高效液相色譜法測定復方黃連液中黃芪甲苷的含量

林曉蓮,林麗君,張尚斌

（1.深圳市羅湖區中醫院,廣東 深圳 518001;2.深圳市中醫院,廣東 深圳 518020）

高效液相色譜法測定復方黃連液中黃芪甲苷的含量

林曉蓮1,林麗君1,張尚斌2

（1.深圳市羅湖區中醫院,廣東 深圳 518001;2.深圳市中醫院,廣東 深圳 518020）

目的探討復方黃連液中黃芪甲苷的含量測定方法。方法采用高效液相色譜法,用Kromasil C18色譜柱（200 mm×4.6 mm,5 μ m）,流動相為乙腈-水（1∶2）,流速1.0 mL/min,檢測波長為200 nm。結果 黃芪甲苷進樣量在0.064～200 μ g/mL范圍內與峰面積呈線性關系,加樣回收率為97.85%,RSD為1.96%（n=6）。結論該方法簡單、準確、重現性好,可用于復方黃連液的質量控制。

復方黃連液;黃芪甲苷;高效液相色譜法;含量測定

1 儀器與試藥

Agilent Technologien 1100型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）;UV2450型紫外可見分光光度計（日本島津公司）;AE240型分析天平（瑞士梅特勒公司）。黃芪甲苷對照品（中國藥品生物制品檢定所,批號:0781-9807）;甲醇、乙腈為色譜純,水為重蒸餾水,其他試劑為分析純;復方黃連液（本院自制產品,批號為20081101 、20081105 、20081110）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件[5]色譜柱:Kromasil C18柱（200mm×4.6mm,5μ m）;流動相 :乙腈 -水（1∶2）;柱溫:250℃;流速:1.0mL/min;檢測波長:205nm;進樣量:10μ L。以黃芪甲苷計,理論塔板數不低于4 000。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取黃芪甲苷對照品適量,加甲醇溶解制成每1 mL含0.2 mg的溶液,即得黃芪甲苷對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取批號為20081101的復方黃連液5 mL,加水稀釋至20 mL,置分液漏斗中,用水飽和的正丁醇萃取3次,每次20 mL,正丁醇萃取液合并,用1%氫氧化鈉溶液洗滌3次,每次15 mL,再用正丁醇飽和水洗滌至中性。正丁醇層水浴蒸干,以甲醇溶解定容至10 mL,搖勻,用微孔濾膜濾過,棄初濾液,續濾液作供試品溶液。

2.2.3 陰性供試品溶液的制備 按照復方黃連液處方比例,稱取除黃芪以外的其他藥材,按供試品溶液的制備方法操作制備復方黃連液黃芪陰性制劑,得陰性供試品溶液。

2.3 測定波長選擇 取對照品溶液,加流動相稀釋,采用紫外分光光度儀掃描。結果在205 nm波長處有最大吸收,故選擇205 nm作為測定波長。

2.4 方法學考察

2.4.1 陰性干擾試驗 分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各10 μ L,注入液相色譜儀測定。結果陰性對照品溶液在黃芪甲苷色譜峰相應位置上無吸收峰出現,表明陰性對照無干擾。

2.4.2 線性關系考察 分別精密吸取黃芪甲苷對照品2.0 mg,置10 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,混勻,5倍量倍比稀釋,得溶液濃度分別為200,40,8,1.6,0.32,0.064 μ g/mL,用微孔濾膜濾過 ,進 樣 10 μ L,測定黃芪甲苷的峰面積,以黃芪甲苷對照品的進樣量為橫坐標,峰面積為縱坐標,繪制標準曲線,得回歸方程Y=2.983×105X+1.317×104,r=0.999 7（n=5）。結果表明黃芪甲苷進樣量在0.064～200 μ g范圍內與峰面積有良好的線性關系。

2.4.3 精密度試驗 精度吸取對照品溶液10 μ L,連續進樣6次,結果RSD為1.05%（n=6）,表明儀器精密度良好。

2.4.4 穩定性試驗 取同一供試品溶液,分別于0,2,4,6,8,12 h時進樣10 μ L。結果供試品中黃芪甲苷峰面積值的RSD為0.72%（n=6）,表明溶液穩定性良好。

2.4.5 加樣回收試驗 精密量取批號為20081105的已知含量復方黃連液1mL,共6份,各精密加入一定量的黃芪甲苷對照品,照供試品溶液制備方法制備待測溶液。測定,計算回收率,平均回收率為97.85%（n=6）,RSD 為1.96%。

2.4.6 樣品含量測定 按2.2.2項下供試品溶液制備方法制備溶液,精取3個批號6個樣品進行分析。結果見表1。

表1 樣品測定結果

3 討論

3.1 在2005年版《中國藥典》中,黃芪藥材的含量測定已經采用HPLC[5],資料顯示含黃芪的復方制劑現多采用HPLC測定黃芪甲苷的含量[6-7]。本文采用HPLC法對復方黃連液中黃芪甲苷進行含量測定,前處理簡單,分離度好,靈敏度高。

3.2 本測定法中比較多種比例的流動相,結果以乙腈-水（1∶2）為優,保留時間適中。

3.3 3個批號6個樣品測得的黃芪甲苷含量差異不大,說明黃芪藥材來源穩定的重要性。

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[1]唐吉平,蔣順琬,林志文,等.復方黃連液對慢性骨髓炎患者紅細胞免疫功能的影響[J].中醫正骨,2005,17（3）:3.

[2]蔣順碗,岑澤波,陳基長.自制黃連液外用治療慢性骨髓炎療效觀察[J].中國中醫骨傷科雜志[J],1997,5（1）:12.

[3]丁水平,馬寶瑕,張銳.黃芪甲苷檢測在黃芪及其制劑控制中的應用[J].中國藥師,2001,4（5）:360.

[4]王寶,蘇健,魯靜.黃芪甲甙的檢測在中藥質控中的應用[J].中國中藥雜志[J],1996,21（3）:16.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京:化學工業出版社,2005:212.

[6]覃學謙,陳洪濤,蔡丹昭.HPLC法測定芪麥口服液中黃芪甲苷的含量[J].廣西中醫學院學報,2005,8（4）:57.

[7]夏愛軍.用HPLC法測定芪歸生血膠囊中黃芪甲苷的含量[J].藥學服務與研究,2008,8（4）:10.

R284.2

A

1007-4813（2010）01-0128-02

廣東省中醫藥管理局資助課題（編號:2008026）

本實驗是廣東省中醫藥管理局資助課題《復方黃連液的質量標準的研究》的質量控制內容。復方黃連液由黃芪、黃連、黃柏、梔子等中藥組方而成的醫院制劑,具有補氣升陽、益衛固表、托毒生肌、利水消腫等功效,在治療慢性骨髓炎,具有改善病灶周圍組織供血,促進死骨吸收或排出,縮短病程,增強免疫功能及抗菌消炎之作用[1-2]。本方中黃芪為君藥,《中華人民共和國藥典》和部頒藥品標準中分別規定黃芪藥材和黃芪注射液的定量指標成分為黃芪甲苷,為了更好地控制制劑質量,保證其療效,筆者用高效液相色譜（HPLC）法測定制劑的黃芪甲苷含量[3-4]。現報道如下。

（

2009-10-19）