酸性染料比色法測定硫酸奈替米星注射液的含量

吳福祥 侯志堅(jiān) 張夙萍

奈替米星為半合成的氨基糖苷類廣譜抗生素，對革蘭陰性桿菌有強(qiáng)大的抗菌活性，《中國藥典2005年版二部》采用微生物檢定法測定硫酸奈替米星注射液的效價(jià)［1］，該法操作繁瑣、費(fèi)時(shí)，檢驗(yàn)成本高，生物差異性大。筆者依據(jù)奈替米星具有有機(jī)生物堿的特性，在一定pH介質(zhì)中能與BCP反應(yīng)，生成的有色離子對能被有機(jī)溶媒定量提取的原理［2］，設(shè)計(jì)了酸性染料比色法［3］測定其含量的方法，結(jié)果滿意，國內(nèi)尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 UV-120-02型紫外-可見分光光度計(jì)(日本島津);U-3900H型紫外-可見分光光度計(jì)(日立高新技術(shù)公司日本東京);AUW-220D型電子天平(日本島津)。

1.2 試藥 奈替米星標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所，批號:0355-200001，660u/mg);效價(jià)檢定用培養(yǎng)基(中國藥品生物制品檢定所，Ⅰ號，pH7.8-8.0);0.1%BCP溶液(將配制成的0.1%BCP溶液［1］用四氯化碳反復(fù)萃取至四氯化碳層無色后，分取水層備用);硫酸奈替米星注射液(成都天臺山制藥有限公司:2 ml:10萬單位，080926(樣1)，090408(樣2);1 ml:5萬單位，090214(樣3)。青島金峰制藥有限公司:2 ml:10萬單位，090621(樣4)，090912(樣5));其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 離子對吸收光譜測定 精密稱取奈替米星標(biāo)準(zhǔn)品適量，配制成含奈替米星46.50 μg/ml的水溶液。精密量取該溶液1.0 ml，置100 ml分液漏斗中，加0.1%BCP溶液3.0 ml、磷酸鹽緩沖液(pH6.8)11.0 ml、四氯化碳15.0 ml，振搖1 min，靜置30 min，分取四氯化碳層。同法以水為空白對照，在300～500 nm的波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果奈替米星在428±2 nm的波長處有最大吸收。

2.2 線性關(guān)系考察 精密量取“2.1”項(xiàng)下的奈替米星標(biāo)準(zhǔn)品溶液 0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 、1.8、2.0 ml，各置 100 ml分液漏斗中，分別加入 0.1%BCP 溶液 1.8、2.4、3.0、3.6、4.8、5.4、6.0 ml，pH6.8 磷酸鹽緩沖液適量，使水相總體積為15.0 ml，再加入四氯化碳15.0 ml，按“2.1”項(xiàng)下方法操作，并于428 nm波長處分別測定吸光度，以濃度(X)為橫坐標(biāo)，吸光度(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=1.174×10-2X-0.255(r=0.9 997)。結(jié)果表明，奈替米星檢測濃度在27.9～93.0 μg/ml的范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.1”項(xiàng)下的溶液，密閉、避光保存，分別于 0.5、1、2、4、8、12、24 h 時(shí)測定吸光度，計(jì)算奈替米星的含量，RSD為0.95%(n=7)。

2.4 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取硫酸奈替米星注射液(樣品1)3份，按標(biāo)示量制成濃度為37.0、46.0、55.0 μg/ml的水溶液，分別取上述3種溶液各1.0 ml，按“2.1”項(xiàng)下方法于428 nm的波長處各測定3次，計(jì)算奈替米星的含量，RSD為1.13%(n=9)。

2.5 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的硫酸奈替米星注射液(樣品1)，按標(biāo)示量制成含奈替米星30.0 μg/ml的水溶液，取該溶液5份，分別置100 ml分液漏斗中。另分別精密量取46.50 μg/ml的奈替米星標(biāo)準(zhǔn)品水溶液適量，置上述分液漏斗中，按“2.2”項(xiàng)下方法測定，計(jì)算奈替米星的加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(μg，%)

2.6 樣品含量測定 取硫酸奈替米星注射液適量，按標(biāo)示量制成濃度為45.0 μg/ml的水溶液。取該溶液1.0 ml，共5份(編號:1、2、3、4、5)，分別按“2.1”項(xiàng)下方法于428 nm 的波長處測定吸光度，根據(jù)回歸方程計(jì)算樣品相當(dāng)于標(biāo)示量的百分含量，并與微生物檢定法比較，結(jié)果詳見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(x ± s，n=3)

3 討論

3.1 溴甲酚紫的用量影響吸光度的大小，試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)溴甲酚紫(0.1%):樣品(46.50 μg/ml)≥3:1時(shí)，吸光度基本保持不變，故溴甲酚紫用量為樣品量的3倍。

3.2 試驗(yàn)中曾選用了三氯甲烷、二氯乙烷、四氯化碳3種有機(jī)溶媒，結(jié)果以四氯化碳的提取效果最好。另據(jù)試驗(yàn)結(jié)果表明，用pH6.8的磷酸鹽緩沖液使水相總體積保持在15.0 ml時(shí)，反應(yīng)完全，靈敏度高。

3.3 本法快速、簡便，可用于藥品生產(chǎn)和監(jiān)督過程中的快速檢驗(yàn)。

［1］國家藥典委員會編．中華人民共和國藥典(二部)．2005年版．北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:741、附錄Ⅺ A、附錄XV D．

［2］劉文英．藥物分析．北京:人民衛(wèi)生出版社，2007:314．

［3］王福蘭，武珍，吳福祥．染料比色法測定硫酸卡那霉素滴眼液中主藥的含量．中國藥房，2006，17(8):622.