不同貯藏年限哈蟆油的電泳比較

艾秋霞,肖井雷,姜大成

（長春中醫藥大學,吉林 長春 130117）

不同貯藏年限哈蟆油的電泳比較

艾秋霞,肖井雷,姜大成*

（長春中醫藥大學,吉林 長春 130117）

哈蟆油;貯藏;年限;蛋白質;電泳

哈蟆油是一種名貴的動物藥,為東北地區特產的一種營養價值極高的滋補性中藥。哈蟆油在貯藏過程中,常常顏色變深變暗,出現類似“走油”的現象,這些現象不僅使哈蟆油的品質降低,還直接影響其經濟效益。哈蟆油中含有大量蛋白質、氨基酸等,這些成分的變化是否會引起其品質發生變化,故本實驗采用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法考察了不同貯藏年限哈蟆油的蛋白質情況。

1 實驗材料

1.1 儀器 雙穩定時電泳儀DYY-8C[5-600 V,2-200 mA,120 W],北京六一儀器廠;小型雙垂直電泳槽DYCZ-24D,北京六一儀器廠;脫色搖床（水平）WD-9405B型,北京六一儀器廠。所用試劑均為分析純。

1.2 實驗材料 本實驗所用樣品購于吉林省舒蘭市新安鄉梨花林場二人班蛙場,經長春中醫藥大學姜大成教授鑒定為蛙科動物中國林蛙（Rana temporaria chensinensis David）雌體的輸卵管干制品,1～5號分別代表不同貯藏年限（2002,2003,2006,2007,2008年）哈蟆油樣品。

2 實驗方法

2.1 樣品制備[1-2]稱取等量中哈蟆油（樣品1～5）,分別加入等量稀釋4倍的濃縮膠緩沖液研磨,離心30 min（4 000 r/min）,取上清液置冰箱中備用。

2.2 電泳操作 試劑和凝膠的配制參照文獻法進行[3],樣品上清液加入等體積的40%蔗糖液混勻,用微量注射器進樣,在電極緩沖液中加入溴酚藍指示劑示蹤。電泳開始時,電壓控制在80 V,樣品進入分離膠后加大到150V,整個電泳過程維持電壓強度不變。待示蹤指示劑距離前沿約1 cm時,停止電泳。取出板膠,先在水中漂洗,然后放入0.1%的考馬斯亮藍R250染色液中,在常溫下搖床染色10 h,再用含40%甲醇和10%冰醋酸的脫色液脫色,反復更換脫色液,直至背景無色為止。

2.3 電泳圖譜測繪 按泳動率將電泳圖譜分為A（泳動率 ≤0.3）、B（泳動率 0.3～ 0.75）、C（泳動率≥0.75）3個區,按公式（泳動率=蛋白質泳動距離/指示劑泳動距離）計算各樣品譜帶的泳動率。根據樣品譜帶的泳動率、形態、著色度繪制電泳圖譜,以涂黑、斜紋、空白3種符號分別代表一級、二級、三級蛋白譜帶,見圖1。

圖1 5種樣品的電泳鑒別圖譜（由左至右為1～5號樣品）

3 結果與討論

由譜圖1得知,不同貯藏年限哈蟆油的蛋白質電泳譜帶情況基本相同,均為一級帶2條（A區2條）、二級帶3條（B區1條,C區2條）、三級帶1條（B區1條）,說明不同貯藏年限的哈蟆油的蛋白質相對穩定。只是2002年在C區位置出現的2條為三級帶,這可能是由于貯藏時間過長導致蛋白質變化所致,具體原因需做蛋白質含量分析才能得出結果。

:

[1]姜大成,肖井雷.中國林蛙與哈蟆油[M].長春:吉林科學技術出版社,2006:269-311.

[2]曾明,石振武.凝膠電泳鑒別哈士蟆油與蟾蜍輸卵管[J].中藥材,1991,14（4）:25.

[3]張貴君,李曉波,李仁偉,等.常用中藥生物鑒定[M].北京:化學工業出版社,2006:188-190.

R284.11

A

1007-4813（2010）01-0133-01

艾秋霞（1975-）,女,碩士研究生。研究方向:生藥學。

姜大成,男,教授,碩士研究生導師。Tel:13944103315

（

2009-05-25）