2036靈芝孢子（全破壁）膠囊長期毒性試驗報告

蔡 颯* 趙安東 孫圓媛 鐘志強

1 深圳大學醫學院組織學與胚胎學教研室（518060）

2 北京市藥品檢驗所藥物安全評價中心（100035）

3 Holistol有限公司

靈芝被公認為扶正固本，滋補強身作用的傳統中藥。靈芝孢子粉是靈芝的精華，其有效成分遠遠超過了靈芝[1]。孢子是靈芝發育后期彈射出來的種子，破壁靈芝孢子粉更有助于吸收。大量的研究表明靈芝孢子粉具有抗腫瘤、增強免疫功能、調節血脂以及對神經、心血管和呼吸系統有調節改善作用[2-5]。2036靈芝孢子（全破壁）膠囊作為知名度很高的保健產品，使用多年，確有明顯治療和保健效果且未見任何毒副作用，但是目前本品尚沒有長期服用的毒性研究資料及完整的安全性評價數據。本研究對2036靈芝孢子（全破壁）膠囊進行了完整的現代毒理學評價。參照中藥新藥研究指南，進行了大鼠長期毒性試驗，為本品安全性評價提供明確理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試品

2036靈芝孢子（全破壁）膠囊，批號：B061202，由香港活力健國際有限公司提供。

1.1.2 動物

SPF級5～6周齡SD大鼠120只，體質量100g～130g，雌雄各半，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，動物質量合格證號：SCXK（京）2007-0001。SPF級大鼠繁殖顆粒飼料和高壓消毒飲用水自由飲食，按性別分籠，每籠3只，觀察10d后用于試驗。

1.2 方法[6,7]

1.2.1 試驗分組和劑量設定

試驗設2036靈芝孢子（全破壁）膠囊高、中、低劑量組和1個陰性對照組。根據本品人用推薦劑量，即成人每天最大用量為5.4g（按照60kg體質量計算，則為90mg/kg），以及本品最大灌胃濃度，設計高、中、低劑量分別為人日用最高劑量的60倍、30倍和15倍，即5.40g/kg、2.70g/kg和1.35g/kg。大鼠陰性對照組給予10mL/kg去離子水。每組雌雄各15只。

1.2.2 給藥途徑及方法

采用與人用相同的灌胃給藥途徑。每日按時對每只大鼠灌胃給藥1次，給藥周期為臨床用藥療程的3倍。采用1周連續給藥6d，休息1d的給藥方式。

1.2.3 觀察指標

1.2.3.1 一般癥狀情況觀察

每天2次（給藥前、后）觀察動物的一般狀態，包括外觀、行為活動、腺體分泌、呼吸、糞便等；每周測定1次動物的體質量及7d進食量。

1.2.3.2 血液學和血清生化學檢查

分別于給藥12周、26周、停藥4周后，進行血液學和血清生化學指標的檢測。血液學指標包括白細胞計數（WBC）、紅細胞計數（RBC）、血紅蛋白含量測定（HGB）、血小板計數（PLT）和白細胞分類（LY%、MO%、GR%）。血清生化學指標包括血清尿素（Urea）、肌酐（Crea）、總膽紅素（T-BIL）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血糖（GLU）、丙氨酸氨基轉換酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）、天門冬氨酸氨基轉換酶（AST）、總膽固醇（T-CHO）、三酰甘油（TG）。

1.2.3.3 解剖檢查及組織病理學檢查

全部實驗組動物完全放血處死，大體觀察后進行解剖，取心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟、腎上腺、腦、睪丸、附睪、子宮、卵巢進行稱量，計算相對臟器系數（以g/100g體質量或mg/100g體質量）并進行組織病理學檢查。

1.3 統計學分析

病理組織學檢查進行定性觀察。體質量、攝食量、血液學、血清生化學和臟器系數均為計量資料，用均數±標準差（±s）表示，根據方差分析結果，進行t檢驗。選用SPSS統計軟件，比較各給藥組與陰性對照組均數的差異顯著性。

2 結 果

2.1 對大鼠一般活動狀況及死亡的影響

試驗期間，沒有發現明顯的與受試物相關的動物異常活動，所有劑量組動物的飲食、飲水、糞便等均正常。未發生因給予受試物作用引起大鼠瀕死和死亡的毒性反應。

2.2 對大鼠體質量的影響

大鼠連續灌胃給藥26周，各給藥組雄性動物的體質量與陰性對照組動物體質量比較，未見顯著性差異（P＞0.05）；在給藥第7周，高劑量組雌性動物的體質量與陰性對照組動物的體質量比較，增長較少，體質量差異有顯著性（P＞0.05），其它各受試組雌性動物與陰性對照組動物體質量比較，未見顯著性差異（P＞0.05）。停藥4周內觀察，各組動物體質量未見顯著性差異（P＞0.05）。

2.3 對大鼠攝食量的影響

大鼠連續灌胃給藥26周，高劑量組在給藥第10、14周，其攝食量較陰性對照組有所減少，差異有顯著性（P＜0.05）。其它各給藥組動物在其它時間的攝食量與陰性對照組動物攝食量比較，差異均未見顯著性（P＞0.05）。

2.4 對大鼠血液學指標的影響

大鼠灌胃給藥12周、26周、停藥4周后，檢測動物的血液學指標，包括：WBC、RBC、HGB、PLT、LY%、MO%、GR%，各給藥組動物血液學各項指標均與陰性對照組相近，差異無顯著性（P＞0.05），見表1。

2.5 對大鼠血清生化學指標的影響

大鼠連續給藥12周、停藥4周后，測定血清生化學各項指標，包括：Urea、Crea、T-BIL、TP、ALB、GLU、ALT、ALP、AST、T-CHO、TG，與陰性對照組比較，未見顯著性差異（P＞0.05）。給藥26周后血液生化學指標檢測結果表明：高劑量組能夠引起大鼠血清中TG含量降低，與陰性對照組比較，差異有顯著性（P＜0.05）；高、中、低劑量組大鼠血清中Crea含量均偏高，與陰性對照組比較，差異有顯著性（P＜0.05，P＜0.01），見表2。

2.6 對大鼠臟器系數的影響

大鼠連續給藥12周，各給藥組大鼠的主要臟器系數與陰性對照組比較，差異未見顯著性（P＞0.05）；大鼠連續給藥26周后，中、高劑量組的肝臟系數降低，與陰性對照組比較，差異有顯著性（P＜0.05，P＜0.01）；停藥4周后，中劑量組的肝臟系數、腎系數均偏低，與陰性對照組比較，差異有顯著性（P＜0.05），見表3，但其相關檢查指標未見明顯改變。

表1 2036靈芝孢子（全破壁）膠囊對大鼠血液學指標的影響（±s，n=10）

表1 2036靈芝孢子（全破壁）膠囊對大鼠血液學指標的影響（±s，n=10）

表2 2036靈芝孢子（全破壁）膠囊對大鼠血液生化學指標的影響（±s，n=10）

表2 2036靈芝孢子（全破壁）膠囊對大鼠血液生化學指標的影響（±s，n=10）

指標 陰性對照組 低劑量組 中劑量組 高劑量組12周 26周 停藥4周 12周 26周 停藥4周 12周 26周 停藥4周 12周 26周 停藥4周GLU(mmol/L) 9.56±1.1210.26±1.389.73±1.57 9.92±1.3911.25±2.529.25±1.4710.43±1.6610.63±2.409.96±1.80 9.63±1.5 8.60±1.08 9.45±1.44 TP(g/L) 80.7±10.7 63.8±5.6 62.5±4.0 79.7±8.0 63.9±4.7 61.8±6.4 81.3±8.6 63.1±6.9 62.9±5.1 78.6±7.0 61.8±6.1 63.2±5.5 TG(mmol/L) 0.83±0.73 0.98±0.50 0.67±0.24 0.74±0.26 0.93±0.26 0.68±0.21 0.49±0.22 0.67±0.21 0.98±0.72 0.57±0.190.56±0.19*0.79±0.36 T-Bil(μmol/L) 3.7±1.5 1.3±0.4 0.2±0.7 4.6±2.2 1.0±0.4 0.2±0.3 3.5±1.2 1.1±0.4 0.3±0.5 4.2±2.7 1.3±0.4 0.2±0.3 ALB g/L 35.1±3.5 35.1±2.2 36.0±2.3 34.5±2.4 35.2±1.8 35.7±3.7 34.4±2.1 34.5±3.5 35.7±4.1 33.9±2.5 33.3±3.5 36.4±3.2 T-CHO (mmol/L)1.76±0.58 1.81±0.34 1.75±0.47 1.91±0.71 1.69±0.30 1.63±0.48 1.64±0.34 1.95±0.70 1.56±0.60 1.58±0.45 1.46±0.41 1.67±0.38 ALT(U/L) 36.7±17.1 42.8±16.3 29.7±7.7 28.5±8.7 43.0±13.9 35.5±8.5 30.0±5.8 40.1±5.6 30.9±10.7 33.5±11.1 40.0±8.0 31.5±5.3 Urea(mmol/L) 6.04±0.97 5.87±0.74 5.89±1.12 5.21±0.79 5.90±0.66 6.10±0.84 5.52±0.88 6.37±1.25 5.76±0.97 5.66±0.78 5.98±0.97 6.23±1.14 AST(U/L) 83.9±24.3108.9±36.985.8±17.9 69.6±9.7 120.5±21.597.6±18.6 69.6±11.4103.3±17.299.7±28.7 78.9±28.7114.9±20.183.5±16.5 ALP(U/L) 65.5±25.5 82.7±26.7 58.4±15.9 70.0±27.4 77.8±15.0 68.1±26.0 71.6±29.1 67.4±37.4 94.8±80.7 88.0±44.5 77.6±36.0 70.3±25.0 Crea(μmol/L) 70.1±11.1 34.8±3.7 39.9±3.8 68.1±16.041.1±4.0** 40.4±4.0 70.6±12.0 40.5±4.5* 41.6±4.6 67.5±11.243.0±5.8** 40.6±5.1

表3 2036靈芝孢子（全破壁）膠囊對大鼠臟器系數的影響（±s，n=10）

表3 2036靈芝孢子（全破壁）膠囊對大鼠臟器系數的影響（±s，n=10）

指標 陰性對照組 低劑量組 中劑量組 高劑量組12周 26周 停藥4周 12周 26周 停藥4周 12周 26周 停藥4周 12周 26周 停藥4周心 0.32±0.03 0.30±0.04 0.29±0.03 0.31±0.03 0.28±0.03 0.31±0.04 0.31±0.05 0.30±0.03 0.26±0.03 0.30±0.02 0.30±0.02 0.29±0.05肝 2.43±0.22 2.61±0.21 2.57±0.33 2.51±0.17 2.46±0.29 2.38±0.28 2.42±0.19 2.24±0.20** 2.19±0.32* 2.49±0.10 2.30±0.23 2.38±0.29脾 0.17±0.02 0.15±0.03 0.16±0.03 0.19±0.05 0.15±0.02 0.14±0.02 0.17±0.02 0.14±0.02 0.15±0.02 0.18±0.04 0.17±0.03 0.14±0.03肺 0.33±0.05 0.30±0.07 0.31±0.06 0.34±0.06 0.29±0.05 0.30±0.06 0.34±0.05 0.32±0.05 0.29±0.04 0.35±0.07 0.35±0.08 0.31±0.07腦 0.53±0.12 0.44±0.14 0.44±0.15 0.53±0.13 0.45±0.13 0.45±0.14 0.53±0.14 0.47±30.11 0.40±0.10 0.55±0.14 0.50±0.15 0.44±0.14腎 0.30±0.03 0.29±0.03 0.29±0.03 0.29±0.03 0.27±0.03 0.28±0.03 0.29±0.02 0.30±0.03 0.25±0.02 0.30±0.02 0.30±0.03 0.28±0.03腎上腺 9.76±2.68 7.95±3.56 8.86±4.47 9.34±2.90 7.34±2.07 8.39±3.75 9.02±2.31 8.66±2.77 7.31±2.52 8.96±2.80 8.25±3.58 7.72±4.91子宮 0.18±0.03 0.19±0.09 0.16±0.05 0.18±0.05 0.19±0.03 0.16±0.03 0.20±0.07 0.19±0.05 0.12±0.04 0.18±0.06 0.21±0.05 0.15±0.04卵巢 13.34±2.6112.97±1.2014.61±4.8111.60±3.3212.11±3.2913.23±4.5012.52±3.05 10.11±2.21 12.80±1.9613.49±1.9511.29±3.7816.21±4.08睪丸 0.38±0.04 0.28±0.07 0.28±0.05 0.35±0.03 0.28±0.03 0.27±0.07 0.29±0.13 0.32±0.03 0.27±0.02 0.35±0.05 0.33±0.06 0.29±0.05附睪 0.14±0.01 0.11±0.02 0.11±0.02 0.12±0.02 0.10±0.02 0.10±0.02 0.11±10.04 0.12±0.01 0.10±0.00 0.13±0.02 0.12±0.03 0.12±0.02

2.7 病理解剖肉眼觀察和組織病理學檢查

給藥12周、26周及停藥4周，各組剖檢后肉眼觀察動物的心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、腦、睪丸、附睪、子宮、卵巢等，未見與受試物毒性作用相關的病理學改變。組織病理學檢查未見受試物毒性作用相關的組織病理學改變。

3 討 論

靈芝孢子粉（The spores from Ganoderma lucidum darst）是靈芝生長成熟期從菌蓋彈射出的微小孢子，具有靈芝的全部遺傳活性物質，集中了靈芝的精華，具有比靈芝更好的藥理作用。既往研究表明，靈芝孢子粉具有抑制腫瘤、調節免疫、調節神經、調節機能四大藥理作用。現代藥理進一步顯示，靈芝孢子粉能保護神經細胞，修補細胞膜，對帕金森癥等具有很好的預防和治療功效[8,9]。

靈芝孢子是公認的具有很高知名度的中成藥，在臨床上和保健品市場使用多年，具有顯著的保健和治療功效。但市場上的靈芝孢子產品龍蛇混雜，對原料來源，加工成型過程，成品質量等控制不嚴，導致產品質量良莠不齊，長期服用劣質的靈芝孢子產品可能對消費者的身心產生不可估測的影響。并且，即使質量控制嚴格的靈芝孢子產品，對它們的長期毒性研究，服用劑量等，在國內外都沒有相關的研究資料，缺乏長期大劑量服用的安全性評估數據。2036靈芝孢子（全破壁）膠囊從原料來源到生產工藝都經受嚴格的質量控制，保證了其產品質量及功效的穩定性。本研究對2036靈芝孢子（全破壁）膠囊進行了完整的現代毒理學評價。

2036靈芝孢子（全破壁）膠囊臨床最大劑量為每人每日5.4g，本試驗設置劑量分別相當于臨床日用最大劑量的60倍、30倍和15倍；給藥期為臨床用藥療程的3倍。大鼠灌胃給藥26周及停藥恢復4周內，動物一般狀態良好、攝食、飲水、糞便均正常，在全部試驗周期中未發生因給予受試物引起的大鼠瀕死和死亡的毒性反應；未發生與受試物明顯相關的血液學、血清生化學和組織病理學的改變。在本試驗條件下，2036靈芝孢子（全破壁）膠囊的無毒劑量為5.40g/kg（相當于臨床擬定人用劑量60倍）。因此，臨床上應用本品是安全的，可以長期大劑量服用。

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