高效液相色譜法測定蘭索拉唑在健康人血中的濃度

蔡 穎 劉 花 符策浩 張 惠

海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院國家藥物臨床試驗機構(gòu)，海南 海口 571101

頭孢克洛為廣譜半合成頭孢菌素類抗生素，臨床適用于敏感菌所引起的呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、耳鼻喉科及皮膚、軟組織感染等，頭孢克洛在人體內(nèi)含量的方法國內(nèi)外都有報道[1]-[4]。本文采用的HPLC 外標(biāo)法測定頭孢克洛血漿藥物濃度，方法簡便，重現(xiàn)性好，可用于頭孢克洛人體藥代動力學(xué)研究。

1 儀器與試劑

Waters 1525液相色譜儀、Waters 2487檢測器（美國）、Waters Breeze3.0工作站，WD-12水浴氮吹儀（杭州奧盛儀器有限公司），XW-80A 旋渦混合器（上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠），島津AX200型電子天平（日本），SZ-Ⅲ型自動三重純水蒸餾器（上海嘉鵬科技有限公司），PHS-3C 精密pH 計（上海精密科學(xué)儀器有限公司），TDZ4-WS 低速臺式離心機（長沙湘儀離心機儀器有限公司）。

頭孢克洛對照品由中國藥品生物制品檢定所提供（1304 81-200102，含量：94.0%）。乙腈（美國Fisher 公司生產(chǎn)，色譜純），甲醇（美國Fisher 公司生產(chǎn)，色譜純），結(jié)晶乙酸鈉（天津市大茂化學(xué)試劑廠，AR），冰醋酸（廣東光華化學(xué)廠有限公司，AR），純化水（海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院國家藥物臨床試驗機構(gòu)自制）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 流動相：乙腈—甲醇—用冰醋酸調(diào)至3.7pH的0.08mol/L 乙酸鈉溶液（6：8：86），色譜柱：Agi lent Eclipse Plus C18，3.5um，3.0×150mm，柱溫為35℃，紫外檢測波長254nm，流速為0.4mL/min。

2.2 血漿樣品處理 取肝素化血漿500μl 置于2ml 具塞塑料管中，加入10%三氯醋酸200μl，漩渦混勻60s，16000r/min離心5分鐘，取上清液進行20μl 定量進樣分析。在上述色譜條件下，頭孢克洛的出峰時間約為5.4min，血漿中內(nèi)源性物質(zhì)無干擾。

2.3 血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線制作 用空白血漿配制相當(dāng)于頭孢克洛濃度分別為0.1、0.25、0.5、1.0、5.0、10.0、20ug/mL 的樣品，按“血漿樣品處理”項下操作，記錄對照品峰面積，以頭孢克洛峰面積對樣品濃度（ug/ml）作直線回歸，線性方程：Y=35.197X-4.6736，線性范圍為0.1-20.0ug/ml，相關(guān)系數(shù)R2＝0.9999。

2.4 方法精密度和回收率 配制含頭孢克洛0.25、1.0、10.0ug/ml 血漿標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)份，分別于1d 內(nèi)每個濃度平行5份按血漿樣品處理方法處理并測定，評價本法測定血漿中頭孢克洛含量的回收率及日內(nèi)精密度。連續(xù)3天配制并測定上述濃度樣品，考察方法日間精密度。三個濃度的萃取回收率在68.6～71.3%之間，方法的回收率均在98～108%之內(nèi)，日內(nèi)RSD 小于4%、日間中、高濃度RSD 均小于10%，低濃度小于20%。符合生物等效性研究的方法學(xué)要求。

2.5 穩(wěn)定性考察 按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法，制備低、中、高濃度樣品數(shù)份，分別置室溫、凍存、凍融條件下存放不同時間后，按“2.2”項下方法處理并測定，考察樣品放置穩(wěn)定性，并考察了處理完的溶液的室溫穩(wěn)定性，結(jié)果表明經(jīng)酸化處理后的頭孢克洛血漿樣品在室溫條件下至少能穩(wěn)定8h；凍存條件（-80℃）下至少能穩(wěn)定30天；在凍融4周期內(nèi)含量沒有下降。

3 討論

頭孢克洛為廣譜半合成頭孢菌素類抗生素。其作用機制系通過抑制細菌細胞壁的合成，體外實驗證明頭孢克洛對臨床上多種常見致病菌有抗菌作用，臨床適用于敏感菌所引起的呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、耳鼻喉科及皮膚、軟組織感染等。試驗過程中發(fā)現(xiàn)頭孢克洛在正常人血漿中易降解，而在酸化的血漿中較為穩(wěn)定，可在血漿分離保存的過程中，將分離后的2ml左右血漿中加入100ul冰醋酸混勻后凍存，本文用HPLC外標(biāo)法測定人血漿中頭孢克洛濃度，結(jié)果表明它與內(nèi)源性雜質(zhì)分離良好，是一個靈敏、簡便、可靠的方法，完全可以滿足臨床藥代動力學(xué)以及藥物代謝的要求。

[1]石焱，羅佳波，隋淼，宋曉楠，襲榮剛，姚文．頭孢克洛片在健康受試者體內(nèi)的藥代動力學(xué)和生物等效性[J]．解放軍藥學(xué)學(xué)報，2008，24（03）：207－210．

[2]趙明，張逸凡，陳笑艷，李榮琴，鐘大放．頭孢克洛緩釋片在健康人體的藥代動力學(xué)及生物等效性[J]．中國臨床藥理學(xué)雜志，2003，19（06）：426－429．

[3]楊生，張宏文，王蔚青，潘雯瀾．頭孢克洛血藥濃度測定及其藥代動力學(xué)研究[J]．中國生化藥物雜志，2008，29（05）：329－331．