甘草和連翹對牙鲆CYP3A活性影響的研究

韓現芹, 李 健, 李吉濤

（1．中國水產科學研究院 黃海水產研究所, 農業部海洋漁業資源可持續利用重點開放實驗室, 山東 青島266071; 2. 國家水產品質量監督檢驗中心, 山東 青島 266071）

甘草和連翹對牙鲆CYP3A活性影響的研究

韓現芹1,2, 李 健1,2, 李吉濤1

（1．中國水產科學研究院 黃海水產研究所, 農業部海洋漁業資源可持續利用重點開放實驗室, 山東 青島266071; 2. 國家水產品質量監督檢驗中心, 山東 青島 266071）

研究甘草（Glycyrrhiza uralensis）和連翹（Forsythia suspensa）對牙鲆（Paralichthys olivaceus）肝細胞色素P4503A（CYP3A）活性的影響。將牙鲆隨機分為3組, 即對照組、甘草組和連翹組, 對照組每日口灌0.9%的生理鹽水, 試驗組每日1次口灌甘草30 mg/kg和連翹100 mg/kg, 連續口灌6 d, 第7天時, 采用直接測定法和間接測定法（探針藥物）進行CYP3A酶活性的測定。結果顯示: 在肝微粒體水平上, 甘草和連翹均可明顯提高紅霉素-N-脫甲基酶活性, 分別提高了1.79倍、4.87倍。與對照組相比, 甘草組和連翹組氨苯砜的半衰期分別降低了 4.51%（P＞0.05）和 36.8%（P＜0.01）; 藥時曲線下面積分別減小了

8.28%（P＞0.05）和32.3%（P＜0.01）; 總清除率分別增加了5.63%（P＞0.05）和99.3%（P＜0.01）。說明連翹對牙鲆CYP3A的活性具有極顯著誘導作用, 甘草誘導作用不顯著。提示其他藥物與連翹合用時, 其有效性和安全性可能會受到影響。

CYP3A 活性; 甘草（Glycyrrhiza uralensis）; 連翹（Forsythia suspensa）; 氨苯砜; 牙鲆（Paralichthys olivaceus）

細胞色素P450（CYP450）是肝臟混合功能氧化酶系（mixed function oxidase system, 簡稱MFOS）的主要成分, 主要參與內源性和外源性化合物代謝, 它也可被許多物質, 如治療藥物（如抗生素）、環境化合物及一些天然產物誘導或抑制[1], 已成為近年來藥理學、毒理學研究的熱點之一。CYP3A是 CYP450超家族的主要成員, 現已發現其參與 50%以上臨床常用藥物的代謝[2], 與之相關的藥物相互作用亦十分多見。該酶活性可以通過一些特異敏感底物來測定, 其中氨苯砜在體內主要經 CYP3A代謝, 故可用其消除速率來反映 CYP3A活性。紅霉素-N-脫甲基酶（erythromycin N-demethylase, 簡稱 ERND）是CYP3A標志性酶, 也可以通過測定肝微粒體中ERND的多少, 獲悉肝微粒體中CYP3A酶的活性的大小。目前水產用藥物幾乎都是從獸藥或人用藥物直接移植而來, 臨床用藥很少考慮 CYP450活性對藥物代謝的影響, 因而導致藥效的下降、中毒和殘留的現象, 進而影響了動物性食品安全。甘草（Glycyrrhiza uralensis）和連翹（Forsythia suspensa）是具有保肝護肝、清熱解毒等功效的傳統中藥, 已廣泛添加到水產飼料中, 起到了提高水產動物免疫力、降低飼料系數的作用[3], 但對魚類CYP450活性的影響尚未報道。本試驗通過研究氨苯砜及 ERND在牙鲆體內含量的變化, 探討甘草和連翹對CYP3A酶活性影響的規律, 從而可為其合理用藥提出理論指導。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

牙鲆（Paralichthys olivaceus）, 平均體質量（200±20.1）g, 平均體長（24.5±3.2）cm, 4～5 尾/立方水體,飼養于中國水產科學研究院黃海水產研究所麥島實驗基地。實驗期間水溫（16±2）℃, 鹽度（30.4±0.2）,充氣, 流水, 試驗前暫養2周, 每日投喂不含藥物的配合飼料（金海力海水魚配合飼料）, 實驗前1 d停止投餌。為防飼料對實驗結果的影響, 實驗期間不投餌。

1.2 藥品、試劑與儀器

生甘草、連翹購于青島同仁堂藥店。氨苯砜原粉及標準品批號: 美國 Sigma公司產品, 20060608,純度≥99 %; 乙腈和甲醇: 德國默克公司產品, 色譜級; 牛血清白蛋白純度＞99.8%, Amresco, 批號1105502; 紅霉素: 含量 85%; 其他試劑均為國產分析純試劑。Agilent 1100型高效液相色譜儀（配紫外吸收檢測器）; 96孔酶標板。

中草藥提取液的制備: 取生甘草100 g加水500 mL, 用水浸泡 0.5～1 h, 加熱至沸騰, 煮沸后用文火煎0.5 h, 4層紗布過濾, 殘渣加少于第一次的水煎煮,合并兩次濾液并濃縮, 使其質量濃度相當于原藥0.29 g／mL[4]。連翹提取液制備方法同上, 濃縮后所得質量濃度為0.24 g／mL。

1.3 給藥及樣品采集

將健康牙鲆隨機分為3組, 分別為: （1）正常對照組（0.9%生理鹽水）; （2）甘草組 30 mg/kg; （3）連翹組100 mg/kg。口灌每天1次, 無回吐者保留試驗連續6 d, 于第7天, 從3組中各取10尾魚, 迅速解剖取出肝臟, 保存于液氮中。

然后對3組剩余牙鲆進行腹腔注射5 mg/kg探針藥物氨苯砜, 分別于注射給藥后 0.083, 0.167, 0.25,0.5, 0.75, 1, 1.5, 2, 3, 4, 6, 8, 12 h共13個時間點靜脈取血。每個時間點每組隨機取 5尾從尾靜脈一次性無菌采血 1 mL, 分別置于預先涂有肝素鈉的離心管中,4 000 r/min離心5 min, 分離出血漿, 保存于?20℃冰箱中待測。

1.4 血漿中氨苯砜的測定

1.4.1 血漿樣品的預處理

將血漿自然解凍, 搖勻, 吸取0.2 mL于1.5 mL具塞離心管中, 加入乙腈 0.3 mL, 置漩渦混合器上充分混合, 12 000 r／min離心10 min, 取上清液20μL進行HPLC分析[5]。

1.4.2 色譜條件

色譜柱為 Agilent Tc-C18（250 mm×4.6 mm,5μm）, 柱溫 30℃, 流動相為乙腈-磷酸二氫鉀緩沖液（pH=3.55）（40 : 60, V/V）, 流速為1.0 mL/min, 檢測波長為260 nm, 一次進樣量20 μL。

1.4.3 方法學試驗

1.4.3.1 標準曲線的制備

取空白血漿0.25 mL置于1.5 mL離心管中, 加入不同濃度的氨苯砜標準溶液0.25 mL, 使其終質量濃度分別為0.01, 0.02, 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1, 5, 10 mg/L,然后按“1.4.1”方法操作, 每個樣品重復測定5次。以平均峰面積為縱坐標, 質量濃度為橫坐標做氨苯砜濃度的標準曲線, 求出回歸方程和相關系數。

1.4.3.2 回收率的測定

取空白血漿, 分別加入氨苯砜標準溶液, 制成含氨苯砜 0.25, 2.5, 10 mg/L 3個質量濃度的血樣,按樣品方法處理后進行測定, 每一濃度設5個重復。獲得各樣品的峰面積, 再按血漿標準曲線回歸方程計算得氨苯砜的濃度值, 并與原來加入量比較, 計算方法回收率。即:

1.4.3.3 方法精密度測定

將上述 0.25, 2.5, 10 mg／L氨苯砜血樣, 按“1.4.1”方法處理后進行測定, 每一濃度設 5個重復。每個濃度日內測定5次, 日間測定5次, 計算日內變異和日間變異。

1.5 ERND活性測定

1.5.1 肝微粒體懸液的制備

取出肝臟, 除去脂肪和結締組織, 用冰涼的0.9%生理鹽水漂洗3次, 洗凈血污, 濾紙吸干、稱質量、將肝轉入小燒杯, 用剪刀剪碎肝臟, 轉入預冷的手動玻璃Potter勻漿器。按1 : 5（W/V）的比例加入冰冷的勻漿緩沖液, 置冰浴中制成勻漿。先加入3 mL/g勻漿緩沖液, 上、下8次, 制成肝勻漿, 轉移到離心管中, 再用2 mL勻漿緩沖液倒入勻漿器中沖洗, 合并兩次溶液, 混勻。所有操作均在4℃下進行。勻漿液先以10 000 g, 2℃離心30 min, 棄去沉淀, 取上清液, 即得肝微粒體（MS）, 即 S9部分[6], 分裝于離心管中, ?80℃保存備用。

1.5.2 肝微粒體蛋白濃度測定（BCA法）

1.5.2.1 用牛血清蛋白作標準曲線

BCA試劑分A、B兩部分, 使用前按A:B=50:1的比例配制成BCA試劑工作液。各取質量濃度為0.5 g/L的牛血清蛋白標準液0, 2, 4, 8, 16, 20, 24, 32, 40μL, 補充標準品稀釋液至40 μL。加200 μL BCA試劑工作液; 混勻后 37℃放置 30 min, 以不含蛋白的試劑為空白對照, 562 nm處比色。以系列濃度的牛血清蛋白為橫坐標, OD值為縱坐標繪制標準曲線, 進行線性回歸, 求得牛血清蛋白濃度線性回歸方程。

1.5.2.2 微粒體樣品蛋白濃度測定

將微粒體蛋白樣品稀釋10倍, 取40 μL稀釋液加200 μL BCA試劑工作液, 其余步驟同標準曲線制作, 測定各樣品的OD值, 根據標準曲線及稀釋倍數計算樣品蛋白濃度, 并換算成每克肝中所含的微粒體蛋白含量。

1.5.3 ERND活性測定

1.5.3.1 甲醛標準曲線的制備

先取甲醛溶液0, 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 mL, 根據情況設定, 用蒸餾水補足至2 mL（此時各試管甲醛終量濃度為: 0, 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 nmol/mL。再加Nash試劑2 mL, 60℃水浴10 min, 取出后自來水冷卻5 min。以空白管調零, 在420 nm處測OD值。以甲醛終濃度為縱坐標, OD值為橫坐標制作甲醛標準曲線。

1.5.3.2 ERND活性測定

取0.1 mol/L PBS（pH7.4）1.7 mL, 加微粒體蛋白懸液0.1 mL, 紅霉素0.1 mL, 25 ℃水浴溫孵2 min后, 測定管加10 mmol/L還原型輔酶Ⅱ（nicotinamide adenine dinucleotide 2'-phosphate,簡稱 NADPH） 0.1 mL, 空白管加蒸餾水0.1 mL, 25 ℃水浴30 min。各管均加 ZnSO40.35 mL, 混勻, 冰浴 5 min, 加飽和Ba（OH）220.35m L, 混勻, 室溫放置5 min后, 11 000 r/min, 離心10 min, 取上清液2 mL, 加Nash試劑2 mL, 60 ℃水浴10 min, 拿出后再冷卻5 min, 測酶活。

1.5.3.3 酶活計算

以每毫克蛋白質每分鐘使甲醛增加的量表示酶活性。計算公式:

甲醛 （HCHO） nmol/（mg·min）=（OD酶管－OD非酶管）×K×4/10 min（K 為從標準曲線上求得 OD, 相當于HCHO nmol/L數）

1.6 數據分析與處理

實驗數據以均值±標準差（Mean±SD）表示, 將所得的藥物濃度-時間數據采用藥代動力學專用軟件DAS2.1.1軟件處理, 分別按一、二和三室模型擬合藥動學參數, 選擇最佳房室模型, 計算藥代動力學參數, 通過SPSS13.0軟件進行顯著性檢驗。

2 結果

2.1 探針藥物氨苯砜間接測定

2.1.1 色譜分析

在上述的色譜條件下, 基線平穩, 藥峰與雜峰分離良好, 氨苯砜的保留時間穩定, 出峰時間在10.105 min, 無干擾峰出現。圖1分別是空白血漿、空白血漿加入氨苯砜和體內注射氨苯砜后的色譜行為。

2.1.2 標準曲線、回收率與精密度

在本試驗液相色譜條件下, 將空白血漿加入相應的標準溶液, 預處理后進行HPLC分析, 計算氨苯砜峰面積（A）對氨苯砜的濃度（C）進行線性回歸, 氨苯砜 回 歸 方 程 為 A=1006.735C?18.121 （n=5, r=0.9999）。結果表明: 血漿中的氨苯砜在 0.01～10 mg／L質量濃度范圍內與峰面積之間的相關性好, 血漿中氨苯砜的最低檢測限為 0.01 mg／L, 信噪比（Signal/Noise, 簡稱S/N）＞3。氨苯砜低、中、高（0.25,2.5, 10 mg／L）3種質量濃度的血漿樣品的回收率在94.0%～99.2%, 日內變異和日間變異系數均＜5%,符合生物樣品測定要求。

2.1.3 甘草和連翹對氨苯砜血藥濃度的影響

對照組、甘草組和連翹組的牙鲆腹腔注射探針藥物后, 測得的血漿濃度如圖2所示, 甘草組和連翹組各時間點氨苯砜的平均血藥濃度均低于對照組。

2.1.4 甘草和連翹對牙鲆體內氨苯砜藥代動力學參數的影響

藥動學數據經藥代動力學專用軟件DAS2.1.1處理, 分別用單室、雙室、三室模型進行擬合后, 氨苯砜同二室模型相吻合, 權重為 1/C/C, 其主要藥代動力學參數見表1。

圖1 空白血漿（A）、加入氨苯砜的標準血漿（B）和體內注射氨苯砜后的樣品血漿（C）的色譜Fig. 1 Representative HPLC chromatograms of （A） blank fish plasma, （B） plasma spiked with dapsone standard, and （C）plasma sample after injections of dapsone

和對照組相比, 甘草組和連翹組氨苯砜的消除半衰期（t1/2β）分別降低了 4.51%（P＞0.05）和 36.8%（P＜0.01）; 藥時曲線下面積（area under the concentrationtime curve, 簡稱 AUC）分別減小了 8.28%（P＞0.05）和32.3%（P＜0.01）總清除率（the total body clearance, 簡稱CL）分別增加了 5.63%（P＞0.05）和 99.3%（P＜0.01）。

表1 甘草和連翹對牙鲆單次腹腔注射氨苯砜（10mg/kg）后主要藥代動力學參數的影響（n=5）Tab. 1 Effects of Glycyrrhiza uralensis or Forsythia suspense on main pharmacokinetic parameters of dapsone after a single intraperitoneal administration at 5mg/kg to Paralichthys olivaceus （n=5）

圖 2 甘草和連翹對牙鲆單次腹腔注射氨苯砜（5mg/kg）后血藥濃度的影響（n=5）Fig. 2 Plasma concentrations of Glycyrrhiza uralensis or Forsythia suspensa after single intraperitoneal administration in dapsone at 5mg/kg（n=5）

2.2 紅霉素-N-脫甲基酶活性

2.2.1 牛血清白蛋白標準曲線

BCA法測定肝微粒體蛋白質含量。以系列濃度牛血清白蛋白為橫坐標, 相應的 Y 值（OD 值）為縱坐標, 得線性回歸方程為Y＝1.5806X＋0.1488, 相關系數r＝0.995。該方法的檢測范圍為0.01～0.05 mg/L,最低檢測限為0.01 mg /L。

2.2.2 甲醛標準曲線

以系列濃度的甲醛為橫坐標, 相應的 OD值為縱坐標, 得線性回歸方程為 y＝3.0191x＋0.0195, 相關系數 r＝0.9996。該方法中甲醛為 0.10～0.80 μmol/L質量濃度范圍內與 OD值有良好的線性關系, 最低檢測限為0.10μmol/L。

2.2.3 甘草和連翹對牙鲆肝微粒體蛋白濃度和ERND活性的影響

試驗數據采用Microsoft Excel 2003軟件進行統計分析, 結果以均數±標準差（mean±SD）形式表示,用t檢驗（Student’s t-test）進行平均數間的差異顯著性分析。牙鲆經甘草和連翹處理后, 其蛋白濃度和ERND活性測定結果見表2。

表2 兩種藥物對牙鲆紅霉素-N-脫甲基酶活性的影響Tab. 2 Effect of the two drugs on erythromycin N-demethylase activity in Paralichthys olivaceus（n=10）

3 討論

3.1 氨苯砜色譜條件的優化

三乙胺可以較好地改善峰形, 防止脫尾, 經過反復實驗, 三乙胺的加入量以0.2 mol/L為最好。在所選擇流動相條件下, 保留時間適當, 峰形良好, 且與雜峰具有較好的分離度。

在血漿樣品預處理方法的選擇上, 對有機溶劑萃取法“加氯仿-離心-取有機相-氮氣吹干-流動相溶解-進樣”和“加乙腈-取上清-進樣”進行比較。結果發現,單純用乙腈時對血漿蛋白的清除更為徹底, 能獲得非常清澈的無蛋白上清液。由于減少了氮氣吹干濃縮、復溶等多個步驟, 該方法不僅極大地降低了工作強度,而且操作步驟少, 可直接應用外標法進行分析, 減輕了使用內標法定量分析對分辨率的要求。

流動相 pH和乙腈濃度對氨苯砜的分離均有一定影響, 為此進行了優化試驗。對上述2因素各取5水平流動相pH值: 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5; 乙腈含量: 45%,40%, 35%, 30%, 25%進行研究。結果表明, 影響峰形的是流動相 pH, 在 pH3.5時出的峰比較尖銳, 無托尾或前延現象。影響出峰時間主要是乙腈濃度, 在25%～45%乙腈濃度范圍內, 乙腈比例提高 5%, 其保留時間可縮短0.826 min左右。因考慮到前5 min內有雜峰出現, 盡量保證在5 min后出峰, 因此選用最佳組合流動相pH3.5, 乙腈比例40%作為色譜條件。

3.2 甘草和連翹對牙鲆肝微粒體中 ERND活性的影響

目前, 國內外相關研究主要集中在環境污染物對魚類CYP450的影響, 關于魚類CYP450在藥理學中的研究僅見于氟苯尼考、喹酸和氟甲喹等漁藥口服給藥后對魚類 CYP450活性的影響[7,8], 但關于中藥對魚類 CYP450的研究在國內外尚屬空白。近年來在人和鼠實驗動物上有關中草藥對 CYP450影響的報道逐漸增多, 如葛根（Pueraria lobata）、梔子（Gardenia jasminoides）、甘草（Glycyrrhiza uralensis）、人參（Panax notoginseng）、黃芩（Scutellaria baicalensis）等及其單體化合物黃芩苷、梔子苷、甘草甜素等都對P450酶有調控作用。

CYP3A是肝臟混合功能氧化酶系的主要成分,在內源性和外源性化合物的生物轉化中起重要作用。魚類的CYP450主要位于肝內質網膜, 也少量存在于鰓、腎、心等肝外組織[9], 相關研究已證實了魚類 CYP3A基因的存在[10], 紅霉素 N-脫甲基酶是反映CYP3A活性的標志酶。

本實驗測得對照組的肝微粒體蛋白含量為7.076±0.47 mg/g肝質量, 與陳大健[7]報道的鯽魚肝微粒體蛋白含量 5.238mg/g±0.397 mg/g肝質量基本相吻合。本實驗檢測到牙鲆的紅霉素-N-脫甲基酶活性為 0.0567 nmol/（mg?min）±0.0038 nmol/（mg?min）,和 Vaccaro等[11]在用作對照的未作任何處理的舌齒鱸（Dicentrarchus labrax）上測得的活性 1.162 nmol/（mg?min）±0.200 nmol/（mg?min）相比稍低, 但和哺乳動物的該酶活性相比都相對較低, 可能與哺乳動物CYP3A占 P450總量的比例最高相關。很多研究表明, CYP3A也是魚類消化道和呼吸道表達的主要CYP450組分。而實際水產養殖中, 魚類的用藥方式亦幾乎都是通過消化道途徑。因此, 可以推測CYP3A也可能在魚類口服藥物的首過消除中起著主要作用。

由表2可以看出, 和對照組相比, 甘草組和連翹組 ERND活性明顯升高, 分別提高了 1.79倍、4.87倍, 差異極顯著, 說明甘草和連翹對 CYP3A的活性有極顯著的誘導作用。與譚毓治等[12]報道的甘草主要活性成分甘草酸能誘導小鼠肝微粒體P450水平使其含量及活性增加的結果相符合。

3.3 探針藥物法間接評價甘草和連翹對牙鲆CYP3A活性的影響

本實驗特點是通過探針藥物氨苯砜的代謝速率間接反映了受試藥物對CYP3A活性的影響, 國內外均沒有利用探針藥物研究魚類CYP3A活性的文獻報道。目前哺乳動物上用于測定體內CYP3A活性的常用探針藥物有: 氨苯砜[13]、咪達唑侖[14]和紅霉素[15]。因紅霉素與可的松的實驗條件比較苛刻, 需避光操作, 所以選擇氨苯砜作為檢測CYP3A酶活性的探針藥物。

研究結果表明: 對照組牙鲆氨苯砜的t1/2β為13.301 h, 而胡屹屹等[5]報道的在豬體內氨苯砜的t1/2β為 4.205 h, 可見魚和哺乳動物的t1/2β差異很大,說明同種藥物在不同物種中的消除時間存在較大差異。在哺乳動物內CYP3A占P450總量的比例最高,是參與口服藥物首過效應的主要酶系, 在肝微粒體水平上實驗結果也表明CYP3A標志性酶ERND活性比哺乳動物低得多, 所以哺乳動物代謝氨苯砜的速率相對來說比較快。

口灌甘草6 d后, 氨苯砜的t1/2β、CL和AUC分別為12.701 h、0.150 kg /（L?h）和16.121 mg/（L?h）, 與對照組比較,t1/2β減小了4.51%, CL增加了5.63%, AUC減小了8.28%,與對照組比較差異不顯著, 說明對牙鲆血漿中氨苯砜的代謝率沒有顯著影響, 這可能意味著甘草對CYP3A的誘導作用不強。而文獻報道[12]的高劑量甘草（490 mg/kg）對小鼠肝藥酶有顯著誘導作用, 說明誘導作用強弱可能與劑量有關。高同銀等[16]認為甘草甜素及水解后生成的葡萄糖醛酸具有保肝解毒和誘導藥酶加工處理毒物之功能。據報道[17], 甘草還明顯表現出對CYP1A2的誘導作用。說明同種藥物可以影響多個CYP450亞酶活性, 提示其在與CYP酶代謝有關的藥物合用時, 應充分考慮其對酶影響的差異, 以避免可能的毒性或不良反應。

連翹組氨苯砜的t1/2β、CL和AUC分別為8.401 h、0.283 kg /（L?h）和 11.900 mg/（L?h）, 與對照組比較,t1/2β減小了 36.8%; CL增加了 99.3%; AUC減小了32.3%, 牙鲆的代謝和排泄加快, 表明連翹對牙鲆CYP3A活性具有顯著的誘導作用。與閆淑蓮[18]報道的用連翹對大鼠CYP3A有誘導作用的結論相符。據報道[19]給予連翹提取物可使大鼠 CYP3A的活性增加1倍,人體內也有相似的結果[20]。這與在肝微體水平上, 甘草和連翹對牙鲆CYP3A有誘導作用的結果基本是一致的。孕烷受體（pregnane X receptor, 簡稱PXR）是 CYP3A 基因表達的轉錄活化因子, 調節CYP3A和其他酶及轉運體的表達, CYP3A誘導作用與 PXR結合有關[21,22]。CYP3A的種屬差異與 PXR分子結構的不同有關, 在哺乳動物中, CYP3A的誘導機制由親脂性的化學物包括激素等激活PXR參與的[23,24]。

為了增強治療效果, 臨床上中藥常與抗菌藥結合使用, 一些中藥和西藥之間的相互作用逐漸引起人們的關注。甘草是肝藥酶誘導劑, 據張錦楠[25]報道,服用甘草的大鼠肝微粒體P450水平顯著升高, 使丙咪嗪、氨茶堿、安替比林[26]合用時, 使后者代謝加速,半衰期縮短、藥效減弱。還有諸多文獻報道大劑量甘草及其制劑與四環素、紅霉素、氯霉素等抗生素聯用, 可降低這些藥物的吸收率[27]。其誘導機制可能是多方面的, 確切機制尚需做大量甘草單體成分等研究工作據報道。

近年來, 抗生素、殺蟲劑、激素等非營養性藥物添加劑在配合飼料中長期使用, 導致養殖產品藥物殘留增加, 進而危害動物和人體的健康。中草藥飼料添加劑藥源豐富, 在動物體內毒副作用低, 集營養保健、預防疾病和促進生長于一體。中藥就其物質基礎而言是大量單體化合物的混合物, 起藥理作用的是其主要的活性成分, 因而同樣面臨著肝 CYP對它的氧化代謝作用。由于甘草和連翹作為添加劑無形中和藥物聯合使用越來越普遍, 研究中草藥對CYP450酶活動影響, 特別是代謝大多數藥物的CYP3A家族的影響研究, 不但可以為合理使用中藥提供理論依據, 還可為中藥與中藥間的相互作用及中西藥物的合理配伍應用, 提供具體指導原則。

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Received: Dec., 24, 2009

Key words:CYP3A activity; Glycyrrhiza uralensis; Forsythia suspensa; Dapsone; Paralichthys olivaceus

Abstract:The effects of Glycyrrhiza uralensis （GU） and Forsythia suspense （FS） on activities of cytochrome CYP3A in Paralichthys olivaceus were studied. Fishes were divided into three groups as follows: GU and FS group were administered orally for six days at 30mg/kg·bw and 100mg/kg·bw, respectively; fish in the control group were given an equal volume of normal saline （0.9%）. Seven day after the injection, the activities of CYP3A were measured directly and indirectly. We found that on the level of liver microsomes, GU and FS both increased erythromycin N-demethylase activity significantly by 1.79 times and 4.87 times respectively. Compared with the normal saline-treated control group, metabolism of dapsone in FS and GU group were higher than that in the control group,the elimination half -lives were shortened by 4.51% （P＞0.05） and 36.8% （P＜0.01）, respectively. Area under the concentration-time curve were shortened by 8.28% （P＞0.05） and 32.3% （P＜0.01）, respectively; and the total body clearances were increased by 5.63% （P＞0.05） and 99.3% （P＜0.01）, respectively. The results showed that GU and FS can significantly induced the activity of CYP3A; and the induction effect of FS is higher than GU. A drug’s efficacy and safety may be affected by other drugs used concomitantly.

（本文編輯:譚雪靜）

Effects of Glycyrrhiza uralensis and Forsythia suspensa on cytochrome CYP3A in Paralichthys olivaceus

HAN Xian-qin1,2, LI Jian1,2, LI Ji-tao1

（1. Key Laboratory of Sustainable Utilization of Marine Fishery Resources of the Ministry of Agriculture, Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Science, Qingdao 266071, China; 2. National Center for Quality Supervision and Test of Aquatic Products, Qingdao 266071, China）

S948

A

1000-3096（2010）12-0019-07

2009-12-24;

2010-01-13

公益性行業專項 （nyhyzx07-046）; 國家自然科學基金資助項目（30700617）

韓現芹（1981-）, 女, 碩士生, 主要從事魚類藥物代謝與殘留檢測研究, 電話: 13553086082, E-mail: xianqinhan@yahoo.com.cn; 李健, 通信作者: 電話: 0532-85830183, E-mail: Lijian@ysfri.ac.cn