一枝黃花的提取工藝優(yōu)選及質(zhì)量控制

馮 華，鄒孔強(qiáng)，王小東，張 強(qiáng)

（貴州省遵義市藥品檢驗(yàn)所，貴州 遵義 563000）

一枝黃花的提取工藝優(yōu)選及質(zhì)量控制

馮 華，鄒孔強(qiáng)，王小東，張 強(qiáng)

（貴州省遵義市藥品檢驗(yàn)所，貴州 遵義 563000）

目的 篩選一枝黃花中有效成分蘆丁提取工藝的最優(yōu)條件及對(duì)蘆丁進(jìn)行含量測(cè)定。方法 采用正交試驗(yàn)法，以提取時(shí)間、提取次數(shù)、甲醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為考察因素，以蘆丁含量為指標(biāo)，對(duì)提取條件進(jìn)行優(yōu)選。采用高效液相色譜（HPLC）法對(duì)蘆丁含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果 最佳提取工藝為提取時(shí)間30 min，提取次數(shù)3次，甲醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)70%。含量測(cè)定以乙腈-甲醇-0.4%醋酸溶液(16∶8∶76)為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長為360 nm，線性范圍為0.687 6～1.604 4!g(r=0.999 5)，平均回收率為99.27%，RSD為0.69%(n=6)。結(jié)論 優(yōu)選的工藝可行，具有操作性。用HPLC法測(cè)定含量簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確。

提取工藝；正交試驗(yàn)；高效液相色譜法；含量測(cè)定

Abstract：ObjectiveTo optimize the extracting technology of the effective ingredient rutin from Solidago decurrens Lour and to establish its quality control.MethodsThe orthogonal test was used，with the extracting time，extracting times and methanol concentration as the factors，the content of rutin as the index for screening the extracting condition.Rutin content was determined by the HPLC methods.ResultsThe best optimized extracting procedure was：each time 30 min，extracting for 3 times and 70% methanol.The Diamonsil C18column was used with the mobile phase of CH3CN-methanol-0.4% acetic acid aqueous solution(16 ∶8 ∶76)，the detection wavelength was 360 nm，the flow rate was 1.0 mL/min.The good linear range of rutin was within 0.687 6-1.604 4!g，r=0.999 5.The average recovery rate was 99.27%and RSD was 0.69%(n=6).ConclusionThe optimized technology is feasible and easily operative.The HPLC determination method for the rutin content is simple，sensitive and accurate.

Key words：extacting technology；orthogonal design；HPLC；content determination

一枝黃花是菊科植物一枝黃花 Solidago virga-aure-aL.var.leiocarpa(Benth)A·Gray的干燥全草，為貴州省少數(shù)民族用藥[1]，具有疏風(fēng)散熱、解毒消腫、退黃疸的功效，常用于治療感冒、百日咳、黃疸型肝炎、扁桃體炎。本試驗(yàn)采用正交試驗(yàn)法，以有效成分蘆丁為參考指標(biāo)，對(duì)一枝黃花提取工藝進(jìn)行優(yōu)選及質(zhì)量控制進(jìn)行研究，為一枝黃花的開發(fā)利用及質(zhì)量控制提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters1525型高效液相色譜儀；KQ-300DE型超聲儀。蘆丁對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為0080-9705)；一枝黃花藥材（采集于遵義縣，經(jīng)鑒定為菊科植物一枝黃花的干燥全草）；甲醇和乙腈為色譜純，水為純凈水，其他均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取工藝優(yōu)選

2.1.1 因素水平確定

分別選擇提取時(shí)間（因素A）、提取次數(shù)（因素B）、甲醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)（因素C）3個(gè)考察因素，以蘆丁含量為考察指標(biāo)，每個(gè)因素分3個(gè)水平，因素水平表見表1。

表1 因素水平表

2.1.2 正交試驗(yàn)與結(jié)果

用L9(34)正交試驗(yàn)表進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果見表2。方差分析見表3，可見提取時(shí)間、提取次數(shù)、甲醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)提取的蘆丁含量無影響。直觀分析結(jié)果顯示，最佳提取工藝條件為A3B3C3，即提取時(shí)間為超聲30 min，提取次數(shù)3次，甲醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70%。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果表

表3 正交試驗(yàn)方差分析

工藝驗(yàn)證結(jié)果見表4，表明優(yōu)選的提取工藝對(duì)蘆丁提取效果較好、工藝穩(wěn)定。

2.2 蘆丁含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5!m)；流動(dòng)相：乙腈 -甲醇 -0.4% 醋酸溶液(16 ∶8 ∶76)；流速：1.0 mL/min；柱溫：25℃；檢測(cè)波長：360 nm；進(jìn)樣量：10!L。理論塔板數(shù)按蘆丁峰計(jì)應(yīng)不低于2 500。高效液相色譜圖見圖1。

2.2.2 溶液制備

精密稱取蘆丁對(duì)照品11.46 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。取一枝黃花藥材粉末（過三號(hào)篩）約2.0 g，精密稱定，每次加溶劑15 mL，按正交表進(jìn)行超聲試驗(yàn)，最后加相應(yīng)質(zhì)量濃度的溶劑定容到50 mL量瓶中，制得供試品溶液。

表4 一枝黃花正交試驗(yàn)的工藝驗(yàn)證結(jié)果

圖1 高效液相色譜圖

2.2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密吸取對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣6，8，10，12，14!L，測(cè)定峰面積，以蘆丁質(zhì)量濃度(!g)為橫坐標(biāo)、峰面積積分值(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為 Y=3.0×109X-125.3，r=0.999 5(n=5)。結(jié)果表明蘆丁進(jìn)樣量在0.687 6～1.604 4!g范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品溶液，依法測(cè)定。結(jié)果平均峰面積為1 762 972，RSD=1.3%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：同一供試品溶液，分別于0，4，8，16，24 h時(shí)測(cè)定。結(jié)果平均峰面積為1 759 985，RSD為1.2%(n=5)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取樣品粉末約2.0 g，精密稱定，依法制備供試品溶液并測(cè)定。結(jié)果平均峰面積為1 765 923，平均含量為0.171%，RSD=1.0%(n=5)，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量(0.169%)的樣品6份，每份約為1.0 g，精密稱定，精密加入蘆丁對(duì)照品溶液(1.76 mg/mL)1.0，1.2，1.4 mL，置50 mL量瓶中，加相應(yīng)溶劑至刻度，依法測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表5。

表5 蘆丁加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.2.4 含量測(cè)定

分別依法測(cè)定3批樣品結(jié)果平均含量為0.173%。

3 討論

一支黃花的有效成分蘆丁可用甲醇或乙醇提取。為選擇適合溶劑，以甲醇和乙醇為溶劑，以不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行超聲提取，結(jié)果以甲醇為溶劑的蘆丁提取率明顯高于以乙醇為溶劑，故本試驗(yàn)選擇甲醇為提取溶劑。

優(yōu)選的提取工藝可行、穩(wěn)定。HPLC法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確，可對(duì)一枝黃花的開發(fā)利用及質(zhì)量控制提供了一定的參考。

[1]DB52/YC001-2003，貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[S].

Study on Extracting Technology of Solidago Decurrens Lour and Its Quality Control

Feng Hua，Zou Kongqiang，Wang Xiaodong，Zhang Qiang
(Zunyi Institute for Drug Control，Zunyi，Guizhou，China 563000)

R284.2；R282.71

A

1006－4931(2010）08－0049－02

馮華，男，碩士研究生，主要從事藥品檢驗(yàn)及新藥研 究 ，（電 話 ）0852-8928059（ 電 子 信 箱 ）fenghua781014@yahoo.com.cn。

2009－03－03；

2009－06－28）