補骨脂正己烷提取物GC指紋圖譜的研究

劉軍凱，林貝

(北京化工大學北方學院，河北 廊坊 065201)

補骨脂正己烷提取物GC指紋圖譜的研究

劉軍凱，林貝

(北京化工大學北方學院，河北 廊坊 065201)

利用GC方法測定來自同一生產企業的10批不同批次補骨脂的提取物，獲得了較為理想的包含特征信息的補骨脂GC指紋圖譜，通過相似度分析，計算出各批樣品相似度均在0.98以上。本論文確定的指紋圖譜建立方法簡單、快速，有較好的重現性，樣品穩定性好，可為補骨脂藥材的質量控制提供有效手段。

補骨脂；GC；指紋圖譜

補骨脂為豆科植物補骨脂(Psoralea corylifoliaL.)的干燥成熟果實，性溫，味辛，具溫腎助陽、納氣、止瀉之功效[1]。補骨脂化學成分復雜，其中補骨脂素和異補骨脂素已作為指標成分用于補骨脂及其相關制品的質量控制，但是，以一個或幾個成分為指標的質量控制模式很難全面評價中藥及其制劑的質量、療效和穩定性。中藥指紋圖譜技術的誕生，為中藥質量控制開辟了新途徑。目前，對于補骨脂指紋圖譜的研究大多為HPLC指紋圖譜[2～3]。本文初步建立了補骨脂的氣相色譜指紋圖譜，為補骨脂藥材質量的評價提供了快速、簡便、可靠的分析方法。

1 實驗儀器和材料

1.1 儀器

GC9790 IIA-2 氣相色譜儀、氫離子化檢測器,R201D型旋轉蒸發儀四兩裝高速中藥粉碎機，80-2型離心沉淀機。

1.2 實驗試劑與藥材

實驗所使用的正己烷、二硫化碳皆為分析純，來源于北京化工廠。安國市長安中藥材有限公司所購10批補骨脂生品和鹽品實驗樣品見表1。

表1 實驗所購10批樣品藥材

2 實驗方法與結果

2.1 供試品溶液的制備

分別精密稱取過0.84mm篩的補骨脂0.5g，加入10mL正己烷(60～90℃)，超聲處理30min，3000r·min-1的轉速離心5min，旋轉蒸發揮干溶劑后用2mL二硫化碳溶解，作為樣品溶液備用。

2.2 色譜條件

色譜柱采用OV-101色譜柱；柱壓為44kPa，恒壓方式；進樣口溫度為250℃，檢測器溫度為250℃；柱溫采用程序升溫，起始溫度30℃，恒溫5min，1℃·min-1升溫至40℃，然后以7℃·min-1升溫至250℃，保溫15min；流速為5.0mL·min-1，不分流進樣，進樣體積為1μL。

2.3 方法學驗證

2.3.1 儀器精密度及重現性實驗

取同一批補骨脂供試品溶液連續進樣5次，考察色譜峰相對保留時間，以保留時間來計算相對標準偏差RSD，本實驗選擇5個色譜峰來計算，RSD分別為0.79%、0.80%、0.61%、0.39%、0.07%。保留時間RSD值均小于1%，說明儀器穩定可靠，方法重現性良好。

2.3.2 穩定性實驗

用同一批補骨脂供試品溶液，分別在0h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h時，在相同的色譜條件下進行分析。選取5個色譜峰，從保留時間來計算各色譜峰的RSD值， 分別為0.86%、0.85%、0.56%、0.51%、0.07%?？梢?，在24h內所得樣品6個色譜峰保留時間RSD值均小于1%。說明供試品溶液在24h內穩定可靠。

2.3.3 重復性實驗

取同一批補骨脂藥材，按供試品制備方法，制備樣品5份，每份樣品分別進樣，進行色譜分析。任意選取5個色譜峰，從保留時間來計算色譜峰的RSD值，分別為1.12%、1.09%、0.65%、0.62%、0.08%。數據顯示，5個樣品色譜峰保留時間 RSD值小于2%，說明供試品溶液制備方法穩定、可靠。

2.4 補骨脂氣相指紋圖譜的建立

在上述條件下測10批同一生產企業生產的不同批次補骨脂的供試品溶液，在相同的實驗條件下進行分析，所得補骨脂生品和鹽品典型的GC指紋圖譜見圖1、2。

圖1 補骨脂生品1號正己烷提取部位GC色譜圖

圖2 補骨脂鹽品1號正己烷提取部位GC色譜圖

2.5 補骨脂生品和鹽品GC指紋圖譜及相似度評價

對同一廠家的 10批次不同批號的補骨脂生品和鹽品的正己烷提取物，按照上述氣相色譜條件進行實驗，所得的指紋圖譜疊加圖和共有模式譜圖見圖3和圖4。

運用Excel軟件分別采用相關系數和夾角余弦為測度[4]，以共有模式作為對照指紋圖譜，計算所有樣品的相似度，結果見表2和表3。

圖3 10批補骨脂生品正己烷提取部位GC指紋圖譜疊加圖與共有圖譜

圖4 10批補骨脂鹽品正己烷提取部位GC指紋圖譜疊加圖與共有模式圖譜

表2 10批補骨脂生品正己烷提取部位GC指紋圖譜相似性評價結果

表3 10批補骨脂鹽品正己烷提取部位GC指紋圖譜相似性評價結果

3 結果與討論

(1) 本論文對補骨脂生品和鹽品的指紋圖譜進行了初步研究，建立了氣相色譜分析方法。該分析方法補骨脂生品重現性RSD＜1%、精密度RSD＜1%，補骨脂鹽品RSD＜2%、精密度RSD＜3%，樣品在24h內穩定，可用于補骨脂藥材指紋圖譜的測定。

(2) 本研究得出了10批補骨脂生品和鹽品正己烷提取部位GC指紋圖譜，并計算出相似度均在0.98以上，表明獲得的指紋圖譜具有指紋意義的特征組分，并能體現其整體性。該生產企業的補骨脂藥材來源的化學成分一致性很好，補骨脂生品和鹽品都有很高的相似度，可作為標準藥材入藥。

(3) 比較補骨脂生品和鹽品的指紋圖譜，發現譜圖中所含峰的相對保留時間基本一致，在其峰面積和峰高方面存在一定差異。在保留時間5min之前的各峰，生品的相應各峰在峰高和峰面積上明顯大于鹽品，但是在保留時間為42～47min之間的峰，又出現了相反的現象，即鹽品譜圖中的峰高和峰面積明顯大于生品譜圖的相應峰。如能進一步對指紋圖譜與藥效關聯進行研究，可對飲片廠正確加工炮制補骨脂提供依據。

[1] 中國中醫藥管理局.中國藥典一部[S].北京：人民衛生出版社,2005.157.

[2] 張海秋,丁家欣,張玲,等.補骨脂HPLC指紋圖譜研究[J].中國中醫基礎藥學雜志,2005, 11(12):923.

[3] 楊榮平,涂永勤,壽清耀,等.合川補骨脂藥材HPLC指紋圖譜研究[J].中藥材,2006,29(12): 1292.

[4] 苗愛東, 孫殿甲. Excel 2002在中藥指紋相似度計算中的應用[J].藥學進展,2003,27(1):51-54.

Study on GC Fingerprint of Fructus Psoraleae Extracts

LIU Jun-kai, LIN Bei
(North College of Beijing University of Chemical Technology, Langfang 065201, China)

Ten different batches of fructus psoraleae extracts from the same manufacturer were analyzed by GC.A preferable GC fingerprint of the fructus psoraleae was obtained, and through similarity analysis, the similarity of all batches of simples were above 0.98. The method established for GC fingerprint in the paper was simple, quick, and it was provided with good reproducibility and good stability.It could be used scientifically to evaluate and identify the quality of fructus psoraleae.

fructus psoraleae; GC; fingerprint

O 657.3

A

1671-9905(2010)09-0029-03

劉軍凱，男，助教，京東燕郊經濟技術開發區迎賓北路45號北京化工大學北方學院化工教研室,郵編：065201，xyzljk@163.com,15810190250

2010-06-09