銀耳和黑木耳中果膠含量測(cè)定方法的研究

摘 要: 菌類食品中的營養(yǎng)成分很多，有豐富的維生素、蛋白質(zhì)、氨基酸、微量元素，以及果膠，果膠的含量測(cè)定有多種，本文研究了三種測(cè)定果膠含量的方法。

關(guān)鍵詞: 銀耳 黑木耳 果膠 重量法 比色法

一、實(shí)驗(yàn)部分

1.樣品處理

將干燥樣品研細(xì)，使之通過150um篩:由于兩種樣品溶液比較粘稠所以只稱取2.0000克樣品(黑木耳粉和白木耳粉)于潔凈燒杯中，加入熱的70%乙醇，充分?jǐn)嚢枰蕴崛√穷悾闉V，反復(fù)操作至濾液不呈糖類的反應(yīng)。殘?jiān)?9%乙醇洗滌，再用乙醚洗去脂肪，風(fēng)干掉乙醚。

2.總果膠的提取

用150mL加熱至沸的0.05mol/L鹽酸溶液把漏斗中殘?jiān)翢o損失地移入250mL錐形瓶中，裝上冷凝器，于沸水浴中加熱回流2小時(shí)，冷卻后移入250mL容量瓶中，加甲基紅指示劑2滴。加0.5mol/L氫氧化鈉中和，搖勻，定容。

其中黑木耳顏色較深影響中和，特別是2.0000g的黑木耳，但這不要緊，中和只是大概的，仔細(xì)看還是能看出來，對(duì)于1.0000g的黑木耳溶液影響更淺。

由于樣品比較粘稠，因此要用布氏漏斗抽濾，并且抽濾瓶應(yīng)該潔凈干燥，收集濾液即得總果膠提取液。在抽濾過程中發(fā)現(xiàn)黑木耳溶液太過粘稠，很明顯黑木耳取量太多，所以，又稱取了1.0000g的樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以和2.0000g的樣品進(jìn)行對(duì)照。

二、重量法[1]

1.測(cè)定

取25mL提取液(能生成果膠酸鈣25mg左右)于500mL燒杯中，加入0.1moL/L氫氧化鈉溶液100mL，充分?jǐn)嚢瑁胖?.5小時(shí)，再加入1mol/L乙酸溶液50mL，放置5分鐘，邊攪拌邊緩緩加入1mol/L氯化鈣溶液25mL，放置1小時(shí)(陳化)，加熱煮沸5分鐘，趁熱用烘干至恒重的G2垂融坩堝過濾，用熱水洗滌至無氯離子(用0.1mol硝酸銀溶液檢驗(yàn))為止。將垂融坩堝置于105℃烘箱中干燥至恒重。數(shù)據(jù)如下:

表1 重量法數(shù)據(jù)

公式X=W×10×0.9233/(M×1000)。

2.小結(jié)

此法操作簡(jiǎn)單，精密量取得次數(shù)較少，試驗(yàn)誤差較小，但是，根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件所得果膠酸鈣少，容易帶來誤差，此法適合含果膠多的樣品的測(cè)定。

三、咔唑比色法[2]

1.原理

果膠經(jīng)水解生成半乳糖醛酸，在強(qiáng)酸中與咔唑試劑發(fā)生縮合反應(yīng)，生成紫紅色化合物，其呈色強(qiáng)度與半乳糖醛酸含量成正比，可比色定量。在0—140ug/mL(文獻(xiàn)數(shù)據(jù))半乳糖醛酸溶液范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.試劑

(1)0.15%咔唑乙醇溶液:稱取咔唑0.15g，溶于精制乙醇并定容至100mL。

(2)精制乙醇:取無水乙醇或95%乙醇1000mL，加入鋅粉4g，1:1硫酸4mL，在水浴中回流10小時(shí)，用全玻璃儀器蒸餾，餾出液每1000mL加鋅粉和氫氧化鉀各4g，重新蒸餾一次。

(3)半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)溶液:用水配制成含量為2g/L。

3.樣品測(cè)定

取果膠提取液10.00ml于100ml的溶量瓶中定容(含半乳糖醛酸10—70mg/L)，吸取2mL樣品稀釋液于預(yù)先加入了12mL冷卻的硫酸的試管中(冰浴冷卻)，充分混合后，再置冰水浴中冷卻，然后在沸水浴中加熱10分鐘，冷卻至室溫后，加入0.15%咔唑試劑1mL，充分混合，置室溫下放置30分鐘，以試劑空白調(diào)零，在530nm波長下測(cè)定A530nm與標(biāo)準(zhǔn)樣對(duì)照。

分別準(zhǔn)曲吸取半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(2.002mg/ml)0、1、2、3、4、5、6ml于100ml的容量瓶中定容，得半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液。分別吸取2mL半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液于預(yù)先加入了12mL冷卻的硫酸的7支試管中(冰浴冷卻)，充分混合后，再置冰水浴中冷卻，然后在沸水浴中加熱10分鐘，冷卻至室溫后，加入0.15%咔唑試劑1mL，充分混合，置室溫下放置30分鐘，以試劑空白調(diào)零，在530nm波長下測(cè)定A530nm標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與數(shù)據(jù):

表2 咔唑比色法數(shù)據(jù)

說明:上表中的濃度一項(xiàng)不是整數(shù)，這是由實(shí)驗(yàn)條件計(jì)算得來。

由于此法數(shù)據(jù)重復(fù)性差，標(biāo)準(zhǔn)曲線令人不甚滿意，所以果膠含量未予計(jì)算。

4.小結(jié)

此法標(biāo)準(zhǔn)曲線在此試驗(yàn)條件下，數(shù)據(jù)重復(fù)性很差，難以得到較滿意的R值。為了得到滿意的標(biāo)準(zhǔn)曲線，我們進(jìn)行了五次的試驗(yàn)，以上數(shù)據(jù)是最好的一次，但是還是不滿意。可以得出結(jié)論，在此試驗(yàn)條件下，用此法測(cè)定本樣品中的果膠含量不是很好的。

四、3，5—二甲苯酚顯色法[3]

1.儀器和試劑

(1)0.1%的3，5—二甲苯酚溶于30ml的冰醋酸中，并用冰醋酸定容至100ml。

(2)半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(2.002mg/ml準(zhǔn)確稱取0.5005g的樣品溶于蒸餾水中定容至250ml。

(3)0.3M的NaCl準(zhǔn)確稱取1.7526g的NaCl溶于蒸餾水，定容至100ml。

(4)無水乙醇、優(yōu)級(jí)純硫酸、0.05N的鹽酸。

2.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別準(zhǔn)曲吸取半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(2.002mg/ml)0、1、2、3、4、5、6ml于100ml的容量瓶中定容，得半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液。取7支大試管分別加入半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液0.5ml，水1.1ml，0.3M的氯化鈉0.2ml，再分別徐徐加入濃硫酸8.0ml充分混合，冷卻至室溫，然后在85度的水浴中加熱20分鐘，冷卻后分別和0.2ml的3，5—二甲苯酚，室溫顯色25min后以空白管為參比，1cm比色皿在432nm處測(cè)定各管吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

表3 3，5—二甲苯酚顯色法數(shù)據(jù)

3.樣品測(cè)定步驟

取“一實(shí)驗(yàn)部分”中果膠提取液10.00ml稀釋10倍定容與100ml的容量瓶中。吸取稀釋液0.5ml與大試管中，以下操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)，以空白管為參比測(cè)定樣品管的吸光度，并從標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算出果膠的含量。

表4 樣品吸光度數(shù)據(jù)如下

4.小結(jié)

在進(jìn)行此法實(shí)驗(yàn)時(shí)，糖分被充分提取，樣品中基本不含糖分，從試驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出R值比較令人滿意，線性關(guān)系很好。

五、結(jié)語

我們認(rèn)為重量法雖然操作簡(jiǎn)單，但是所得果膠鈣的量太少，不合適果膠含量少的樣品的測(cè)定，而咔唑比色法數(shù)據(jù)重現(xiàn)性差，效果令人不滿意。3，5—二甲苯酚顯色法在此試驗(yàn)條件下效果最好，因此，推薦用此法測(cè)定本樣品中的果膠含量。

參考文獻(xiàn):

[1]蔣萍初，金繼波，張棉花.果膠含量的測(cè)定[N].化學(xué)世界，1988，(02).

[2]徐汶，王光輝.咔唑比色法測(cè)定豆腐柴葉果膠含量的研究[J].食品安全與檢測(cè)，2006，(3).

[3]周桂，藍(lán)平.桔皮中果膠含量測(cè)定[J].廣西民族學(xué)院學(xué)報(bào)，1995.10.VOL1，(2).