植物試管苗移栽技術

邱金梅

（北京林業大學園林學院，北京 100083）

試管苗在恒溫、高濕、弱光、異氧等特殊環境下增殖與生長，其形態、解剖和生理特性與溫室和大田生長的植株不同，為了適應移栽后的較低濕度以及較高光照度并進行自養，必須要有一個逐步鍛煉和適應的過程。目前，國內關于試管苗的報道和研究比較多，但真正應用于大規模工廠化生產的還不多，試管苗移栽成活率低是主要原因之一。應從環境控制、培育壯苗、煉苗、移栽基質、溫濕管理和叢枝菌根應用等方面來提高試管苗的移栽成活率。

1 培育瓶生壯苗

不同植物組培苗，是經過不同程序、不同培養基、不同繼代次數及不同發生方式而來的。健壯苗要求根與莖的維管束相連通，不是從愈傷組織中間發生，而是從莖木質部上發生的。同時不僅要求植株根系粗壯，還要求有較多的不定根，以擴大根系的吸收面積，增強根系的吸收功能，提高移栽成活率。根不宜太長，以不在培養容器內繞彎為好，根尖的顏色應為細胞分裂旺盛的黃白色。在作生根培養時，切下的嫩莖長度以2～3 cm為宜。莖部粗壯、生命力強的生根幼苗移栽后成活率高，而對于叢生狀的、細弱的組培苗生根移栽后，由于莖部細弱，失水快，極易萎蔫，成活率大大降低。為了防止瓶苗徒長變高變細，可以在培養基中加入B9、矮壯素、多效唑等植物生長調節劑來提高瓶苗的品質，進而提高移栽的成活率。

2 移栽容器及基質的選擇

通常用穴盤移栽來進行組培苗的過渡，根據幼苗的大小選擇不同的穴盤，如128穴、72穴等。穴盤移栽的優點在于每株幼苗處于一個相對獨立的空間，如果發生病害，則不會快速蔓延到旁邊，引起其他植株的死亡。要使試管苗大量種植成活，移栽基質也是一個很重要的方面。一般而言，基質的選擇要有利于疏松透氣，同時有適宜的保水性，容易滅菌處理，不利于雜菌滋生等。常用的基質有粗粒狀的蛭石、珍珠巖、粗沙、爐灰渣、谷殼、腐殖土等，根據植物種類特性，將他們以一定的比例混合應用。陳宗禮等[1]研究了狗頭棗組培苗試管外生根，認為蛭石的透氣性、保水性都較好，既可以滿足基部的吸水要求，又不會因濕度過大導致腐爛而死苗，生根率達到70.5%，生根多且根系發育完整而健壯。牡丹根系不耐積水，因此對移栽基質的透氣性要求高。孔祥生等[2]試驗表明，在15～20℃條件下，用腐殖土（經高壓滅菌）作基質，其移栽成活率（48%）可比蛭石作基質提高33%，并且在腐殖土中，移栽苗的生長也比較健壯。王樹芝等[3]對冬青苦丁茶樹進行組織培養研究發現，試管苗在1/2MT+0.2 mg/L NAA+0.2 mg/L IBA培養基上短時間培養后，蛭石上扦插發根，較容易移栽成活。試管苗原來的環境是無菌的，出瓶種植環境難以保持完全無菌，但應盡量減少雜菌大量滋生。因此，將移栽基質用殺菌劑或高溫高壓滅菌，同時可以噴一定濃度的殺菌劑如百菌清、多菌靈等，濃度在800～1 000倍，以有效的保護幼苗。

3 煉苗

試管苗的煉苗方式主要有兩種，即有閉瓶煉苗若干天再開瓶煉苗幾天或者閉瓶煉苗若干天后移栽。充分煉苗，促進莖葉保護組織的發生和氣孔功能的恢復。試管苗在室內生根達到一定高度后，可移到室外溫室煉苗，開始可蓋兩層遮光率70%～90%的遮陽網，一周后只蓋一層，早晚及陰雨天可不蓋，避免中午強光直射。一般煉苗15 d（夏季）和30 d（冬季），葉色濃綠，形成蠟質層后就可移栽到溫室，光照強度要逐漸增強。一般情況下，初始光線應為日光的1/10，其后每3 d增加10%，經過10～30 d煉苗即可栽入田間，但一定要避免中午的強光。濕度按開始3 d飽和濕度，其后每2～3 d降低5%～8%，直到與大氣相同。煉苗時間的長短對生根苗移栽成活有一定的影響，適當延長煉苗時間可以提高移栽成活率[4]。

4 環境條件控制

環境條件對移栽有重要影響，在溫室的環境與大田環境條件接近的情況下，移栽易成活，其中光照、濕度和溫度等是重要因子。試管苗出瓶后要靠自己進行光合作用維持生存，因此光照不能太弱，以強度較高的漫射光為好，隨苗的壯弱、喜光或喜陰、種植成活的程度而定。光線過強，會使葉綠素受到破壞，引起葉片失綠、發黃或發白，使小苗成活延緩。過強的光線還能刺激蒸騰作用加強，使水分平衡的矛盾更加尖銳，容易引起大量死苗。

同時，小苗在種植過程中溫度要適宜。如果溫度過高，會使水分失衡，細菌更易滋生，而且蒸騰作用加強，不利于組培苗的快速緩苗；如果溫度過低，則生長減弱或停滯，使緩苗期加長且成活率降低。一般介質溫度略高于空氣溫度2～3℃，有利于生根和促進根系發育，提高成活率。試管苗移栽后適宜溫度一般為16～20℃，溫度升高成活率降低，超過22℃，成活率則顯著下降。孔祥生等[2]移栽試驗表明：較低溫度有利于移栽成活，在15～20℃條件下，以蛭石為移栽基質，其移栽成活率（36%）比25～30℃條件下（8%）提高3.5倍。陳宗禮等[1]發現，移栽初期空氣濕度要大，尤其是剛剛入盤的試管苗，特別容易萎蔫，對空氣濕度的要求較為苛刻，紅棗在相對濕度為60%～65%時移栽苗幾乎無成活，在空氣濕度85%～95%維持30 d時成活率高達97.5%。馮謙等[4]認為，河北楊在相對濕度為60%～65%時移栽苗無成活，在空氣濕度85%～95%維持30 d時成活率高達98.3%。此外，利用噴蒸騰抑制劑，同樣可以提高移栽成活率。通過提高周圍的空氣濕度，降低基質中的水分含量，葉面的蒸騰減少，盡量接近培養瓶中的條件，這樣小苗才能始終保持挺拔的姿態。另外管理過程中不要澆水過多，以利于根系的呼吸，有助于生根成活。

5 養護管理

組培苗從無菌異養培養，轉入到溫度高、濕度小的自養環境中，由于組織幼嫩，易滋生雜菌，造成苗霉爛或根莖處腐爛而死亡。因此，在整個生長期，每間隔7～10 d輪換噴1次殺菌劑，如多菌靈、百菌清、甲基托布津等預防病菌危害。用0.1%多菌靈洗根并在種植后用它來澆透水，以清除雜菌對首次移栽幼苗的危害，這對提高成活率有顯著的效果。組培苗首次移栽1周后，可施些稀薄的肥水，視苗大小，濃度逐漸由0.1%提高到0.3%左右，也可用1/2的MS大量元素的水溶液作為追肥，以加快組培苗的生長與成活[5]。

6 叢枝菌根真菌的應用

目前，離體組織培養已逐漸成為一些經濟作物、林木和果樹的主要繁殖形式。在這種形式的種苗繁育過程中，由于前期（指個體增殖階段，包括愈傷組織的培養，芽、根的誘導）是在無菌條件下進行的，因而種苗與菌根真菌接觸的機會大為減少，甚至到了后期(指苗圃馴化培育階段)也還常常得不到菌根真菌的幫助，導致苗木生長狀況較差，抵抗力較弱，成活率較低。因此，盡早對組培苗進行高效菌根真菌的人工接種，實現菌根化，是培育壯苗的重要途徑之一[6]。接種AM真菌可克服組培苗生長緩慢，在田間適應力差的不足，縮短緩苗期。接種AM真菌還可抑制組培苗在未消毒土壤中被土傳病原菌侵染[7]。所以菌根化脫毒苗將成為種苗生產的發展趨勢。

國內外在研究植物組培苗的AM真菌接種效應時，接種時機主要集中于試管苗生根階段、出瓶后馴化移栽初期和馴化結束后3個時期。但多數研究認為在后兩個時期，尤其是組培苗馴化結束后接種叢枝菌根真菌，對試管苗的生長發育與養分吸收產生積極的促進作用；對加快組培苗馴化進程、提高組培苗移栽成活率和抗病能力、減輕環境脅迫等方面也起到了積極作用。

郭秀珍等[8]的試驗結果顯示，移栽時，對葡萄組培苗進行VA菌根真菌的人工接種，能顯著促進其植株的生長。Vidal等[9]的研究結果表明，在馴化階段，鱷梨微繁苗一般生長較慢，但若在試管苗開始轉人馴化培養時，及時接種菌根真菌，可使幼苗形成良好的根系統，促進根、莖生長，提高根莖比，增加植物組織中N、P、K素的含量，并有助于植株抵抗移栽時所受的脅迫。Fortuna等[10]在紅葉李組培苗的菌根真菌接種效應的研究中發現，在馴化開始的6周內，菌根幼苗與非菌根幼苗的生長并無差異，但與未經接種處理的幼苗相比，AM真菌對植株根系形態產生很大影響；此后，菌根真菌接種在幼苗馴化與生長發育過程中的重要作用逐步顯現出來：菌根植株莖尖頂端生長較早恢復，在馴化結束時，菌根植株的高生長量與生物量均有顯著的提高。李敏等[11]在對芋組培苗進行移栽時，接種AM真菌，發現其能提高移栽成活率和葉片光和效率。任萌圃等[12]在幾種叢枝菌根真菌對金葉連翹組培苗移栽后成活率和生長的影響的研究中發現，接種叢枝菌根真菌能夠明顯促進金葉連翹組培苗移栽后的生長，但對其移栽成活率的影響不顯著；不同菌種間、同一菌種不同菌株間的接種效果均存在顯著差異。郭紹霞[13]選擇4種分布最廣的AM真菌，進行牡丹菌根化苗的培養，研究發現AM真菌對牡丹種子萌發沒有影響；對實生苗的生長有明顯的促進作用，可以改善根系結構，促進側根萌發。同時叢枝菌根還能促進牡丹實生苗對N、P、K、Zn和Mn等礦質元素的吸收，并能促進一年生實生苗對Fe的吸收。目前叢枝菌根真菌在園藝植物組培苗移栽中的作用還有待下一步的深入研究。

7 小結

近年來，利用組織培養技術繁殖、培育優質園藝植物苗木，繁殖系數大，速度快，可進行周年生產。其中馴化移栽是組培技術中極為重要的一環，它直接關系到組培苗能否應用于生產，是否能獲得效益的關鍵。因此，一方面要綜合考慮各個影響因子，并進一步深入研究環境、植物、菌根之間的互作關系；另一面要精細管理和養護，不斷提高和完善移栽技術，提高煉苗效率，為苗木大規模生產和實踐提供技術和支持。

[1]陳宗禮，延志強，薛 皓，等.紅棗組培苗優化配套移栽技術的研究[J].西北農林科技大學學報（自然科學版），2001，29（4）：63-69.

[2]孔祥生，張妙霞.牡丹離體快繁技術研究[J].北方園藝，1998，3（4）：87-89.

[3]王樹芝，劉德華，劉 黎，等.冬青苦丁茶樹組織培養的研究[J].湖南農業科學，2009，（2）：131-133.

[4]馮 謙，魏德勝，虎 敏，等.河北楊組培苗優化配套移栽技術研究[J].東北林業大學學報，2003，31（5）：7-9.

[5]王 鵬，土建明，王占華，等.提高組培苗移栽成活率的技術方法[J].中國林副特產，2004，（4）：21-22.

[6]王真輝.菌根真菌在植物組培苗生產技術中的應用[J].熱帶農業科學，2001，（5）：71-78.

[7]葛均青，于賢昌，王竹紅.叢枝菌根（AM）及其在園藝作物上的應用[J].山東農業大學學報（自然科學版），2003，34（2）：303-306.

[8]郭秀珍，李長江，畢國昌.泡囊叢枝狀（VA）菌根真菌對葡萄組培苗的生長效應[J].園藝學報.1988，15（2）：77-78.

[9]Vidal M T，Azcon-Aginiar C，Barea J M.Mycorrhizat inoculation enhance～growth and development of micropropagated plants of avocado[J].HortSeience，1992，27（7）：785-787.

[10]Fortuna P,Morini S,Giovanneti M.Effects of arbuscular mycorrhizal fungi on in vitro rootinitiation and development of microOropagated plum shoots Journal of HorcicuhtttsI Science and Bio-technology，1998，73（1）：19-28.

[11]李 敏，劉鵬起，劉潤進.叢枝菌根真菌對芋組織培養苗生長的影響[J].園藝學報，2002，29（5）：451-453.

[12]任萌圃，李 青，王幼珊，等.幾種叢枝菌根真菌對金葉連翹組培苗生長的影響[J].北京林業大學學報，2004，26（6）：66-70.

[13]郭紹霞.牡丹AM真菌資源調查與菌根化苗培養研究 [D].北京：北京林業大學，2004.