漢防己甲素抑制肺癌A549細胞生長的研究

韋熹苑 裴剛 林藝紅 丁揚洲 唐鑫 張軍

漢防己(Stephania tetrandra S.Moore)根所含漢防己甲素有抗炎、鎮痛作用［1］，臨床主要用于心律失常、肺纖維化等疾?。?］。肺癌在我國大中城市的發病率及死亡率均居癌癥首位。有報道漢防己甲素可逆轉GLC-82/ADR耐藥肺癌細胞對阿霉素的耐藥作用［3］。本實驗研究漢防己甲素對肺癌A549細胞生長抑制作用，探討其治療肺癌的可能性。

1 材料

1.1 儀器 CO2培養箱;倒置相差顯微鏡;酶聯免疫檢測儀。

1.2 試藥與細胞 MTT(鵬程生物公司生產);小牛血清(杭州四季清公司生產);細胞株購于中南大學。

2 方法

2.1 漢防己甲素溶液的配制 按文獻制備漢防己甲素后［4］，精密稱取適量，DMS0溶解，無血清培養液稀釋，得1.25～80 ug/ml的樣品溶液，4℃冰箱中保存備用。

2.2 細胞增殖抑制實驗 在37℃，5%CO2的環境下，以10%小牛血清的高糖培養液和0.25%的胰酶消化傳代，選用生長對數期的細胞做實驗用。將細胞的濃度稀釋至5×104個/ml加入96孔計數板，置入培養箱培養4 h后，吸出孔內培養液后，每孔加入200 μl不同濃度的漢防己甲素液，再培養箱中培養48 h后，吸出漢防己甲素液，加入80 μl高糖液和20 μl MTT液，再培養箱內孵育，4 h后，將MTT液棄去，PBS清洗一次，每孔加入150 μl DMSO，振搖10 min，酶標儀于492 nm處測定吸光值。實驗重復3次;計算細胞抑制率，以抑制率 ＞50%為有效［5］。SPSS軟件進行處理。并采用Bliss法，求算IC50值。

3 結果

在1.25～20 μg/ml濃度范圍內，漢防己甲素對A549細胞的抑制率分別 11.6%、30.54%、54.94%、76.15%、98.27%，濃度大于20 μg/ml后，抑制率趨于平穩。其IC50的值為 7.66 μg/ml。

4 討論

A549細胞系肺癌細胞是從肺癌患者癌組織中分離出來的非常小細胞肺癌細胞系，與患者體內的癌細胞具有基本相似的生物學特性。據文獻報道，漢防己甲素對肝癌、白血病以及卵巢癌等均有抑制作用，但對于肺癌方面的報道較少［6］。本次結果表明漢防己甲素具有抗肺癌A549細胞生長抑制作用，這位其治療肺癌提供了一定參考，但其作用機制還需進一步研究。

［1］Kwan CY，Achike FL．Tetrandrine and related bisbenzylisoquino-line a1kaloids from medicinal herbs:cardiovascular effects and mechanisms of action．Acta Pharmacol Sin，2002，23(12):1057．

［2］Chen L，Li Q Y，Yang Y，et al．Inhibitory effects of tetrandrine on the Na(+)channel of human atrial fibrillation myocardium．Acta Pharmacol Sin，2009，30(2):166-174．

［3］徐萌，周蓓．漢防己甲素逆轉肺癌化療耐藥和凋亡抗性的實驗研究．新中醫，2006，38(6):90-91．

［4］冀春茹，王浴銘，劉延澤，等．中藥化學實驗技術與實驗．河南科技出版社，1986，237．

［5］吳舟鋒．腫瘤化療藥物敏感性試驗．國外醫學:外科學分冊，1988，25(3):153-155．

［6］Ng LT，Chiang LC，Lin YT．Antiproliterative and apoptotic effects ofetrandrine 0n different human hepatoma cell lines．Am J Chinese Med，2006，34(1):125．