UPLC法測(cè)定洋鐵酸模中大黃素和大黃酚

蔡廣知,王莎莎,孫全樂(lè),沈曉君,郭云龍,貢濟(jì)宇

（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,吉林長(zhǎng)春 130117）

UPLC法測(cè)定洋鐵酸模中大黃素和大黃酚

蔡廣知,王莎莎,孫全樂(lè),沈曉君,郭云龍,貢濟(jì)宇*

（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,吉林長(zhǎng)春 130117）

目的 建立洋鐵酸模中大黃素和大黃酚的定量分析方法。方法采用超高效液相色譜法（UPLC法）。結(jié)果大黃素和大黃酚的質(zhì)量濃度與峰面積間呈良好的線性關(guān)系。平均回收率大黃素為98.7%,RSD為1.38%;大黃酚為100.4%,RSD為0.98%（n=6）。結(jié)論本方法簡(jiǎn)便、快速,重現(xiàn)性和精密度均較好,優(yōu)于常規(guī)液相色譜（HPLC）,可用于洋鐵酸模中大黃素和大黃酚的含量測(cè)定。

UPLC法;洋鐵酸模;大黃素;大黃酚

洋鐵酸模（Rumex patientiaL.var.callosus F.Schm.et Maxim）為蓼科酸模屬植物巴天酸模[1]（Rumex patientia L.）的變種,又名洋鐵葉,產(chǎn)于我國(guó)北方。對(duì)該植物的研究,報(bào)道很少。但其同屬其它植物有研究報(bào)道,如:南方所產(chǎn)羊蹄[2-3]（Rumex japonieus）、北方所產(chǎn)巴天酸模（R.patientia）、毛脈酸模（R.gmelini）和新疆產(chǎn)皺葉酸模（R.crispus）。酸模屬植物的根中含有大黃素、大黃酚、大黃素甲醚等蒽醌類有效成分[4],具有抑菌、止血及止咳的功效。以治療皮膚疾患和止血著稱。本文采用超高效液相色譜法測(cè)定了洋鐵酸模中大黃素和大黃酚的含量。

1 儀器與試藥

Waters Acquity超高效液相色譜、紫外檢測(cè)器和Empower工作站軟件。大黃素、大黃酚對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所:批號(hào)分別為110756-200110和110796-200110。洋鐵酸模藥材樣品采于吉林省內(nèi)各地,經(jīng)長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)張亞芝教授鑒定。乙腈為色譜純,水為重蒸水,其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:ACQUITY UPLC TM BEH C18（1.7μ m,2.1 mm ×50mm）,流動(dòng)相:乙腈-0.1%磷酸（60∶40）;流速:0.25mL/min;柱溫:30℃;檢測(cè)波長(zhǎng):254 nm 。

2.2 對(duì)照品混合溶液的制備 精密稱取大黃素對(duì)照品適量,加甲醇溶解,制成1.00 mg/mL的大黃素對(duì)照品儲(chǔ)備液;精密稱取大黃酚對(duì)照品適量,加甲醇溶解,制成0.53 mg/mL的大黃酚對(duì)照品儲(chǔ)備液;分別精密吸取0.3 mL的大黃素和大黃酚對(duì)照品儲(chǔ)備液,置同一10 mL量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,混勻,即得每毫升含大黃素30 μ g和大黃酚10.75 μ g的對(duì)照品混合溶液。

2.3 供試品溶液的制備[5-7]取洋鐵酸模藥材粉末0.5 g,精密稱定,置50 mL容量瓶中,加乙醇40 mL,超聲提取30 min,放冷,加乙醇定容至刻度,搖勻,濾過(guò),即得。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備[8-10]分別精密吸取大黃素、大黃酚對(duì)照品儲(chǔ)備液0.18,0.27,0.36,0.45,0.54mL,置同一10 mL量瓶中,加甲醇稀釋并定容至刻度,搖勻,得不同濃度的大黃素和大黃酚混合對(duì)照品溶液。依次吸取上述混合對(duì)照品溶液5 μ L,注入超高效液相色譜儀,按上述色譜條件測(cè)定,記錄峰面積積分值和保留時(shí)間,計(jì)算得大黃素回歸方程:Y=6×106X-301 050,r=0.999 9,表明大黃素在0.09～0.27 μ g范圍內(nèi)與峰面積積分值具有良好的線性關(guān)系;大黃酚回歸方程:Y=3×107X-434 912,r=0.999 9,表明大黃酚在 0.03～0.09 μ g范圍內(nèi)與峰面積積分值具有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液,重復(fù)進(jìn)樣5次,測(cè)定大黃素、大黃酚的峰面積值,計(jì)算RSD分別為0.12%和0.11%,表明儀器的精密度良好。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一樣品5份,精密稱定,依樣品溶液的制備方法制得供試品溶液,分別進(jìn)樣5 μ L,測(cè)得大黃素及大黃酚峰面積值,計(jì)算RSD分別為0.19%和0.15%,表明方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液,分別于0,2,4,8,12,24 h,注入液相色譜儀,測(cè)定并記錄大黃素、大黃酚的峰面積值,計(jì)算 RSD分別為0.18%和0.16%,表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取同一已知含量的樣品6份,精密稱定,精密加入大黃素和大黃酚對(duì)照品溶液,依2.3項(xiàng)下方法分別制得供試品溶液,測(cè)定大黃素和大黃酚的峰面積值,計(jì)算回收率,大黃素和大黃酚的平均回收率分別為98.7%和100.4%,計(jì)算RSD分別為1.38%和0.98%,表明方法的準(zhǔn)確度良好。

2.9 樣品測(cè)定 取各批次洋鐵酸模樣品,按2.3項(xiàng)下方法制得供試品溶液,進(jìn)樣量5 μ L,測(cè)定并記錄大黃素、大黃酚的峰面積積分值,計(jì)算大黃素及大黃酚的含量,結(jié)果見表1,圖1、圖2。

圖1 大黃素、大黃酚標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖

圖2 洋鐵酸模的超高效液相色譜圖

表1 洋鐵酸模中大黃素、大黃酚的含量

3 討論

相對(duì)于常規(guī)高效液相色譜法（HPLC）而言,超高效液相色譜法（UPLC）[11]有高分離度、高速度、高靈敏度等優(yōu)點(diǎn)。AQUITY UPLC系統(tǒng)可以實(shí)現(xiàn)樣品的高效、快速分析。本文中樣品采用UPLC法分析檢測(cè)時(shí)間僅為HPLC的1/4,適當(dāng)增加流速可以使檢測(cè)時(shí)間縮短為HPLC的1/6。UPLC使用1.7 μ m粒徑的色譜柱填料,使色譜柱的柱效極大提高,色譜峰變窄,峰容量增加。此外,UPLC進(jìn)樣量為5μ L時(shí),最高峰的吸收值為0.20 AU,HPLC進(jìn)樣量5 μ L時(shí),與UPLC中對(duì)應(yīng)峰的吸收值為1.7 AU,檢測(cè)靈敏度提高了8倍以上,UPLC的優(yōu)勢(shì)明顯。UPLC在樣品分析測(cè)定中的優(yōu)越性,可以大大提高工作效率。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,不同地區(qū)洋鐵酸模中游離大黃素和大黃酚的含量差異較大,這可能與采收時(shí)間,藥材的生長(zhǎng)環(huán)境等因素不同有關(guān);生長(zhǎng)在山上及河邊潮濕地區(qū)的洋鐵酸模藥材,其游離大黃素和大黃酚的含量要高于生長(zhǎng)在路邊干燥地區(qū)的藥材。洋鐵酸模的莖、葉、花及果實(shí)中只含有少量的大黃素,未檢測(cè)出大黃酚。本文首次采用超高效液相色譜法測(cè)定了吉林省不同產(chǎn)地洋鐵酸模中游離型大黃素和大黃酚的含量,為充分開發(fā)利用該種藥用資源提供了依據(jù),為UPLC在中藥分析中的深入應(yīng)用積累了條件。

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R285.2

A

1007-4813（2010）01-0121-02

蔡廣知（1977-）,男,博士研究生。研究方向:中藥鑒定和中藥分析的教學(xué)、科研研究。

貢濟(jì)宇,女,教授,碩士研究生導(dǎo)師。Tel:0431-86172207,E-mail:gjy0431@126.com

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2009-10-20）