藍(lán)耳病血清學(xué)檢測(cè)與防控應(yīng)用

唐 利

（上海海利生物藥品有限公司，上海 201403）

近年來，豬場(chǎng)發(fā)病越來越復(fù)雜，主要以混合感染和繼發(fā)感染的為主，很難看到疾病的典型特征，僅僅根據(jù)臨床癥狀已經(jīng)很難來進(jìn)行疾病診斷。在這種疾病流行趨勢(shì)下，血清學(xué)檢測(cè)方法尤其是ELISA抗體檢測(cè)方法，因其操作簡(jiǎn)便、快速準(zhǔn)確成為確診疾病和建立疾病預(yù)警系統(tǒng)的有效手段。本人長(zhǎng)期從事實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)分析和臨床豬場(chǎng)疫病防控等工作，就藍(lán)耳病ELISA抗體檢測(cè)與該病防控應(yīng)用做些總結(jié)，以供參考。

1 檢測(cè)的目的

1.1 疾病預(yù)警和感染壓力評(píng)估

通過檢測(cè)豬藍(lán)耳病病毒（PRRSV）抗體水平，可以了解豬藍(lán)耳病（PRRS）在豬群中的流行及感染情況。目前使用比較廣泛的是IDEXX藍(lán)耳病ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，用其檢測(cè)不同階段仔豬或群體的抗體水平（包括ELISA數(shù)值高低和抗體均勻度），可以較好的了解藍(lán)耳病在各個(gè)群體中的感染時(shí)間和感染壓力。如圖1所示。

該豬場(chǎng)仔豬未接種任何藍(lán)耳病疫苗（包括“自家苗”），從檢測(cè)結(jié)果可以看出：仔豬抗體陽性率在4～8周之間不明確（沒有詳細(xì)檢測(cè)4～8周抗體），但是8周齡以后一直維持高的陽性率，顯示存在藍(lán)耳病病毒感染，同時(shí)，PRRS抗體數(shù)值也呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，抗體陽性率和抗體S/P值變化同步，提示存在藍(lán)耳病病毒血癥或急性感染。14周齡和24周齡一直處于高強(qiáng)度感染。

在評(píng)估豬群某個(gè)疾病感染壓力的時(shí)候，群體抗體的均勻度更加重要。一般均勻度越好，整個(gè)群體的穩(wěn)定性相對(duì)要好；反之，均勻度越差，離散度越高，群體穩(wěn)定性越差。但是，均勻度好，抗體S/P值也很高，到也不是好現(xiàn)象。因此，綜合評(píng)估依然要結(jié)合抗體水平的高低、抗體均勻度、豬群臨床癥狀以及相應(yīng)的病原學(xué)檢測(cè)。

圖1 PRRS抗體檢測(cè)結(jié)果分析（仔豬－IDEXXPRRSAb）

很多豬場(chǎng)如果想很快了解仔豬PRRSV感染狀況，可以直接檢測(cè)仔豬特定階段的PRRSV抗體水平，一般采集80日齡左右階段比較常見，如圖2。

場(chǎng)仔豬沒有接種任何藍(lán)耳病疫苗，在80日齡藍(lán)耳病抗體（IDEXX藍(lán)耳病抗體檢測(cè)試劑盒）參差不齊，顯示該階段仔豬處于不穩(wěn)定狀態(tài)；PRRSV抗體陽性率很高，達(dá)到89.30%（見圖3），顯示該階段仔豬已經(jīng)有大部分存在PRRSV野毒感染。S/P值超過2.5占1/3左右，有的血清抗體S/P值超過3.0甚至更高，顯示仔豬在80日齡之前已經(jīng)受到藍(lán)耳病野毒感染，且感染率比較高（S/P值≥0.4為陽性）。

1.2 免疫程序安排與免疫效果評(píng)估

疫苗免疫接種應(yīng)該考慮藍(lán)耳病在豬場(chǎng)內(nèi)的感染規(guī)律，如有針對(duì)性地檢測(cè)各個(gè)階段仔豬藍(lán)耳病抗體水平，從而進(jìn)行有針對(duì)性的免疫預(yù)防，會(huì)取得比較好的接種效果。

通過抗體檢測(cè)了解母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律，能夠初步確定免疫時(shí)機(jī)。一般很多疫苗接種仔豬的首免時(shí)間跟很多因素有關(guān)系，最主要的是仔豬母源抗體水平。如，仔豬豬瘟的首免時(shí)間要考慮母源抗體干擾，仔豬偽狂犬疫苗的首免也是。

如圖4：該場(chǎng)仔豬未接種任何藍(lán)耳病疫苗，在60～80日齡表現(xiàn)出死亡率升高，僵豬比例增加。藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果顯示：仔豬在50日齡以后藍(lán)耳病抗體陽性率和抗體水平上升，基于該場(chǎng)沒有做過藍(lán)耳病疫苗（包括“自家苗”），提示仔豬群在保育前期開始感染PRRSV，之后陽性率一直升高。根據(jù)商品豬PRRSV感染規(guī)律，建議該豬場(chǎng)藍(lán)耳病活疫苗接種放在10～14日齡。該豬場(chǎng)雖然商品豬PRRSV感染率不斷增高，甚至達(dá)到100%，但不一定所有豬只均發(fā)病或表現(xiàn)出PRRSV感染后的臨床癥狀，這也是PRRSV感染的一個(gè)特點(diǎn)，即感染PRRSV，豬只不一定發(fā)病或表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀。這在臨床控制藍(lán)耳病上就有個(gè)誤區(qū)，即豬群不表現(xiàn)出藍(lán)耳病癥狀，就認(rèn)為沒有藍(lán)耳病。也有人提出這樣一個(gè)觀點(diǎn)：既然豬只感染PRRSV但是不發(fā)病，那是好事，無需接種疫苗。對(duì)于這個(gè)觀點(diǎn)，本人持保留意見。豬只感染PRRSV不發(fā)病，但會(huì)引起免疫抑制、影響豬只生長(zhǎng)以及會(huì)引起其它一些類問題，如繼發(fā)感染等。防疫就是“預(yù)防為主”，等到發(fā)病（表現(xiàn)出癥狀）再想到防疫，損失要大得多。

圖2 藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果－80日齡（IDEXXPRRSAb）

但這里要提醒的是，母源抗體對(duì)接種疫苗有干擾，檢測(cè)的抗體水平不一定是母源抗體的全部，很可能僅是母源抗體的一部分指標(biāo)，當(dāng)然也不能認(rèn)為就是中和抗體或保護(hù)性抗體，這和試劑盒檢測(cè)的目標(biāo)蛋白的抗體有關(guān)系。所以，不能混為一談。如目前使用的IDEXX藍(lán)耳病抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)的抗體是PRRSVN蛋白抗體，N蛋白抗體不具有中和活性。因此，用該試劑盒檢測(cè)的抗體水平與保護(hù)力之間沒有相關(guān)性，不能用于評(píng)估疫苗免疫后的保護(hù)力。至于評(píng)估疫苗接種的效果，通過試驗(yàn)室檢測(cè)方法可以從側(cè)面來評(píng)估。體液免疫在抗擊藍(lán)耳病感染過程中到底有多大作用，仍不確定。因此，僅僅通過抗體檢測(cè)來評(píng)估疫苗免疫效果有很大局限。即檢測(cè)到的抗體高，不一定免疫效果就好；檢測(cè)到的抗體很低，不一定免疫效果就差。這在藍(lán)耳病免疫防疫中更加突出。筆者通過大量的臨床檢測(cè)顯示，該試劑盒PRRSVELISA抗體檢測(cè)S/P值過高，反而提示可能存在藍(lán)耳病野毒感染。而S/P值的高低和病毒的毒力和感染強(qiáng)度似乎有一定關(guān)系。不過，該試劑盒檢測(cè)PRRSV抗體水平用于評(píng)估豬群穩(wěn)定及PRRSV感染狀況有很大優(yōu)勢(shì)。

值得分享的是，藍(lán)耳病活疫苗（CH-1R株）免疫后的用該試劑盒檢測(cè)的抗體S/P值相對(duì)較低。經(jīng)長(zhǎng)期免疫的母豬，其藍(lán)耳病抗體檢測(cè)的S/P值能夠維持在較低水平，抗體水平均勻度好；仔豬免疫后用該試劑盒檢測(cè)的PRRSV抗體S/P值很低甚至小于0.4（S/P值＜0.4為陰性），這能與野毒感染狀態(tài)進(jìn)行區(qū)分，也說明該疫苗毒株的毒力更弱。

當(dāng)然，影響疫苗免疫效果的因素很多，包括疫苗的質(zhì)量，保存和運(yùn)輸，免疫途徑和使用方式，免疫時(shí)機(jī)以及有無免疫抑制因素存在和豬群的健康狀況等。

1.3 疾病診斷

圖3 藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果－80日齡（陽性率）

圖4 豬場(chǎng)藍(lán)耳病抗體檢測(cè)

根據(jù)臨床情況，對(duì)疑似病例加以確診，為現(xiàn)場(chǎng)診斷提供良好的依據(jù)。IDEXX公司PRRSV抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)的抗體S/P值的高低可能提示一些信息：當(dāng)S/P≥2.5時(shí)則表示豬群可能處于病毒血癥期；當(dāng)S/P≥3.5時(shí)表示豬群處于急性感染；6-7周齡時(shí)，多數(shù)仔豬抗體可變?yōu)殛幮裕o病毒循環(huán)），之后如果PRRSV抗體依然存在，提示有PRRSV野毒感染。所以，臨床上應(yīng)用該試劑盒檢測(cè)分析能夠很輕松地評(píng)估豬群/場(chǎng)PRRSV感染壓力，以制定科學(xué)合理的預(yù)防措施。當(dāng)然，要確診仍需要做病原學(xué)檢測(cè)。當(dāng)藍(lán)耳病暴發(fā)時(shí)，診斷工作相當(dāng)重要。雖然有時(shí)候診斷費(fèi)用很高，但是誤診或者片面診斷的代價(jià)將比正確診斷所需的花費(fèi)要多得多，這個(gè)和豬群穩(wěn)定時(shí)不做預(yù)防，而當(dāng)藍(lán)耳病暴發(fā)時(shí)才采取預(yù)防措施的后果相似。一旦確診，首要考慮PRRSV是如何在畜群中流行的。

2 藍(lán)耳病防控

2.1 藍(lán)耳病感染

美國(guó)通過對(duì)118個(gè)豬場(chǎng)進(jìn)行研究其中56%(66/118)是由感染豬只的引進(jìn)而感染；20%（23/118）是由污染的精液而感染；21%（25/118）是由污染物/泥漿，以及人員的流動(dòng)而感染；還有3%（4/118）懷疑是由空氣和節(jié)肢動(dòng)物傳播的。

妊娠母豬和1月齡以內(nèi)的仔豬最易感。豬與豬之間相互傳播是PRRSV傳染發(fā)生的最主要的途徑，與污染有PRRSV的運(yùn)輸工具、器械接觸均可受到感染。感染豬的流動(dòng)也是本病的重要傳播方式。豬感染病毒后2～14周均可通過接觸將病毒傳播給其他易感豬。

持續(xù)性感染是PRRS流行病學(xué)的重要特征，PRRSV可在感染豬體內(nèi)存在很長(zhǎng)時(shí)間，造成PRRSV在豬群中生存、循環(huán)及再傳播。這也是藍(lán)耳病控制中的一個(gè)難點(diǎn)。在PRRSV感染致病過程中也可能涉及抗體依賴性增強(qiáng)作用（ADE）這一特性，即亞中和水平抗體會(huì)增強(qiáng)PRRSV致病性，這也是為什么仔豬斷奶不久感染PRRSV后發(fā)病且死亡高的一個(gè)原因。

同時(shí)，引進(jìn)帶病毒血癥的后備種豬與本場(chǎng)豬群間的水平和垂直傳播導(dǎo)致本場(chǎng)發(fā)病，以及引進(jìn)PRRSV陰性豬與本場(chǎng)PRRSV強(qiáng)陽性豬群之間傳播導(dǎo)致新引進(jìn)豬發(fā)病成為目前引種工作的一個(gè)難點(diǎn)。

空氣傳播在PRRSV傳播途徑中的作用還存有不同意見。傳播媒介的傳播可能與其機(jī)械性攜帶PRRSV有關(guān)系，如蒼蠅體表攜帶PRRSV進(jìn)行傳播，但這不是PRRSV傳播的主要途徑。

2.2 免疫防疫

根據(jù)PRRSV的傳播特點(diǎn)以及感染特點(diǎn)，即仔豬一般在斷奶后至保育前期是PRRSV感染高峰期，及早接種疫苗是控制該病的重要有效措施。因此，筆者建議陽性豬場(chǎng)仔豬免疫一般“宜早不宜遲”。接種活疫苗能顯著降低藍(lán)耳病野毒感染率和發(fā)病嚴(yán)重程度，降低藍(lán)耳病暴發(fā)時(shí)引起的損失。這些損失還沒有包括生豬價(jià)格市場(chǎng)行情的變化和飼料價(jià)格的增長(zhǎng)帶來的影響。藍(lán)耳病暴發(fā)后繼發(fā)其他疾病會(huì)導(dǎo)致更加大的損失，還有診斷及檢測(cè)上的發(fā)費(fèi)。在開始采取預(yù)防措施之前，弄清楚病毒在畜群中的傳播途徑相當(dāng)重要，尤其是在生長(zhǎng)育肥豬中采取措施時(shí)更是如此。如果母豬群是穩(wěn)定的，仔豬階段通過采取小保育，疫苗接種和分階段飼養(yǎng)等措施可以取得很好的預(yù)防效果。

當(dāng)然，控制藍(lán)耳病依然要采取綜合措施，包括飼養(yǎng)管理、生物安全、免疫接種等措施，同時(shí)還要做好其他疫病免疫防疫工作，如豬瘟、偽狂犬、喘氣病、細(xì)小、豬圓環(huán)病毒2型等。