蒲公英多糖對(duì)四氯化碳肝損傷小鼠的保護(hù)作用

李春蘭 趙 亮

1)河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥劑科 鄭州 450000 2)河南許昌市中心醫(yī)院藥劑科 許昌 461000

蒲公英為菊科植物蒲公英(Mazz)或同屬數(shù)種植物的全草,性寒,味苦、甘,入肝胃二經(jīng),具有清熱解毒、消腫散結(jié)和利尿通淋的功效。對(duì)蒲公英的化學(xué)研究發(fā)現(xiàn),其主要含多糖類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)、甾醇類(lèi)、黃酮類(lèi)等成分[1-4],蒲公英具有廣泛的藥理活性,有抗病原微生物、提高免疫力、抗氧化和保肝利膽等功效[5-7]。本實(shí)驗(yàn)首次研究了蒲公英多糖對(duì)四氯化碳急性肝損傷小鼠的保護(hù)作用,為開(kāi)發(fā)利用蒲公英的豐富資源提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品與試劑:聯(lián)苯雙酯片:ALT(丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶)、AST(天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶)、SOD(超氧化物歧化酶)和MDA(丙二醛)檢測(cè)試劑盒均購(gòu)至南京建成生物工程研究所。考馬斯亮藍(lán),其他試劑均為分析純。

1.1.2 主要儀器:UV-2000型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì),TG16B臺(tái)式高速離心機(jī),各種規(guī)格移液器等。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:昆明種小白鼠,雌雄對(duì)半,體質(zhì)量(22±2)g,有河南省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 方法

1.2.1 蒲公英多糖對(duì)肝損傷小鼠的作用:小鼠(20±2)g隨機(jī)分為6組,每組12只,空白對(duì)照組、模型組每天灌胃(ig)生理鹽水;聯(lián)苯雙酯片陽(yáng)性對(duì)照組每天灌胃150 mg/kg小鼠體質(zhì)量的藥物,蒲公英多糖高、中、低劑量組分別灌胃600 mg/kg、300 mg/kg、150 mg/kg 小鼠體質(zhì)量的樣品,給藥 14 d,以末次給藥2 h后,除空白組外均按照0.1 mL/10g腹腔注射0.4%四氯化碳花生油溶液,禁食不禁水16 h后,摘眼球取血,4000 r/min離心5 min,分離出血清,檢測(cè)ALT和 AST,分離出肝臟稱(chēng)重,并用0～3℃生理鹽水做成肝臟組織勻漿液,測(cè)定M DA和SOD,用考馬斯亮藍(lán)除蛋白。

2 結(jié)果

2.1 蒲公英多糖對(duì)四氯化碳肝損傷小鼠血清中ALT、AST的影響 見(jiàn)表1。

2.2 蒲公英多多糖對(duì)四氯化碳肝損傷小鼠的抗氧化能力的影響 見(jiàn)表2。

表1 蒲公英多糖對(duì)CCl4致小鼠急性肝損傷血清中ALT和AST的影響 (±s)

表1 蒲公英多糖對(duì)CCl4致小鼠急性肝損傷血清中ALT和AST的影響 (±s)

注:與空白組比,△△△P＜0.001,與模型組比,***P＜0.001,**P＜0.01,*P＜0.05

組別 劑量(mg/kg)n ALT(U/L) AST(U/L)空白組 12 28.51±6.96 57.27±5.14模型組 9 2177.82±438.30△△△ 1682.89±726.76△△△陽(yáng)性對(duì)照組 150 10 425.81±149.33*** 449.07±237.46**高劑量組 600 10 564.79±182.99*** 440.10±281.09**中劑量組 300 10 867.91±347.28** 690.47±235.41*低劑量組 150 10 1206.48±456.53** 1004.86±338.12

表2 蒲公英多糖對(duì)四氯化碳肝損傷小鼠的抗氧化作用的影響

3 討論

肝損傷是多種嚴(yán)重肝臟疾病的發(fā)生、發(fā)展及最終走向肝功能衰竭的始動(dòng)環(huán)節(jié)和共同途徑。通過(guò)建立實(shí)驗(yàn)性肝損傷動(dòng)物模型,篩選保肝藥物,研究肝病的發(fā)生機(jī)制,探索保肝作用原理,具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。肝臟是含酶豐富的臟器,在肝內(nèi)ALT主要分布于細(xì)胞漿內(nèi),AST則分布于細(xì)胞漿和線粒體中。在肝臟出現(xiàn)臟器組織損傷或破壞、壞死時(shí),酶從細(xì)胞內(nèi)逸出進(jìn)入血液,故ALT、AST水平增高。因此,血清ALT、AST的升高是肝損傷的重要標(biāo)志。本實(shí)驗(yàn)中,模型組較空白組AST和ALT值明顯升高,說(shuō)明肝損傷模型已經(jīng)成功。

CCl4在細(xì)胞色素P450作用下,產(chǎn)生氯甲基自由基(?CCl3)等,而?CCl3等可使肝細(xì)胞膜或亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的膜脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化作用,引起膜通透性升高,致使胞漿內(nèi)ALT大量釋放入血,或?CCl3與肝微粒體脂質(zhì)和蛋白質(zhì)發(fā)生共價(jià)結(jié)合,損傷了肝細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)與功能的完整性[8]。蒲公英多糖各劑量組均能對(duì)抗四氯化碳肝損傷小鼠的AST和ALT的升高,說(shuō)明蒲公英多糖能對(duì)抗?CCl3引起的細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化,保護(hù)肝細(xì)胞和亞細(xì)胞不受損傷。

MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化的主要降解產(chǎn)物,可進(jìn)一步損傷肝細(xì)胞的結(jié)構(gòu),導(dǎo)致肝細(xì)胞壞死,其含量的大小可以間接反映自由基對(duì)組織的破壞程度。SOD能催化自由基進(jìn)行歧化反應(yīng),使自由基不能與膜脂質(zhì)和膜蛋白進(jìn)行二次反應(yīng),阻止其破壞肝細(xì)胞。MDA通常和SOD或者GSH-Px聯(lián)合使用,一起反映氧自由基對(duì)細(xì)胞的損傷程度。因此,肝組織中MDA、SOD的含量可間接反映肝細(xì)胞損傷的程度,而且血清中ALT、AST的升高,是肝細(xì)胞損傷的共同表現(xiàn)。本實(shí)驗(yàn)中,蒲公英多糖在劑量為600 mg/kg時(shí)顯著升高肝損傷小鼠的SOD活力值(P＜0.01),在劑量為 150 mg/kg時(shí),能顯著降低肝損傷小鼠的MDA含量(P＜0.05),說(shuō)明蒲公英多糖能提高肝損傷小鼠的抗氧化能力。

蒲公英多糖是蒲公英的主要活性成分,在蒲公英藥材中含量較高,是一種物美價(jià)廉的藥用材料。蒲公英的降血糖作用少有報(bào)道,但是并未見(jiàn)蒲公英多糖降血糖方面的報(bào)道。本文首次研究了蒲公英多糖的對(duì)四氯化碳肝損傷小鼠的保護(hù)作用,結(jié)果顯示蒲公英多糖對(duì)四氯化碳肝損傷小鼠具有保護(hù)作用;能顯著性抑制小鼠 AST和ALT的升高(P＜0.001,P＜0.01),并能提高肝損傷小鼠體內(nèi)SOD的活力,降低肝損傷小鼠MDA含量,說(shuō)明蒲公英多糖對(duì)四氯化碳肝損傷具有保護(hù)作用,抗氧化作用可能是其主要保肝機(jī)制,本文為研究蒲公英在肝損傷中的應(yīng)用提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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