樹舌多糖GF對荷瘤小鼠H22細胞端粒酶活性的影響

于英君，史海蛟，于水蘭

(黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

樹舌(Ganoderm，applan，tum(Per.ex Gray)Pat)，屬于膽子菌綱、多孔菌目、靈芝屬。樹舌多糖GF就是從中分離的一個多糖組分，它對小鼠HepA瘤有明顯抑制作用［1］。端粒酶為RNA的核糖核蛋白，有逆轉錄酶活性，可合成端粒重復序列以維持端粒長度從而使細胞獲得異常增殖能力。端粒酶與細胞調控及惡性腫瘤形成密切相關，而端粒酶的調控及其與細胞凋亡的關系已成為人類腫瘤研究的新熱點［2］。本文通過體內實驗用小鼠端粒酶ELISA試劑盒檢測樹舌多糖GF對小鼠肝癌H22細胞端粒酶的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 昆明種小白鼠36只，體重(20±2)g，由黑龍江中醫藥大學實驗動物中心提供。

1.1.2 瘤株 由黑龍江腫瘤研究所引進，腹水傳代。

1.1.3 主要藥物及試劑 樹舌多糖GF注射液(黑龍江中醫藥大學生物化學教研室制備);注射用環磷酰胺(江蘇恒瑞醫藥股份有限公司，批號:08060321);小鼠端粒酶ELISA試劑盒(美國CHEM ICON公司生產，上海郎卡生物有限公司進口分裝)。

1.2 實驗方法

1.2.1 建立荷瘤鼠模型及分組 取荷瘤H22腹水調整瘤細胞數至2.0×106個·mL－1。0.2%臺盼藍染色，計活細胞數大于95%。在小鼠右腋皮下注射0.2mL稀釋液，制成實體瘤模型。接種6h后，把小鼠隨機分為三組，每組12只，分別為陰性對照組、環磷酰胺組和樹舌多糖組，各組肌肉注射給藥每只0.1mL。樹舌多糖組按50mg·(kg·d)－1給藥，環磷酰胺組30mg·(kg·d)－1，陰性對照組小鼠給予生理鹽水，連續10d。

1.2.2 樹舌多糖GF抑瘤率的作用 荷瘤鼠于停藥次日取材，計算抑瘤率。抑瘤率(%)=(對照組平均瘤重－給藥組平均瘤重)/對照組平均瘤重×100%。

1.2.3 端粒酶提取及測定 取每個新鮮的瘤組織共36個樣本各100mg，加入500μL生理鹽水，組織勻漿，5000r·min－1離心1min，取上清液。然后按照試劑盒說明書進行。

1.2.4 統計學處理 采用SPSS 15.0統計軟件包進行分析，計量資料以(±s)表示，組間比較采用t檢驗。

2 結果

2.1 樹舌多糖GF對肝癌H22小鼠抑瘤率的影響

結果見表1。

表1 樹舌多糖GF對肝癌H22小鼠抑瘤率的影響

從表1中可以看出，樹舌多糖GF組與陰性對照組比較，瘤重明顯降低，抑瘤率達到42.25%。表明樹舌多糖GF對肝癌H22小鼠的腫瘤有顯著的抑制作用，差異有顯著性(P<0.05)。

2.2 樹舌多糖GF對肝癌H22小鼠端粒酶活性的影響結果見表2。

表2 樹舌多糖GF對肝癌H22小鼠端粒酶活性的影響(±s)

表2 樹舌多糖GF對肝癌H22小鼠端粒酶活性的影響(±s)

注:樹舌多糖GF組、環磷酰胺組與陰性對照組比較，P<0.05;樹舌多糖GF組與環磷酰胺組比較，P>0.05。

組別 n A450nm P陰性對照組12 0.13±0.04 0.05 12 0.22±0.07樹舌多糖GF組 12 0.16±0.06 0.05環磷酰胺組

從表2中可以看出，樹舌多糖GF和環磷酰胺均能降低端粒酶活性，且二者在降低端粒酶活性作用方面無顯著差異。

3 討論

端粒、端粒酶在人類腫瘤發生發展中起復雜作用。端粒的縮短限制細胞增殖并抑制癌變，但過分縮短又導致基因不穩定，從而增加癌變幾率。因此，端粒及端粒酶在腫瘤的抑制和發展中均起重要作用。研究發現，人惡性腫瘤細胞中染色體的端粒和端粒酶的活性均不同于正常體細胞;在許多正常體細胞中檢測不到端粒酶活性，而幾乎所有的人類惡性腫瘤細胞中的端粒酶均呈現活性［3，4］。且端粒酶陽性率隨腫瘤的發展過程而增高，在惡性腫瘤中端粒酶活性較高。因此，端粒酶可做為腫瘤的特異治療靶點。本研究中，樹舌多糖GF對該腫瘤生長的抑制作用機制之一是通過降低荷瘤小鼠H22細胞端粒酶活性實現的。深入機制尚需進一步研究。

［1］ 孫巧紅，劉正紅，劉麗波，等.樹舌多糖對HepA小鼠的抑瘤作用及血清LSA含量的影響［J］.中國中醫藥科技，1996，6(3):24.

［2］ 程鵬，彭志剛，楊杰，等.芒果甙對白血病K562細胞端粒酶活性和凋亡的影響［J］.中藥材，2007，30(3):6 －10.

［3］ Meyerson M，Counter CM，Eaton EN，et al.hEST2，the putative human telomerease catalytic subunit gene，Isupregulated in tumor cells and during immortalization［J］.Cell，1997(90):785.

［4］ Saleh S，Lam AK，Ho YH.Real－ time PCR quantification of human telomerase reverse transcriptase(hTERT)in colorectal cancer［J］.Pathology，2008，40(1):25－30.