狀彎落。

綜上所述，ELISA影響因素較多，要想提高檢驗質量，就要加強實驗室科學管理，加強標準化程序操作，加強質量控制，提高人員素質，以減少假陽性、假陰性的發生

參考文獻

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