二妙散對類風濕關節炎大鼠抗炎免疫效果研究

【摘要】目的:研究二妙散對類風濕性關節炎的抗炎免疫作用，并探討其作用機理。方法:以CIA大鼠為模型，觀察關節組織病理學改變;血清抗Ⅱ型膠原抗體IgG和IgM水平，血清和關節組織中IL-6 IL-1β和TNF-a的活性。結果:與模型組比較，二妙散治療組顯著抑制了CIA大鼠骨關節組織的病理學改變，降低了血清中IgM和IgG的含量，抑制了血清和關節組織中IL-6 IL-1β和TNF-a的活性。結論:二妙散對CIA大鼠的抗炎免疫效果明顯。

【關鍵詞】CIA大鼠;二妙散;病理改變;細胞因子

【中圖分類號】R-332【文獻標識碼】A【文章編號】1007-8517(2010)18-024-1

二妙散，由蒼術、黃柏各等份組成，蒼術苦溫燥濕，黃柏苦寒、清熱燥濕，兩味合用，清熱燥濕之力較強，是臨床上治療類風濕性關節炎的基礎方。本文以與人類類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis，RA)臨床特征最為接近的膠原誘導型關節炎(collagen II-induced arthritis，CIA)大鼠模型，從整體角度研究二妙散對CIA大鼠的抗炎免疫作用，并對其療效機制進行初步的探討。

1材料及方法

1.1材料

1.1.1動物及分組健康雄性Wistar大鼠，清潔級，體重(170±10)g。將大鼠隨機分為3組，模型組、正常組、治療組，每組12只。

1.1.2藥品及試劑藥品:二妙散水提液。試劑:牛Ⅱ型膠原;完全弗氏佐劑;IL-1β、TNF-α、IL-6放射免疫分析法測定試劑盒;兔抗鼠IgM抗體和IgG抗體。

1.1.3儀器放射免疫γ計數器;酶標儀。

1.1.4造模及給藥除正常組外，其余2組按文獻方法[1]制備CIA模型，造模后第7天開始灌胃給藥，給藥劑量為1g/kg/d，按1ml/100g體重給藥，每天1次，連續4w，空白對照組和模型組灌服等容積蒸餾水。

1.2方法

1.2.1光鏡下觀察

組織病理學(HE染色)計分標準:具體方法參考文獻[2]。

1.2.2酶聯免疫吸附法檢測血清抗CII抗體IgG、IgM含量，具體操作見說明書。

1.2.3細胞因子含量測定

采用放射免疫分析法:檢測血清和關節組織勻漿中IL-6、IL-1β和TNF-a的含量，具體操作按試劑盒的說明進行。

1.2.4統計方法軟件用SPSS15.0，實驗結果以均數±標準差(-x±s)表示。

2結果

2.1二妙散對CIA大鼠血清抗CII抗體IgG、IgM含量的影響見表1。

2.2二妙散對CIA大鼠關節炎病理計分的影響見表2。

2.3二妙散對CIA大鼠血清和組織勻漿中細胞因子的影響見表3。

3討論

RA是一種以關節和關節周圍組織的非感染性炎癥為主的全身性自身免疫性疾病。現代研究表明:二妙散水提取物進行提取分離，以Pc·DTH為指標的動物實驗研究表明二妙散中黃柏堿和HB-1為免疫抑制作用的主要成分，且二妙散的醇不溶部位雖不含生物堿也有明顯的免疫抑制活性[3]。

CIA模型是目前國際慣用的較理想的RA動物模型，其臨床表現、病理學、免疫學改變和病理機制與人類RA相似。在本次實驗所建立的CIA大鼠模型，觀察發現大鼠普遍出現與RA相似的發病機理。免疫33天血清抗CII抗體IgG、IgM水平顯著升高，炎癥關節觀察到滑膜組織、軟骨及骨破壞嚴重。

IL-1β、TNF-α和IL-6是重要的促炎細胞因子，其在RA中所起的作用已越來越被了解。研究表明，IL-1β和TNF-α在RA炎癥中起核心作用，介導了骨關節一系列的炎癥反應。還參與調節滑膜成纖維細胞的增殖，與其它促炎細胞因子一起聯合介導了RA炎癥組織損傷。在本研究中，我們觀察二妙散水提取物能明顯抑制CIA大鼠血清的IL-1β、IL-6和TNF-α水平，對CIA大鼠血清升高的IL-6水平也有較好的抑制作用，推測這可能是二妙散水提取物抗RA的作用機理之一。

參考文獻

[1] Xiong Cai，Hua Zhou，Yuen Fan Wong，etal.Suppression of the onset and progression of collagen-induced arthritis in rats by QzFGJS，a preparation from an anti-arthritic Chinese herbal formula[J].Journal of Ethno—pharmacology 2007(110):39-48.

[2] Vander Heijde DMFM. Radiographic imaging:‘the gold standard’for assessment of disease progression in rheumatoid arthris[J].Rheumatology，2000，39(suppl.1):9-16.

[3] 陳婷，李昌勤，徐強.二妙散免疫抑制活性成分的研究[J].中國實驗方劑學雜志，1995，1(1):7.