肽鏈釋放因子和核糖體蛋白L11在八肋游仆蟲細胞中的定位

柴寶峰，李娜，王景濤，申泉，張志云，梁愛華

山西大學生物技術研究所 化學生物學與分子工程教育部重點實驗室，太原 030006

肽鏈釋放因子和核糖體蛋白L11在八肋游仆蟲細胞中的定位

柴寶峰，李娜，王景濤，申泉，張志云，梁愛華

山西大學生物技術研究所 化學生物學與分子工程教育部重點實驗室，太原 030006

原生動物纖毛蟲是一類單細胞真核生物，其蛋白質合成終止過程中密碼子使用的特殊性使其成為研究蛋白質合成終止機制的一個經典模型。為了能夠有效地分析生物大分子在該細胞中的功能作用位點，本研究根據該生物染色體結構的特征，構建了含有紅色熒光蛋白基因的大核人工染色體EoMAC_R，并與之前構建的含綠色熒光蛋白基因的大核染色體EoMAC_G一起，對蛋白質合成終止有關的3個重要因子核糖體大亞基蛋白L11、多肽鏈釋放因子eRF1和eRF3在八肋游仆蟲細胞中進行了熒光共定位分析。結果顯示，在八肋游仆蟲細胞中，蛋白質翻譯過程主要位于“C”形大核內側區域。構建的人工染色體能夠作為一種有效的工具，對目的蛋白質在八肋游仆蟲細胞中進行定位分析。

人工染色體，纖毛蟲，細胞定位，肽鏈釋放因子

Abstract:Protozoan ciliates are a group of unicellular eukaryotes.The special characteristics of stop codons usage in termination of protein biosynthesis in ciliates cells makes them an ideal model to study the mechanism of stop codon recognition of polypeptides release factors.To localize the functional positions of biomolecules in ciliates cell, we constructed a macronuclear artificial chromosome containing a gene encoding red fluorescence protein(EoMAC_R)based on the structural characteristics of ciliates chromosome.Three factors, L11, eRF1a, and eRF3 that are involved in termination process of protein synthesis were colocalized in Euplotes octocarinatus cells by using novel EoMAC_R and the previously constructed EoMAC_G.The results indicated that protein synthesis mainly occurred inside the “C” shape macronucleus, suggesting that EoMAC could be a useful tool for localizing biomolecules in ciliates cell.

Keywords:macronuclear artificial chromosome, ciliates, cellular localization, polypeptides release factors

原生動物纖毛蟲是一類單細胞真核生物，其蛋白質合成終止過程中密碼子使用的特殊性[1-2]使其成為研究蛋白質合成終止機制的一個經典模型。四膜蟲Tetrahymena和草履蟲Paramecium細胞中UAA和UAG編碼谷氨酰胺，僅UGA作為終止密碼子；在八肋游仆蟲Euplotes octocarinatus細胞中UAA或UAG作為終止密碼子，而 UGA編碼半胱氨酸[3]。……