膠陀螺子實體中幾種化合物的分離鑒定

馬偉才，楊樹東，包海鷹

（吉林農業大學中藥材學院,吉林 長春 130118）

膠陀螺Bulgaria inquinans(Pers.)Fr.，又名拱嘴蘑、豬嘴蘑、木海螺、膠鼓菌、污膠陀螺菌，隸屬于子囊菌綱（Ascomycetes）、 蠟釘菌目（Helotiales）、 膠陀螺科（Bulgariaceae）、 膠鼓菌屬（Bulgaria）[1-3]。 主要分布于我國吉林、遼寧、黑龍江、河北、甘肅、云南等省區。夏秋季生于樺樹（Betula platyphylla）、 柞樹（Quercus mongolicus）、 榆樹（Ulmus pumila）倒木和木樁上，常生長在遮陰面，雨后大量出現，有時在香菇、木耳椴木上與之共同生長。在煤礦中不見光的地方常出現此菌[3，4]。

膠陀螺有毒，處理不當食用或食用過多后會引起四肢皮膚疼癢，產生灼熱感，粘膜腫脹，嘴唇翻腫，并伴有惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉，且見光后病情加重，顯現過敏性皮炎型中毒癥狀[2，5-7]。包海鷹等[8]從膠陀螺中分離到麥角甾醇、丙二酸和葡萄糖3個單體化合物和2種香氣成分。崔東濱等[9]從膠陀螺中分離到麥角甾醇、半乳糖醇、草酸。Edwards等[10]對色素進行了研究，得到Bulgarhodin、Bulgarein、4,9-dihydroxyperylene-3,10-quinone三種醌類色素單體。Stadler M等[13]從膠陀螺中得到3個化合物。包海鷹等[1]研究發現膠陀螺含18種氨基酸總量為6.84%、總糖17.07%、脂肪2.18%、蛋白質10.43%。張鵬[14]用70%乙醇對膠陀螺進行分離，得到1-羥基-3-甲基-9,10-蒽醌、大黃素、大黃酚等41個化合物。

1 材料和儀器

1.1 材料

膠陀螺子實體購自吉林省長白山區，并由吉林農業大學菌物研究所圖力古爾教授鑒定。

1.2 儀器

RY-2型熔點測試儀，天津市國銘醫藥設備有限公司；EI-MS質譜儀， Finnigan-MAT.LCQ電噴霧質譜儀；核磁共振波譜儀，Bruker AM-600MHz型核磁共振波譜儀；紅外檢測儀，德國Bruker WERTREX型紅外檢測儀；紫外檢測儀，日本島津BU-7500型紫外檢測儀；氣相色譜-質譜聯用儀，日本島津產GC-MS-QP型氣-質聯用儀；WFH-204B型手提式紫外分析儀，上海精科實業有限公司。

2 實驗方法

2.1 膠陀螺子實體中化學成分的提取分離

膠陀螺子實體粉碎過20目篩，將6 kg粉末用丙酮在58℃提取5 h，重復提取3次，減壓濃縮并合并提取液，共得浸膏342 g，浸膏用適量50℃的水將其溶解，然后分別加入等量的石油醚、氯仿，反復萃取3次，分別合并石油醚層和氯仿層溶液，減壓濃縮得到石油醚濃縮物135 g（組分Ⅰ）和氯仿濃縮物45 g（組分Ⅱ），最后將水溶液濃縮蒸干共得154 g（組分Ⅲ）。石油醚層上硅膠柱，以氯仿∶石油醚（5∶1）的溶劑系統洗脫，得A組分在10%硫酸只顯1個斑點。水層濃縮后低溫放置24 h，有白色沉淀析出，過濾，并經甲醇和丙酮反復純化得到化合物1。氯仿萃取組分（組分Ⅱ）35 g上硅膠柱[15]，用石油醚∶正己烷∶乙酸乙酯∶甲酸（1∶3∶1.5∶0.1） 的溶劑系統洗脫得 B 組分，B組分上硅膠柱，用正己烷∶乙酸乙酯∶甲酸（10∶0.5∶0.5） 的溶劑系統洗脫得M1，低溫下有白色沉淀析出，白色沉淀經正己烷反復純化得化合物2。

2.2 膠陀螺發酵物化學成分的提取分離

膠陀螺經黑根霉（Rhizopus stolonfer）發酵后，將其曬干共300 g，以丙酮為溶劑用索氏提取器提取至無色，將提取液濃縮，硅膠拌好，用旋轉蒸發將其旋干，用硅膠裝柱，采用干法上樣，以氯仿為流動相，得組分S1，用乙酸乙酯︰正己烷（1∶9）為流動相洗脫，以1/10柱體積為一餾分收集洗脫液得到組分N1，低溫放置有白色沉淀析出，得化合物3。

3 實驗結果

3.1 化合物1的結構鑒定

化合物1，無色晶體，熔點134℃～136℃，溶于水、甲醇、乙醇、丙酮等極性大的有機溶劑。10%的硫酸不顯色，紫外燈下無熒光，其水溶液點于定性pH試紙上，顯紅色，說明為酸性物質。化合物1的紅外光譜圖見圖1。

圖1 化合物1的紅外光譜圖

從圖1中可以得出，在以2992 cm-1和2949 cm-1為中心處，有強而寬的吸收峰，2720 cm-1、2597 cm-1和2244 cm-1處有肩峰，說明為-OH的伸縮振動，在1732 cm-1和1704 cm-1處有一強峰，說明為羰基的伸縮振動，

在1314 cm-1處有一中強峰，說明為C-O的伸縮振動。與丙二酸標準紅外圖譜的數據一致，并且以上數據與文獻報道[9]一致，故鑒定化合物1為丙二酸。

3.2 化合物2的結構鑒定

化合物2，白色固體粉末，熔點 63℃～64℃，易溶于乙醚、氯仿、正己烷等有機溶劑，不溶于水。10%的硫酸不顯色，紫外燈下無熒光。

MS-EI m/z： 256[M]+，43，57，60，73，115，129，143，157，171，185，199，213，227；13C-NMR(CDCl3)δppm： 179.93（C-1）、 34.02（C-2）、 24.68（C-3）、 29.06（C-4）、 29.24（C-5）、 29.36（C-6）、 29.43（C-7）、 29.59（C-8）、 29.59（C-9）、 29.43（C-10）、 29.36（C-11）、29.24（C-12）、 29.06（C-13）、 31.93（C-14）、 22.69（C-15）、 14.10（C-16）；1H-NMR(CDCl3) δppm： 2.33-2.37(2H,t)、 1.59-1.67(2H,q）、 1.26-1.30(2H,t)、 1.26-1.30(2H,s)、 1.26-1.30(2H,q)、 0.86-0.92（3H,t） ；13C-NMR（DEPT-135）(CDCl3)δppm： 含 10個-CH2基團，1個-CH和1個-CH3基團。以上數據與文獻報道[14]的棕櫚酸一致，鑒定化合物2為棕櫚酸。

3.3 化合物3的結構鑒定

化合物3，白色固體，易溶于氯仿，熱的正己烷等有機溶劑，10%硫酸不顯色。電噴霧質譜，分子量為294，得到241、259、277碎片離子峰。13C-NMR(CDCl3)δppm:180.27（C-1）、 34.07（C-2）、 24.67（C-3）、 127.90（C-4）、 128.07（C-5）、 29.68（C-6）、 29.68（C-7）、 129.71（C-8）、 130.20（C-9）、 29.59（C-10）、 29.06（C-11）、29.23（C-12）、 29.43（C-13）、 27.18（C-14）、 29.59（C-15）、 29.35（C-16）、 31.92（C-17）、 22.56（C-18）、 14.09（C-19）；1H-NMR(CDCl3) δppm： 2.34(2H,t)、 1.64(2H,q)、 5.35(H,q)、 5.31(H,q)、 2.04 (2H,q)、 5.39 (H,q)、5.36(H,q)、 1.59 (2H,q)、 1.31 (2H,t)、 1.25 (2H,s)、 1.31(2H,q)、 0.88 (3H,t)；13C-NMR（DEPT-135）(CDCl3)δppm：含13個-CH2基團，4個-CH和1個-CH3基團。綜上所述，斷定化合物3為4,8-十九碳二烯酸。

3.4 石油醚層中的A組分的GC-MS分析結果

本研究采用GC-MS聯用分析方法，對膠陀螺的石油醚層分離得到的A組分進行分析和鑒定。氣相分離得到22個峰，總離子流圖見圖2。

圖2 GC-MC分析膠陀螺石油醚層A組分的色譜圖

通過質譜數據庫檢索并與有關標準圖譜資料核對，將各個化合物分別鑒定為十八碳二烯酸和二十三碳烷烴等22個化合物。結果見表2。

4 結論

從膠陀螺子實體中分離出丙二酸、棕櫚酸、4,8-十九碳二烯酸及A組分。

包海鷹等[8]從膠陀螺子實體乙醚提取物中分離出丙二酸，而本實驗從丙酮提取物，水萃取層中分離得到大量丙二酸，表明丙二酸不僅存在于低極性的溶劑中，在高極性的溶劑中亦大量存在。丙二酸是合成多種化工產品的原料，并且有抑制琥珀酸脫氫酶的作用。至于丙二酸在膠陀螺的生長發育及其生理代謝中發揮什么作用有待于進一步研究。

表2 膠陀螺的石油醚層的A組分的GC-MS分析結果

張鵬[12]在膠陀螺子實體70%乙醇提取物氯仿萃取層中分離得到棕櫚酸。而本文從丙酮提取物氯仿萃取層中分離得到棕櫚酸，說明棕櫚酸主要存在于膠陀螺子實體的氯仿層中。棕櫚酸主要分布在菌物[14]、植物[15，16]中。棕櫚酸用于制造蠟燭、肥皂、軟化劑、防凍劑等，對呼吸道、眼和皮膚有刺激性。

4,8-十九碳二烯酸為首次在膠陀螺子實體中分離得到。二烯酸類化合物是合成昆蟲生長調節劑[17，18]和保幼激素[19，20]的主要中間體。

從石油醚層中分離出的A組分包括22個化合物，其主要為一類極性較小的脂肪族烴及脂肪酸類化合物。除其中6個化合物（十五碳烷烴、十六碳烷烴、十七碳烷烴、二十碳烷烴、二十一碳烷烴和2H-Pyran-2-one,5,6-dihydro-6-pentyl）與包海鷹等[8]在石油醚層中的相同外，其余16個化合物為首次在膠陀螺子實體中分離得到。包海鷹等[8]在該菌石油醚提取物中未檢測到碳原子數為27、29和31的開鏈烷烴，而本文在石油醚提取物中檢測到了二十七碳烷烴和二十九碳烷烴。

本文對膠陀螺的化學成分的提取分離提供了新的內容。

[1]包海鷹，李玉.膠陀螺營養成分的研究[J].中國食用菌，2001，20(6)：41-42.

[2]李茹光.東北大型食用、藥用及有毒真菌[M].長春：東北師范大學出版社，1992.

[3]劉曉龍，劉振欽，李曉，等.膠陀螺菌種分離及馴化栽培研究[J].吉林農業大學學報，2002，24(2):75-78.

[4]于春波，程彬，宋友，等.膠陀螺人工培養特性的研究[J].吉林林業科技，2002，31(3)：10-12.

[5]包海鷹，李玉.膠陀螺的光敏活性研究[J].食用菌學報，2002，9(4)：15-17.

[6]于江，邵志強.膠陀螺中毒3例[J].牡丹江醫學院學報，2002，23(2)：57-58.

[7]胡建友.膠陀螺中毒二例報告[J].北京醫學，2002，24(3)：216.

[8]包海鷹，李玉.膠陀螺化學成分的研究[J].菌物系統，2003，22(2)：303-307.

[9]崔東濱，王淑琴，丁曉昆.膠陀螺化學成分的研究[J].中國中藥雜志，1997，22(8)： 485-486.

[10]Edwards RL,Lockett HJ.Constituents of the higher fungi-Part XⅥ,bulgarhodin and bulgarein,novel benzofluoranthenequinones from the fungus Bulgaria inquinans(Fries)[M].Journal of the Chemical Society:Perkin Transactions I,1976.

[11]Stadler M,Anke H,Dekermendjian K,et al.New bioactive azaphilones from the fruit bodies and mycelial cultures of the Ascomycete Bulgaria inquinans(Fr.)[J].Nature Product Letter,1995(7):7-14.

[12]張鵬.膠陀螺化學成分及生物學活性研究[D].沈陽藥科大學，2007.

[13]肖崇厚.中藥化學[M].上海：上海科學技術出版社，1997.

[14]昝立峰，圖力古爾，包海鷹，等.紫紅絲膜子實體的化學成分研究[J].菌物學報，2008，27(2)：284-288.

[15]賀蕊，陳雨安，賴建中，等.甘遂的化學成分研究[J].中成藥研究，1988(3)：23.

[16]徐從立，陳海生，譚興起，等.中藥天冬的化學成分研究[J].天然產物研究與開發，2005，17（2）：128-130.

[17]孔嶺泉，魏昭云，呂臘梅.(2E,4E)-3,7,11-三甲基-2,4-十二碳二烯酸的合成[J].安徽大學學報：自然科學版，1989.

[18]劉天麟，謝文權，畢富春，等.昆蟲生長調節劑3,7,11-三甲基-2,4-十二碳二烯酸乙酯及其衍生物的合成[J].化學通報，1994(1)：41-44.

[19]龍康侯，王植材，劉初蓮，等.昆蟲保幼激素類似物-JS-31(3,7,11-三甲基-2,4-十二碳二烯酸-2-丙烯酯)的合成[J].中山大學學報，1978(4)：60-65.

[20]朱新海，江煥峰，田興山，等.保幼激素類似物11-甲氧基-3,7,11-三甲基-2,4-十二碳二烯酸異丙酯的簡便全合成[J].有機化學，2004，24(6)： 645-657.