甲胎蛋白異質體測定對原發性肝癌診斷的作用

龔玉華 王捷婷 高玉鳳 張建軍 王雪梅 熊 茜

鎮江市第三人民醫院檢驗科（212000）

20世紀70年代，Purves發現甲胎蛋白在凝膠電泳時有不同的遷移率，即存在不均一性的糖鏈異質性。而AFP分子糖鏈異質性與其組織器官來源有關，不同生理病理狀況產生不同的糖鏈結構，且具有腫瘤特異性。其中，AFP-L1主要存在于良性肝病，AFP-L2來自孕婦，AFP-L3主要由腫瘤細胞產生[1]。本文利用微量離心柱法測定AFP-L3，探討其在慢性肝炎、肝硬化及原發性肝癌診斷中的價值。

1 對象與方法

1.1 對象

本組患者共52例，分為4組。其中，肝癌23例，男18例，女5例，年齡36～74歲，平均57.1歲；肝硬化24例，男17例，女7例，年齡27～82歲，平均51.1歲；慢性肝炎21例，男16例，女5例，年齡36～67歲，平均47.6歲；肝癌手術后17例，男14例，女3例，年齡36～74歲，平均58.2歲。原發性肝癌病例為本院住院患者，慢性肝炎肝硬化為本院的門診或住院患者，所有病例均經臨床、B超或CT檢查確診，部分患者經手術后病理證實。

1.2 方法

清晨空腹抽取靜脈血3～4mL，3000 r/min離心10min，分離血清置-20℃ 冰箱貯存待檢。AFP-L3檢測試劑由北京熱景生物技術有限公司提供。按照試劑說明書的要求，在柱內預先裝有耦聯了小扁豆凝集素（1ens culi-naris lectin，LCA）的瓊脂糖微量離心柱，加入待檢稀釋血清，可特異性地結合AFP-L3，經離心清洗洗去不結合的甲胎蛋白，然后加人洗脫液，經過離心后收集洗脫液中含有的AFP-L3，用化學發光法檢測分離前血清中甲胎蛋白和洗脫液中AFP-L3的含量，計算AFP-L3占AFP總量的百分比，以AFP-L3超過10%作為陽性判斷界限。

1.3 統計學分析

采用SPSS 13.0軟件進行統計學分析。計量資料比較采用t檢驗，計數資料比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

肝癌、肝硬化、慢性肝炎及肝癌術后患者AFP-L3測定結果，見表1。

表1 各組患者AFP-L3檢測結果比較（±s，%）

表1 各組患者AFP-L3檢測結果比較（±s，%）

注：各組間比較，P＞0.05

組別 例數 AFP-L3 陽性例數 陽性率（%）肝癌 23 29.89±20.67 17 73.9肝硬化 24 13.41±11.91 6 25.0慢性肝炎 21 7.39±5.89 3 14.3肝癌術后 17 7.38±6.58 2 11.8

3 討 論

甲胎蛋白是一個單鏈糖蛋白，在凝膠電泳時AFP有不同的遷移率。隨著生物化學及其相關分析技術的發展，發現AFP分子的糖鏈差異性與外源性凝集素的親和力不同。目前檢測AFP-L3的方法主要有植物凝集素親和層析、親和印跡法、免疫交叉電泳技術等，但上述這些方法操作繁瑣，對技術要求高，限制了AFP-L3在臨床的常規檢測。本研究采用國產的微量離心柱法試劑，可以快速、簡便地獲得AFP-L3的含量，用化學發光免疫法進行定量檢測，方法簡便，利于臨床推廣，可以對肝癌的早期診斷發揮重要的作用。

肝癌起病常隱匿，是病死率僅次于胃癌、食管癌的第三大惡性腫瘤，癌細胞形成發展到有自覺癥狀，大約需要2年時間，在此期間，患者可無任何癥狀或體征，多在肝病隨訪中或體檢普查中應用AFP及B超檢查偶然發現肝癌，此時患者既無癥狀，體格檢查亦缺乏腫瘤本身的體征。肝癌一旦出現癥狀，多數患者確診時已進入中晚期。

我國是病毒性乙型肝炎高發區，乙肝的反復發作會導致正常肝細胞越來越少，發生肝臟纖維化最終發展為肝硬化，甚至肝癌。肝癌患者中約有1/3的患者有慢性肝炎史，肝癌患者中合并有肝硬化者50%～90%。因此，早期發現、定期檢測肝硬化轉為肝癌的預測指標尤為重要。近年來肝癌的發病率呈明顯上升趨勢，治療肝癌的關鍵是強調早期發現、早期診斷、早期治療。

甲胎蛋白作為肝癌的診斷標志物已在臨床上應用多年，許多良性肝病中AFP也會升高，在病理狀態下，AFP也可在胃癌、肺癌、胰腺癌、膽道腫瘤等患者的血清中升高，僅憑血清AFP升高和影像學檢查，無法鑒別此AFP是來源于癌細胞，還是硬化增生結節，難于區分良惡性肝病，對原發性肝癌的早期診斷帶來困難，從而延誤病情。70年代，Purves發現不同來源的AFP由于其糖鏈差異與小扁豆凝集素LCA的親和力不同，利用這種差異，將AFP分為AFP-L1、AFP-L2、AFP-L3三類。AFP-L3又稱甲胎蛋白異質體。臨床研究發現AFP-L3與原發性肝癌（HCC）關系密切，有助于HCC的早期診斷和鑒別診斷[2,3]。

AFP-L3對于良惡性肝病的鑒別診斷及對原發性肝癌尤其是小肝癌診斷極有價值[4]。屠振興等[5]對AFP 20～400＞μg/L、影像學檢查陰性的慢性肝病患者進行AFP-L3的動態觀察，發現AFP-L3在影像學診斷和臨床確診肝癌前3～28個月開始升高，而同時AFP濃度卻沒有較明顯的變化。有文獻報道，AFP-L3陽性預測肝癌發生的正確率高達94%，如果檢測AFP-L3為陰性，就基本可以排除。

本文以AFP-L3（%）≥10為陽性判斷界限，原發性肝癌血清檢測的敏感性為73.9%，均值29.89，與肝硬化、慢性肝炎組的敏感性25%、14.3%，均值13.41、7.39相比，差異有統計學意義（P＜0.001）。在肝癌23例中，3例為低濃度AFP，但AFP-L3均異常。在肝硬化6例AFP-L3異常中，4例為低濃度AFP，在出院時未見有肝細胞癌的臨床診斷。23例肝癌患者中，17例經過手術，術后1個月，15例肝癌患者AFP-L3＜10%，有2例AFP-L3仍然異常。在慢性肝炎21例中，有3例AFP-L3異常。

AFP-L3與原發性肝癌特征相關，因此，作者認為臨床上檢測AFP-L3對鑒別原發性肝癌與慢性肝炎、肝硬化是有幫助的。同時對影像學檢查尚未發現肝癌的特征性占位性病變時，檢測AFP-L3可以作為預測肝癌的預警的指標，對于肝癌術后的復發提供實驗室診斷依據。由于本文研究的病例偏少，未能對AFP-L3＞10%的肝癌術后患者是否復發作出總結。對AFP-L3超過10%的這些高危的慢性肝炎、肝硬化、肝癌術后患者進行隨訪和動態觀察，嚴密監測非常必要。

[1]Taketa K.A—Fetoprotein：reevaluation in hepatology[J].Hepa—tology,1990,12 (6)：1420-1432.

[2]殷正豐.甲胎蛋白異質體作為肝癌標志物的臨床應用[J].實用腫瘤雜志,2004,19(1)：1-4.

[3]陳燕.甲胎蛋白異質體在肝癌診療中的臨床應用[J].福建醫藥雜志,1999,21(6)：95-97.

[4]青柳豐.腫瘤標志物的臨床診斷意義及展望——甲胎蛋白(AFP)L3組分[J].日本醫學介紹,2005,26(12)：49-50.

[5]屠振興,吳孟超,崔貞福.甲胎蛋白異質體對原發性肝癌早期診斷的研究[J].第二軍醫大學學報,1985,4 (6)：193-196.