中藥組方對(duì)雞腎型傳染性支氣管炎防治效果觀察

馮善祥

(菏澤學(xué)院動(dòng)物科學(xué)系,山東菏澤274015)

雞腎型傳染性支氣管炎(IB)是由冠狀病毒引起的一種急性、高度接觸性傳染病。我國(guó)于1982年由鄺榮祿首次發(fā)現(xiàn)腎型傳染性支氣管炎,1990年分離出腎型傳染性支氣管炎病毒(IBV)。目前已發(fā)現(xiàn)腎型傳染性支氣管炎病毒毒株的血清型已有16個(gè)之多,且不同血清型之間缺乏交叉免疫力,給疫苗控制本病帶來(lái)了極大的困難[1]。目前,有很多雞場(chǎng)采用抗生素控制繼發(fā)感染、補(bǔ)液通腎等綜合防制方法,但效果不甚滿意。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 1日齡健康A(chǔ)A肉仔雞。

1.2 雞胚 9日齡非免疫雞胚40枚,由青島易邦有限公司提供,母源抗體陰性。

1.3 攻毒株 腎型傳染性支氣管炎病毒強(qiáng)毒株IBV-C1株,由山東家禽研究所禽病中心室提供,由臨床分離并經(jīng)鑒定的野毒株。

1.4 供試藥品 中藥組方由金銀花、連翹、黃連、梔子、黃芩、芍藥、玄參、浙貝母、桔梗、甘草等共 10味藥材。

1.5 對(duì)照藥品 中藥對(duì)照組：清瘟敗毒散,由石膏、地黃、水牛角、黃連、梔子等14味中藥組成,功能、適應(yīng)癥與本品相似,按2005版《中國(guó)獸藥典》標(biāo)準(zhǔn)上用量為每只雞0.5～1.5 g(按每只雞1 g應(yīng)用)。

西藥對(duì)照組：利巴韋林,批號(hào)200509049,遼寧制藥總廠生產(chǎn),用生理鹽水配成1%濃度的溶液備用。按常規(guī)劑量每1 L水用利巴韋林0.1 g。

1.6 疫苗 腎型傳染性支氣管炎疫苗28/86,批號(hào)214670,1 000頭份/瓶,購(gòu)自Abic公司,其他疫苗為國(guó)產(chǎn)常規(guī)疫苗。

1.7 IBV-C1株的增殖 將IBV-C1株種毒用滅菌生理鹽水按1∶10比例稀釋,除菌器除菌,接種9日齡非免疫雞胚,0.1 mL/胚,37℃恒溫培養(yǎng),去除24 h內(nèi)死胚,無(wú)菌收集24 h～48 h內(nèi)死亡雞胚尿囊液,4℃,15 000 r/min離心30 min去除雜蛋白,分裝成5 mL/瓶,-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.8 攻毒劑量的確定 17日齡健康A(chǔ)A雛雞20只,隨機(jī)分成4組,每組5只,四組分別接種增殖后的含IBV-C1的尿囊液 0.1 mL/只、0.2 mL/只、0.3 mL/只、0.4 mL/只。攻毒方法為點(diǎn)眼、滴鼻各2滴,余下劑量腿部肌肉注射。接種病毒后常規(guī)隔離飼養(yǎng),連續(xù)觀察15 d,記錄各組的發(fā)病情況及死亡數(shù),以半數(shù)發(fā)病組攻毒劑量的2倍劑量確定為試驗(yàn)的攻毒劑量。

1.9 動(dòng)物分組 從320只1日齡AA肉雛雞中,選擇體重、大小均勻一致、健康的雛雞240只,按照公母各半簡(jiǎn)化分層的方法,隨機(jī)分為8組,每組30只(見(jiàn)表1)。除疫苗對(duì)照組于1日齡用28/86疫苗滴鼻、點(diǎn)眼各1滴外,其他各組不免疫傳染性支氣管炎疫苗,其他疫苗按常規(guī)免疫程序按時(shí)免疫,平時(shí)加強(qiáng)消毒,各組隔離飼養(yǎng)。在試驗(yàn)期間,自由采食和飲水,所用的飼料、飲水和用具嚴(yán)格分開(kāi),避免交叉污染。

表1 中藥組方對(duì)腎型傳染性支氣管炎試驗(yàn)分組

表2 不同攻毒劑量致雞IB發(fā)病及死亡情況

1.10 給藥方法及劑量 按照表1方法,中藥組方和對(duì)照藥物組(中藥對(duì)照組、西藥對(duì)照組)從15日齡開(kāi)始經(jīng)給藥,連用5 d。除健康對(duì)照組外,各組于17日齡用IBV-C1強(qiáng)毒株滴鼻和點(diǎn)眼各2滴,余下劑量腿部肌肉注射,劑量根據(jù)確定的攻毒劑量給藥。

1.11 臨床觀察與記錄 感染后,每日3次觀察雞只的健康狀況、飲水、采食及糞便情況,記錄各組雞的發(fā)病和死亡情況,并對(duì)病死雞剖檢。感染后第15天(即32日齡)結(jié)束試驗(yàn),全部剖殺試驗(yàn)雞,進(jìn)行病變檢查和記錄。

1.12 判定標(biāo)準(zhǔn)

1.12.1 保護(hù) 攻毒后,未出現(xiàn)臨床癥狀,精神、采食、飲水、糞便等未見(jiàn)異常。

保護(hù)率=每組未發(fā)病雞數(shù)/每組試驗(yàn)雞總數(shù)×100%

1.12.2 發(fā)病 精神沉郁,采食量減少,排白色水樣稀便,打堆,害冷。

發(fā)病率=每組發(fā)病雞總數(shù)/每組試驗(yàn)雞總數(shù)×100%

1.12.3 有效 試驗(yàn)期內(nèi),無(wú)臨床癥狀及有臨床癥狀但未死亡者為有效。

有效率=每組存活雞總數(shù)/每組試驗(yàn)雞總數(shù)×100%

1.12.4 死亡率 凡在試驗(yàn)期間,試驗(yàn)雞出現(xiàn)腎型傳染性支氣管炎典型癥狀并死亡,尸檢發(fā)現(xiàn)典型病變,判定為感染死亡,根據(jù)死亡數(shù)計(jì)算各組死亡率。

死亡率=每組死亡雞總數(shù)/每組試驗(yàn)雞總數(shù)×100%

1.13 數(shù)據(jù)分析和處理 保護(hù)率、發(fā)病率、死亡率、有效率用X2檢驗(yàn)其組間差異性。

2 結(jié)果

2.1 攻毒劑量的確定 在攻毒劑量的確定試驗(yàn)中,根據(jù)觀察指標(biāo)中的臨床癥狀及剖檢特征確定其由IBV引起發(fā)病,結(jié)果表明,攻毒劑量在 0.1～0.2 mL/只,發(fā)病率在40%～80%之間,因而試驗(yàn)攻毒劑量確定為0.3 mL/只。見(jiàn)表2。

2.2 臨床癥狀與病理變化 感染后的32 h出現(xiàn)輕微呼吸癥狀,40 h后病情加重,表現(xiàn)為全群發(fā)病。72 h后出現(xiàn)死亡,死亡集中在4～7 d,11 d后未見(jiàn)死亡。病雞表現(xiàn)精神沉郁,張口呼吸,甩頭,食欲減退或廢絕,排白色稀糞,最后衰竭死亡。剖檢可見(jiàn)氣囊渾濁,氣管下端充血,腎臟腫大,切面有大量的白色尿酸鹽顆粒,質(zhì)地脆弱,呈現(xiàn)花斑狀。直腸和泄殖腔充滿白色的尿酸鹽,輸尿管擴(kuò)張達(dá)正常3～5倍。陰性對(duì)照組的病變比受試藥物組、陽(yáng)性對(duì)照組更為嚴(yán)重,腹膜、胸膜及以包膜上都有尿酸鹽沉積。

2.3 清毒康對(duì)強(qiáng)毒感染雞的防治結(jié)果 試驗(yàn)結(jié)果顯示,在保護(hù)率上,西藥對(duì)照組與中藥對(duì)照組差異不顯著(P＞0.05);受試藥物高、中劑量組與疫苗對(duì)照組相當(dāng),差異不顯著(P＞0.05);受試藥物高、中劑量組與對(duì)照藥物組(中藥對(duì)照組、西藥對(duì)照組)差異顯著(P＜0.05);低劑量組與對(duì)照藥物組(中藥對(duì)照組、西藥對(duì)照組)差異顯著(P＜0.05)。在有效率方面,受試藥物高、中劑量組與疫苗對(duì)照組顯著高于藥物低劑量組與藥物對(duì)照組(中藥對(duì)照組、西藥對(duì)照組)(P＜0.05),藥物高、中劑量組之間、低劑量組與藥物對(duì)照組(中藥對(duì)照組、西藥對(duì)照組)之間差異都不顯著(P＞0.05)。

表3 中藥組方對(duì)雛雞腎型傳染性支氣管炎的試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

3.1 試驗(yàn)過(guò)程中人工攻毒感染雞的腎型傳染性支氣管炎,陰性對(duì)照組發(fā)病率為86.7%,受試藥物組發(fā)病率在23.3%～60%之間,而中藥對(duì)照組發(fā)病率為60%,西藥對(duì)照組發(fā)病率為63.3%,疫苗對(duì)照組發(fā)病率為 30.0%。感染后的雛雞潛伏期為32～40 h,72 h后出現(xiàn)死亡,病程約7 d。臨床癥狀與剖檢變化明顯,張口呼吸或咳嗽喘息,排白色石灰樣糞便,畏寒?dāng)D堆,采食量減少,飲水量增加,精神沉郁,外觀全身衰竭。氣管下端充血,腎腫大,腎小管及輸尿管內(nèi)充滿白色尿酸鹽,整個(gè)腎呈現(xiàn)花斑腎。試驗(yàn)結(jié)束后,受試藥物各組剩余雞只精神良好,發(fā)病雞逐漸康復(fù),食欲、飲水正常。剖檢觀察,所有剩余雞只腎臟、輸尿管恢復(fù)正常,無(wú)尿酸鹽沉積[2]。由此表明中藥組方對(duì)雞的腎型傳染性支氣管炎具有顯著的防治效果。

3.2 根據(jù)中醫(yī)理論,腎型傳染性支氣管炎的防治,臨床上應(yīng)以清熱解毒、清肺化痰、止咳平喘、利水通淋為治療原則。本制劑中金銀花、連翹、黃芩藥性苦、寒,入肺,心經(jīng),具辛涼解表、清熱解毒、涼血之功,共為君藥;梔子為肺經(jīng)之要藥,對(duì)呼吸中樞具有抑制作用,使呼吸運(yùn)動(dòng)趨于安靜而達(dá)止咳平喘作用,浙貝母苦、寒,具開(kāi)泄肺氣化痰之功,黃連清熱、燥濕,瀉中焦之火,三藥共起清熱、燥濕、化痰之效,為臣藥;桔梗宣利肺氣,止咳化痰,并能載諸藥上行入肺,為佐藥;甘草味甘、性平緩,補(bǔ)脾益氣、清熱解毒、祛痰止咳、緩和方中諸藥之性,對(duì)多種病毒具有直接作用,并能誘生干擾素,為使藥。方中君臣佐使協(xié)同作用,取長(zhǎng)補(bǔ)短,具清熱解毒、止咳化痰、宣肺平喘之功,有益于病毒性疾病的防治[3-4]。

3.3 由于我國(guó)迄今為止還沒(méi)有普遍認(rèn)可的腎型傳染性支氣管炎標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株,本試驗(yàn)的攻毒株采用臨床分離并經(jīng)鑒定的野毒株攻毒,毒力較強(qiáng),且攻毒日齡偏低,保護(hù)率普遍不高。又因疫苗株血清型與野毒株也不可能完全一致,且僅在一日齡進(jìn)行1次免疫,故疫苗組的保護(hù)率只有70%,與受試藥物組方量組無(wú)顯著差異,說(shuō)明受試藥物組方高、中劑量都可用于腎型傳染性支氣管炎的預(yù)防和治療。因此本制劑的研制可以用于發(fā)生腎型傳染性支氣管炎時(shí)的輔助治療,或在病毒性疾病多發(fā)季節(jié)及多發(fā)日齡用于預(yù)防,根據(jù)臨床試驗(yàn)結(jié)果,此組方推薦使用劑量為：混飼,每只雞1 g,連用5 d。

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