熟地黃多糖對環磷酰胺誘導小鼠的抗突變作用研究

梁穎，徐紹娜，徐放，李明珠，黃寅炎，吳勃巖

(黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

地黃為玄參科植物地黃(Radix Rehmanniae PreParata)的新鮮或干燥塊莖。熟地黃是生地的炮制品，是中醫常用的補肝腎、益精血之品，具有補血滋陰、益精填髓的功效，是優良的滋陰補血藥，被譽為“壯水之主，補血之君”，廣泛用于陰虛、血虛所致的各種疾病。多糖是地黃中有效成分之一，有資料表明，熟地黃多糖具有抗氧化，抗衰老［1］，增強機體免疫功能等作用［2，3］。但關于熟地黃多糖在抗突變方面的文獻的報道還很少。本實驗通過三種常用的抗突變試驗，研究熟地黃多糖的抗突變作用，為其進一步研究提供依據。

1 材料方法

1.1 實驗動物 昆明種小鼠，由黑龍江中醫藥大學藥物安全性評價中心提供。

1.2 藥品與試劑 熟地黃(購于同仁堂);熟地黃多糖(由本實驗室提取并鑒定);環磷酰胺(上海華聯制藥有限公司);秋水仙素(上海國藥集團化學試劑有限公司);5－BrdU(南京探求生物技術有限公司)。

1.3 實驗方法

1.3.1 實驗劑量 經抑瘤試驗證明，熟地黃多糖給藥量為500mg·kg－1時為最佳劑量，效果最為顯著。以下試驗均采用此劑量。

1.3.2 小鼠骨髓嗜多染紅細胞(PCE)微核試驗 選取20～22g的昆明種小鼠30只，雌雄各半，隨機分成3組，每組10只。陰性對照組，灌胃給生理鹽水，10d。熟地多糖組，按表1的劑量灌胃給藥10d。陽性對照組，第1～8d口服生理鹽水，第9、10d腹腔注射環磷酰胺(40mg·kg－1)。第10d給環磷酰胺6h后，處死小鼠。取股骨骨髓細胞，常規制片，Giemsa染色，油鏡下觀察。每只小鼠統計1000個嗜多染紅細胞，并記錄出微核細胞數。采用SPSS 10.0統計軟件進行t檢驗，計算抑制率:

抑制率=［(陽性組出現數－實驗組出現數)/陽性組出現數］×100

1.3.3 小鼠骨髓細胞染色體畸變試驗 選取20～22g的昆明種小鼠30只，雌雄各半，分組及給藥情況同微核試驗。第10d陽性對照組注射完環磷酰胺后2h，將所有小鼠全部腹腔注射秋水仙素(4mg·kg－1)，4h后處死小鼠。取小鼠股骨骨髓細胞，37℃ KCl溶液中低滲處理30min。甲醇冰醋酸固定2次，制片，Giemsa染色，油鏡下觀察。每只動物計數100個細胞分裂相，并記錄出染色體畸變的細胞數，采用SPSS 10.0統計軟件進行t檢驗，計算抑制率。

1.3.4 小鼠骨髓細胞姐妹染色單體交換試驗 選取20～22g昆明種小鼠30只，雌雄各半，分組及給藥情況同微核試驗。所有小鼠在處死前24h，分12次腹腔注射5－BrdU，1mg·g－1。處死前4h腹腔注射秋水仙素。處死后取股骨骨髓細胞，低滲處理和固定過程同染色體畸變實驗。制片后將裝片于37℃恒溫箱內放置3d，將分化好的裝片置于30W的紫外燈下照射30min，自然晾干，Giemsa染色，油鏡下觀察。每只動物計數30個細胞分裂相，并記錄出現交換的染色體數。采用SPSS 10.0統計軟件進行t檢驗分析，計算抑制率。

2 結果

2.1 熟地黃多糖對環磷酰胺誘導微核的影響

熟地黃多糖對環磷酰胺誘導小鼠骨髓細胞PCE微核率具有抑制作用。與陽性對照組比較，差異顯著(P<0.01)，抑制率為37.87%。與陰性對照組比較，差異顯著(P<0.01)，有統計學意義，結果見表1。該實驗結果表明，熟地黃多糖對環磷酰胺誘導的小鼠微核率有顯著的抑制作用。

2.2 熟地黃多糖對環磷酰胺誘導的小鼠骨髓細胞染色體畸變的影響

熟地黃多糖組與陽性對照組比較差異顯著(P<0.01)，抑制率為21.46%，與陰性對照組比較差異顯著(P<0.01)，有統計學意義。表明熟地黃多糖對環磷酰胺誘導的染色體畸變有良好的抑制作用。結果見表2。

2.3 熟地黃多糖對環磷酰胺誘導骨髓細胞姐妹染色單體交換率的影響

熟地黃多糖組與陽性對照組比較存在差異(P<0.05)，抑制率為25.61%，與陰性對照組比較差異顯著(P<0.01)，有統計學意義，結果見表3。表明熟地黃多糖對環磷酰胺誘導的骨髓細胞姐妹染色單體交換率有一定的抑制作用。

表1 熟地黃多糖對CP誘導小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核的影響(±s)

表1 熟地黃多糖對CP誘導小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核的影響(±s)

注:與陽性對照組比較，**P<0.01;與陰性對照組比較，##P<0.01。

組別 熟地黃多糖(mg·kg－1) CP(mg·kg－1) 動物數(只) PCE(個) 微核率(‰) 抑制率(%)陰性對照組10 1000 2.20±0.25 －陽性對照組 － 40 10 1000 63.9±5.74 －熟地黃多糖組 500 40 10 1000 39.7±6.74**##－－37.87

表2 熟地黃多糖對CP誘導小鼠骨髓細胞染色體畸變的影響(±s)

表2 熟地黃多糖對CP誘導小鼠骨髓細胞染色體畸變的影響(±s)

注:與陽性對照組比較，**P<0.01;與陰性對照組比較，##P<0.01。

組別 熟地黃多糖(mg·kg－1) CP(mg·kg－1) 動物只數(只) 骨髓細胞(個) 染色體畸變率(%) 抑制率(%)陰性對照組10 100 12.00±1.92 －陽性對照組 － 40 10 100 54.33±4.32 －熟地黃多糖組 500 40 10 100 42.67±3.93**##－－21.46

表3 熟地黃多糖對CP誘導小鼠骨髓細胞姐妹染色單體交換的影響(±s)

表3 熟地黃多糖對CP誘導小鼠骨髓細胞姐妹染色單體交換的影響(±s)

注:與陽性對照組比較，*P<0.05;與陰性對照組比較，##P<0.01。

組別 熟地黃多糖(mg·kg－1) CP(mg·kg－1) 動物只數(只) 細胞數(個) 姐妹染色單體交換率(%) 抑制率(%)陰性對照組10 30 3.50±1.87 －陽性對照組 － 40 10 30 10.25±1.67 －熟地黃多糖組 500 40 10 30 7.62±1.68*##－－25.61

3 討論

熟地黃是中醫臨床常用藥，為補陰補血佳品。在熟地黃中，多糖的含量為3.33%［4］。除多糖外，還有梓醇、苷類、5－羥甲基糠醛等成分。有資料表明，熟地黃多糖具有抗氧化、抗衰老的作用，能夠增強機體的免疫力，低分子量的地黃多糖還具有抑瘤作用［5］。

本試驗證明，熟地黃多糖對環磷酰胺誘導的微核率有良好的抑制作用，可以有效地避免微核的發生，減少染色體的損傷。同時熟地黃多糖還對環磷酰胺誘導的骨髓細胞染色體畸變率和姐妹染色單體交換率有明顯的抑制作用。因此，我們可以推測熟地黃多糖可以通過抵抗誘變劑對染色體造成的損傷，來達到對機體遺傳物質的保護作用，避免突變的發生，最終起到抗腫瘤作用。同時也表明，熟地黃多糖對遺傳物質無損害作用。熟地黃多糖抗突變的作用機制還有待于進一步深入研究。

［1］ 陳丁丁，戴培德，張濤.地黃煎劑消退L－甲狀腺素誘發的大鼠心肌肥厚并抑制其升高的心、腦線粒體 Ca2+、Mg2+ATP酶活力［J］.中藥藥理與臨床，1997，13(4):27 －29.

［2］ 苗明三.懷地黃多糖對衰老模型小鼠免疫器官的影響［J］.河南中醫，1999，19(3):30.

［3］ 苗明三，方曉艷.懷地黃多糖免疫興奮作用的實驗研究［J］.中國中醫藥科技，2002，9(3):159 －160.

［4］ 紀耀華，孫瑩.地黃炮制前后總多糖含量的比較［J］.中醫藥信息，1999，16(4):16 －17.

［5］ 魏小龍，茹祥斌.低分子量地黃多糖對P53基因表達的影響［J］.中國藥理學學報，1997，18(5):471 －474.