SYBR Green I熒光RT-PCR法檢測貝類中的諾如病毒

莫雪梅，高東微

1 暨南大學藥學院基因組藥物研究所，廣州 510632

2 廣東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心，廣州 510623

生物技術與方法

SYBR Green I熒光RT-PCR法檢測貝類中的諾如病毒

莫雪梅1*，高東微2*

1 暨南大學藥學院基因組藥物研究所，廣州 510632

2 廣東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心，廣州 510623

針對諾如病毒II型的保守區域設計引物，建立了SYBR Green I實時熒光RT-PCR檢測諾如病毒II型的反應體系。此方法的病毒檢測下限達到102拷貝，標準曲線的線形范圍為102～106拷貝，相關系數為0.9952，斜率為?2.982，截距為35.84。對諾如病毒II型檢測特異，與輪狀病毒、腺病毒、甲肝病毒、星狀病毒無交叉反應。針對質粒標準品檢測的批內試驗變異系數 (CV) 為0.95%～1.69% (n=5)，批間試驗CV為0.87%～1.24% (n=3)。運用此方法隨機檢測30份貝類水產品，檢測出2份陽性樣品。結果表明，SYBR Green I熒光RT-PCR檢測諾如病毒II型的方法靈敏、特異、重復性好，可應用于貝類水產品的快速檢測。

諾如病毒 II型，SYBR Green I熒光 RT-PCR，檢測

Abstract:We set up an SYBR Green I real-time RT-PCR method for the detection of genogroup II Norovirus, and this method’s primers were encompassed the conservative region of Norovirus II. The limit of the detection was 102copies. The standard curve’s linear range was 102–106copies, correlation coefficient was 0.9952, the slope was ?2.982, and the intercept was 35.84. This method possessed specificity for genogroup II Norovirus, without any cross-reaction with rotavirus, adenovirus, hepatitis A virus or astrovirus. The coefficients of variation (CV) of theCtvalues of the standard plasmid were 0.95%–1.69% (n=5) in intra-assay and 0.87%–1.24% (n=3) in inter-assay. We used this method to detect 30shellfish samples, and found 3 samples were positive. This method is sensitive, specific and reliable for Norovirus II. It can be used to detect the Norovirus II in the shellfish rapidly.

Keywords:Norovirus II, SYBR Green I real-time RT-PCR, detection

諾如病毒(Norovirus，NVs) 是人類急性非菌性胃腸炎的最主要病原。近年來，諾如病毒引發的大規模腸胃炎事件在世界范圍內頻繁爆發[1-3]，已成為威脅公共衛生安全的重要因素之一。由于水環境的污染，作為濾食性水生動物的貝類，很容易從污染的水中富集大量食源性病毒。當人們生食含有諾如病毒的貝類時，極有可能因感染病毒而誘發急性腸胃炎。因此，建立貝類水產品中諾如病毒的快速檢測方法，對于保障食品安全非常重要。

諾如病毒根據其 RNA多聚酶區 (RDRP) 和衣殼蛋白編碼區核苷酸和氨基酸序列特征，可被分為5個遺傳組 (GG I～V)，其中GG I、GG II和GG IV型可以感染人類[4-5]?！?br>