MTA2在非小細胞肺癌中的表達及意義

王術華 齊艷麗 張俊毅 張清富 李海英 邱雪杉

轉移相關基因2（metastasis-associated gene 2, MTA2）是腫瘤轉移相關基因（MTAs）家族成員之一[1]，其編碼的蛋白MTA2（metastasis-associated protein 2）是具有核小體重塑活性的組蛋白去乙?；福╪uclesome remodeling deac-etylase, NuRD）的亞基，其參與組成的復合物具有相對保守的基因轉錄抑制功能，與生物個體發育有關。MTA2蛋白在多種上皮源性腫瘤細胞系中表達上調，如卵巢癌[2]、乳腺癌[3]、肝癌等[4]，并與腫瘤侵襲轉移有關，但其在非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）中的表達情況尚未見報道。本實驗用免疫組織化學方法觀察MTA2在NSCLC組織中的表達情況，分析MTA2的表達與肺癌臨床病理特征的關系，為NSCLC中MTA2的研究積累更多的資料。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 110例NSCLC組織來源于2006年1月-2007年12月中國醫科大學附屬第一臨床醫院手術切除的標本，全部病例均有完整的臨床病理資料。其中男性57例，女性53例；年齡36歲-78歲，中位年齡57歲；根據國際抗癌聯盟（2002）TNM分期標準分為I/II期65例，III/IV期45例；鱗癌48例，腺癌62例；高中分化46例，低分化64例。34例癌旁肺組織取自手術斷端，距癌灶邊緣＞5 cm。所有患者術前均未接受過任何放化療。

1.2 研究方法 采用免疫組織化學（SP）法。羊抗人MTA2多克隆抗體（SC-9446）購自美國Santa Cruz公司；二抗試劑盒（ZB-2306）、DAB顯色試劑盒（ZLI-9032）購自北京中杉金橋生物技術有限公司；SP超敏試劑盒（KIT-9709）購自福州邁新生物技術開發公司。

1.3 結果判定 所有切片均由兩位有經驗的病理研究者在不知道臨床參數的情況下獨立閱片并計數細胞，結果不統一時，采用兩位研究者的綜合分析意見。MTA2表達主要定位于癌細胞核中，部分胞質略有表達，呈棕黃色顆粒狀。每張切片在200倍顯微鏡下隨機選取10個不同視野，每個視野計數100個細胞。切片內陽性細胞數＞10%為MTA2陽性表達。

1.4 統計學分析 應用SPSS 17.0統計分析軟件，對MTA2表達和臨床病理特征的關系用Pearson相關分析，P＜0.05為有統計學差異。

2 結果

2.1 MTA2的表達情況 MTA2陽性信號主要表達于癌細胞核，陽性表達率為58.18%（64/110）。MTA2在癌旁細支氣管上皮和肺泡上皮中無表達，MTA2在高分化鱗癌和腺癌中低表達，在低分化鱗癌和腺癌中高表達（圖1）。

2.2 MTA2的表達與NSCLC患者臨床病理特征的關系110例NSCLC組織中有64例MTA2陽性表達，其表達與NSCLC患者臨床病理特征之間的關系見表1。經Pearson相關分析，結果顯示：MTA2的表達與NSCLC的分化程度呈負相關（r=-0.440, P＜0.001），與臨床分期（r=0.256,P=0.007）和淋巴結轉移（r=0.299, P=0.001）呈正相關，而與患者的年齡、性別、組織學分型無相關性。

圖 1 MTA2在NSCLC及其癌旁肺組織中的表達（SP法，×400）。A：高分化鱗癌；B：低分化鱗癌；C：高分化腺癌；D：低分化腺癌；E：癌旁細支氣管上皮；F：癌旁肺泡上皮。NSCLC：非小細胞肺癌。Fig 1 The expression of MTA2 in NSCLC and peficancerous lung tissues (SP, ×400). A: higher-differentiated squamous cell carcinoma; B: lowerdifferentiated squamous cell carcinoma; C: higher-differentiated adenocarcinoma; D: lower-differentiated adenocarcinoma; E: cancer collateral branch trachea epithelial; F: cancer collateral alveolar epithelial. NSCLC: non-small cell lung cancer.

表 1 MTA2表達與NSCLC患者臨床病理因素之間的關系Tab 1 Relationship between expression of MTA2 and clinico-pathological factors in NSCLC

3 討論

MTA2是Zhang等[1]于1999年發現的腫瘤轉移相關基因，定位于染色體11q1213.1，其編碼的蛋白質MTA2含668個氨基酸，分子量為70 kDa。與MTA1蛋白有65%的同源性，N端高度相似，但C端的不同之處在于MTA2蛋白缺少myb區和SH3結合區[5]。MTA1組成的復合體包含HDAC1/2、RbAp46/48和MBD3等組件，而MTA2組成的復合體則包括Sin3和Mi2組件，此外，MTA2組成的復合體與HDAC1復合體較相似，提示MTA2可能具有內部處理作用[6,7]。MTA2蛋白也是核小體重塑活性的NuRD的亞基[7]。目前認為MTA2可通過調節雌激素通路[8-10]、細胞骨架[11]和細胞凋亡[12]等途徑促進腫瘤的侵襲和轉移。

已有研究[2,3,10]證實，MTA2在惡性腫瘤和其來源的正常組織中的表達存在差異，在同種腫瘤中有淋巴結轉移的和無淋巴結轉移的表達存在差異。Ji等[2]利用免疫組織化學技術檢測了不同分組的卵巢癌標本中MTA2的表達，結果發現臨床分期III/IV期的組織表達水平高于I/II期；有淋巴結轉移組表達水平高于無淋巴結轉移組；低分化組表達水平高于高分化組。RT-PCR和Western blot技術檢測也有相同趨勢，證明MTA2的表達水平與臨床分期、淋巴結轉移及病理學分級相關。Cui等[3]發現MTA2還可促進雌激素受體依賴的乳腺癌細胞的生長。最新研究[13]表明MTA2與EGFR、IRAK-1、IkappaBalpha、NF-kappaB等因子之間存在交叉對話，其作為轉錄因子，可參與調控胰腺癌細胞的轉移。此外，Luo等[12]采用p53和MTA2共轉染技術揭示：MTA2以劑量依賴性方式抑制了p53介導的p21基因轉錄激活作用，MTA2影響了p53誘導的細胞生長停止和凋亡的發生。用組蛋白去乙?；笍秃衔铮╤istone deacetylases, HDAC）抑制劑毛癬素A（trichostatin A, TSA）處理可逆轉MTA2引起的細胞凋亡的下降，證明MTA2與細胞凋亡密切相關。

Fujitat等[14]在研究乳腺癌過程中發現了MTA1、雌激素受體（estrogen receptor, ER）、MTA3、Snail、E-鈣粘素通路，在轉移性乳腺癌中高表達的MTA1蛋白和HDAC一起，通過與存在于MTA3啟動子近端的雌激素反應元件半位點相作用，影響了ER對MTA3的轉錄激活，下調的MTA3又使得其對Snail的轉錄抑制作用下降，增多的Snail蛋白最終引起E-鈣粘素的表達減少，癌細胞間的粘連減弱易于脫落形成轉移。我們對110例NSCLC中MTA2的表達情況及其與NSCLC臨床病理特征的關系進行研究，發現MTA2在部分NSCLC中呈陽性表達，表達率為58.18%（64/110）。統計學分析證實MTA2的表達與患者的年齡、性別、NSCLC的組織分型無明顯關系，而與肺癌淋巴結轉移（r=0.299, P=0.001）、臨床分期（r=0.256,P=0.007）正相關，與分化程度負相關（r=-0.440,P＜0.001）。實驗結果與我們課題組前期實驗所證實的MTA1在NSCLC中的表達相類似。因此，推測MTA2可能通過與MTA1相同的作用途徑促進腫瘤的轉移。

綜上所述，MTA2與NSCLC侵襲轉移的生物學特性密切相關。進一步深入研究MTA2的作用底物，阻斷其作用途徑以及發展MTA2的特異性抑制劑來控制腫瘤的發展，將有可能成為臨床治療NSCLC的新靶點。