三黃瀉心湯對實驗性糖尿病大鼠影響的研究

耿慧春，楊波，李彥冰

(1.黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院，黑龍江 哈爾濱 150040;2.黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

三黃瀉心湯源自漢·張仲景的《金匱要略》，由大黃、黃芩、黃連3味藥組成，主治熱盛迫血妄行、吐血衄血或三焦實熱等癥。臨床不僅用于熱毒所致的各種疾病，也已被廣泛用于治療內、外、婦、皮膚、五官科等疾病。目前，糖尿病的主要治療手段是注射胰島素和口服降血糖藥物，根據糖尿病的病因病機及中醫藥治療的特點，從已上市的中藥中篩選具有降血糖作用的藥物及有效成分的研究工作已經成為降糖藥物研究的新的方向［1］。多項實驗或臨床研證明，大黃、黃連、黃芩及其方劑均有抗氧化和降低Ⅰ型、Ⅱ型、DM模型和正常動物的血糖的作用，三者組方后也顯示出雙重降糖作用。本實驗通過高糖高脂飲食和鏈脲佐菌素誘導大鼠胰島素抵抗模型，觀察三黃瀉心湯對血糖、血脂及胰島素水平的影響，評價其對糖尿病的改善作用。

1 實驗材料與方法

1.1 實驗動物 Wistar大鼠，雄性，(180～220)g，長春高新動物實驗研究中心提供，許可證號:SCXK－(吉)2003－0004。20～25℃適應性喂養1w，實驗前12h禁食不禁水。

1.2 藥品和試劑 大黃、黃連、黃芩均購自北京同仁堂哈爾濱藥店有限責任公司，經鑒定符合2005版藥典規定。按處方比例稱取藥材，按藥量的12倍加入蒸餾水，浸泡30min，加熱至沸騰，并保持微沸40min，過濾，藥渣再加入10倍蒸餾水煎煮20min，過濾，兩次濾液合并后濃縮(1g·mL－1)，置于冰箱4℃保存備用。鏈脲佐菌素(STZ)(Sigma公司產品);鹽酸二甲雙胍(天津太平洋制藥有限公司);葡萄糖、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)試劑盒(長春匯力生物技術生物有限公司);胰島素放射免疫試劑盒(北京科美東雅生物技術有限公司)。

1.3 儀器和設備 強生穩豪微量血糖測定儀(美國);BS－124S電子天平(德國);全自動生化分析儀(日立7600－020，日本);醫用離心機(北京醫用離心機廠)。

1.4 實驗方法

1.4.1 三黃瀉心湯對STZ致實驗性糖尿病大鼠的作用

1.4.1.1 糖尿病大鼠模型的制備 將STZ溶于pH4.5的0.1mol·L－1檸檬酸鈉緩沖液，配制成1%STZ溶液，0.2μm微孔濾菌器過濾除菌，備用;雄性大鼠，飼喂高糖高脂飼料(10.10%豬油，20.10%蔗糖，2.15%膽固醇，1.10%膽酸鹽，66.15%常規飼料)［2］4w后，腹腔一次性注射STZ溶液25mg·kg－1，繼續飼喂2w后，禁食不禁水12h，眼底靜脈叢采血。采用葡萄糖氧化酶法測定空腹血糖值，以空腹血糖>16.7mmol·L－1作為糖尿病大鼠。

1.4.2.2 分組及實驗方法 取成模大鼠50只，隨機分為五組，每組10只，分為模型組、三黃瀉心湯高、中、低劑量組、陽性藥物對照組，另取10只作為空白對照組。各組大鼠每天灌胃1次，三黃瀉心湯低、中、高組灌胃劑量分別為5、10、20g·kg－1，模型組和空白組給予同等體積的蒸餾水，陽性對照藥物為二甲雙胍，灌胃劑量為160mg·kg－1。連續4w給藥，第28d前大鼠禁食不禁水12h，眼底靜脈叢采血，分離血清測定大鼠空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、胰島素水平。TG采用酶法，TC采用終點法測定，血清胰島素水平測定采用放免法。

1.5 統計學處理 采用SPSS 10.0統計軟件進行統計分析，實驗數據均以(±s)表示，組間比較用t檢驗。

2 結果

2.1 三黃瀉心湯對糖尿病大鼠血糖的影響 三黃瀉心湯灌胃給藥4w后，與模型組比較，高劑量組和陽性組血糖明顯低于模型組(P<0.01)，中劑量組低于模型組(P<0.05)，高劑量組和陽性組血糖低于低劑量組，但高劑量組和陽性組之間無顯著差異，模型組和低劑量組血糖均明顯高于高劑量組(P<0.05)，提示三黃瀉心湯能降低STZ致糖尿病小鼠的血糖。見表1。

表1 三黃瀉心湯對糖尿病大鼠血糖的影響(±s，mmol·L－1)

表1 三黃瀉心湯對糖尿病大鼠血糖的影響(±s，mmol·L－1)

注:與模型組相比，**P<0.01，*P<0.05。

組別 n 劑量 血糖濃度空白對照組10 － 5.92±0.31模型組 10 － 24.55±2.17陽性對照組 10 160mg·kg－1 12.35 ±2.62**高劑量組 10 20g·kg－1 13.83 ±1.94**中劑量組 10 10g·kg－1 15.34 ±3.23*低劑量組 10 5g·kg－119.11±2.98

2.2 三黃瀉心湯對糖尿病大鼠血脂的影響 三黃瀉心湯灌胃給藥4w后，與正常對照組相比，模型組TC含量顯著升高(P<0.05)，TG含量極顯著升高(P<0.01)。與模型組相比，三黃瀉心湯中、低劑量組TC、TG含量下降，但差異均不顯著;三黃瀉心湯高劑量組的TC和TG含量均顯著下降(P<0.05)。見表2。

表2 三黃瀉心湯對糖尿病大鼠血脂的影響(±s，mmol·L－1)

表2 三黃瀉心湯對糖尿病大鼠血脂的影響(±s，mmol·L－1)

注:與模型組相比，*P<0.05。

組別 n 劑量TC TG空白對照組10 － 4.8±1.6 1.5±0.6模型組 10 － 6.5±0.2 3.3±0.2陽性對照組 10 160mg·kg－1 3.9±0.5* 2.1±0.5*高劑量組 10 20g·kg－1 4.1±1.6* 1.9±0.7*中劑量組 10 10g·kg－1 4.6±0.3 2.8±0.3低劑量組 10 5g·kg－14.9±0.4 3.4±0.5

2.3 三黃瀉心湯對糖尿病大鼠血清胰島素水平的影響 三黃瀉心湯灌胃給藥4w后，與模型組比較，高、中、低劑量組血清胰島素明顯降低，高劑量組達極顯著水平(P<0.01)，中劑量組達顯著水平(P<0.05)，但高劑量組和陽性組之間無顯著差異，提示三黃瀉心湯能降低STZ致糖尿病小鼠的胰島素水平。見表3。

表3 三黃瀉心湯對糖尿病大鼠血清胰島素的影響(±s，mIU·L－1)

表3 三黃瀉心湯對糖尿病大鼠血清胰島素的影響(±s，mIU·L－1)

注:與模型組相比，**P<0.01，*P<0.05。

組別 n 劑量 血清胰島素空白對照組10 － 26.8±2.04模型組 10 － 37.1±3.01陽性對照組 10 160mg·kg－1 22.88 ±1.53**高劑量組 10 20g·kg－1 25.8 ±4.43**中劑量組 10 10g·kg－1 32.3 ±3.54*低劑量組 10 5g·kg－134.5±1.98

3 討論

2 型糖尿病人常表現為胰島素抵抗(Insulinre sistance，IR)、肥胖和糖耐量異常。胰島素抵抗是2型糖尿病重要的發病機制之一，而過度肥胖，尤其是內臟性肥胖是胰島素抵抗和2型糖尿病發展的一個重要的危險因素［2］。先給大鼠喂飼1個月的高糖高脂飼料(10.10%豬油，20.10%蔗糖，2.15%膽固醇，1.10%膽酸鹽，66.15%常規飼料)，誘導出IR，然后腹腔注射低劑量(25mg·kg－1)STZ，導致胰腺代償性分泌胰島素的功能障礙，誘發高血糖癥，通過對其胰島素敏感性檢測和腎臟病理學觀察，表明其與2型糖尿病表現相符［3］。因此本研究選擇高糖高脂飼料與鏈脲佐菌素聯合應用造模并獲得成功。

本實驗結果顯示，與模型對照組相比，中、高劑量組大鼠血糖明顯降低，證實三黃瀉心湯具有明顯的降血糖作用，而其中20g·kg－1組效果最為顯著，5g·kg－1組與10g·kg－1組相比降血糖作用不及20g·kg－1組，說明三黃瀉心湯的降糖作用呈劑量依賴性。三黃瀉心湯使大鼠血糖明顯降低的同時，對血脂水平紊亂有一定的改善作用，說明三黃瀉心湯對高脂飲食和鏈脲佐菌素引起的胰島β細胞破壞有一定的抑制作用，對因血脂升高所造成的糖尿病的各種并發癥可能具有一定的治療作用。

［1］ 黃芳華.抗糖尿病中藥新藥臨床前有效性評價與思考［J］.中國中藥雜志，2008，33(1):95.

［2］ 楊維霞，梁宗鎖，王四旺，等.染料木素對Ⅱ型糖尿病大鼠模型血糖和血脂的影響［J］.西北農林科技大學學報(自然科學版)2009，37(9):5.

［3］ 郭嘯華，劉志紅，李恒，等.高糖高脂飲食誘導的Ⅱ型糖尿病大鼠模型及其腎病特點［J］.中國糖尿病雜志，2002，10(5):290－294.