周緒斌,周克鋼,雷健良,鄢長瑞,王士祥,李 聰,栗 娟,阮志勇,鐵 軍,歐陽寬忠,楊雄華,賈彥濤,秦云
(海博萊生物大藥廠北京代表處,北京 100086)
2009年對于中國養豬業是不平凡的一年,全球金融危機的影響以及原料價格的上漲導致養豬成本上升,公眾對環保問題和肉品衛生安全越來越關注,養殖模式也在發生劇烈的變化,規?;⒓s化程度進一步提高,大型集團化養殖公司急速擴張壯大,專業化養豬人才緊缺,健康、綠色養豬逐漸列入議事日程。
在中國養豬產業的轉型過程中,豬群健康始終是無法擺脫的瓶頸,疾病始終成為制約我國養豬產業健康有序發展的限制性因素。在品種、營養、設備全面與國際接軌的大環境下,為何我國種豬的生產力始終在低水平徘徊?疾病終究是繞不過去的話題。
由于我國獨特的養殖環境和特點,規模化豬場的疾病還是相對比較復雜,疾病種類繁多,病原變異快,多病原混合感染,加上管理水平較低,忽視環境衛生水平,生物安全水平不足,動物保健品市場混亂,專業化診斷服務機構和人才的欠缺,使得疾病問題始終困擾規模豬場。
本文利用2009年規?;i場的主要疾病動態進行總結,重點是以廣東、山東、河北、浙江、遼寧等省規模化豬場檢測和診斷結果案例,對血清學和病原學結果的相關數據進行分析,以了解主要疫病的流行動態,為規模化豬場的防疫工作提供參考。
通過橫斷面采樣的方法,分別檢測豬場后備以及1-2胎的青年母豬和4、7、10、13、16、20、24周齡生長育肥豬血清,通過ELISA方法(CIVTEST SUIS PRRS ELISA,HIPRA)監測血清抗體滴度,計算每個組的平均值,即可以了解豬場的血清學轉化動態。
需要指出的是,PRRSV ELISA抗體并不代表保護水平,目前常用的檢測試劑盒中,IDEXX主要是檢測核蛋白抗體,試驗盒主要是檢測全病毒抗體(主要是核蛋白),但是抗體檢測對于判斷種豬的狀態非常有幫助,特別是對于仔豬未接種疫苗的豬群,所以PRRSV ELISA抗體一方面可以了解種豬群是否全部接觸過PRRS病毒,而對于生長育肥豬,則可以通過抗體轉化時間的分析來了解豬場病毒循環的階段與時間,從而有效指導豬場疫病的防控。
圖1顯示了來自山東省5個規?;i場的PRRSV血清學變化動態,這5個場仔豬都未使用PRRSV疫苗,但是種豬都注射過疫苗。因此,生長豬的血清學轉化能反應出仔豬的感染動態,因為隨著母源抗體下降,PRRSV抗體值在7-13周降到最低,這說明這些豬場在保育后期和育肥前期發生感染,這也符合當前豬場感染的常見規律,有趣的是A2場,生長育肥豬全部為陰性,這一點從后備豬為陰性即可看到,而1-2胎的血清學陽性很可能是之前感染的結果,而并不存在病毒循環,也就是說,A2場接近于一個PRRS凈化場。在目前的環境下,能保持生長豬群全部為陰性是非常少見的,豬群的生長成績也非常優秀,而其他絕大多數豬場在16周時即已經100%感染。

圖1 山東省5個仔豬未免疫PRRSV疫苗豬場PRRSV血清學變化動態抗體滴度為各階段豬群ELISA抗體平均值(>20為陽性,CIVTEST SUIS PRRS ELISA, HIPRA)。
圖2顯示來自浙江省的3個規?;i場PRRSV血清學動態,這3個場種豬和仔豬都未使用任何PRRSV疫苗。分析可以看出,種豬,包括后備和1-2胎母豬都為陽性,表明所有豬群都接觸過PRRS病毒,如果豬群中所有母豬都接觸了豬場流行毒株,最終豬群將建立免疫力,從而切斷病毒循環。因此,這3個豬場的種豬都是穩定的,這也是藍耳病控制非常重要的環節。3個豬場仔豬都存在較高的母源抗體,到10-13周齡仔豬抗體水平降到臨界值以下,這也說明這3個豬場在10-13周齡前生長豬基本不存在病毒循環,也就是說不存在母豬-仔豬的病毒傳播。有趣的是B1和B2場,13-16周存在明顯的血清學轉化,這種感染明顯來自老齡生長育肥豬,但是20周齡時血清學為陰性,這是由于我們的采樣是采用橫斷面采樣方法。因此,造成這種結果是批次采樣的差異,這也說明豬群中存在陽性和陰性的“亞群”,病毒在這些亞群間緩慢循環,這一方面說明,豬場穩定好種群可以保證培育健康無感染的哺乳和保育仔豬,另一方面說明流程管理在PRRS控制中至關重要,這對于切斷病毒從老齡育肥豬向低齡豬傳播非常重要。
針對當前PRRS的感染壓力,多數豬場(>80%)都在仔豬階段使用了不同廠家生產的藍耳病弱毒活疫苗,免疫程序多數是在2-3周齡注射一次,由于藍耳病病毒的高度變異性。因此,疫苗的效果在不同豬場也千差萬別,部分豬場效果明顯,部分豬場用與不用差異不大,有些豬場應用疫苗甚至不太理想。這首先取決于疫苗毒株與田間感染毒株間的交叉保護作用;第二,取決于豬群的免疫狀態;第三,取決于豬群的繼發感染和管理水平;最后也與疫苗使用的時機相關。
注射疫苗后,不同豬場的血清學轉化時間和水平也有很大差異,使用不同的疫苗差異也較大,但無一例外,使用疫苗并不能阻止田間感染的發生。
圖3顯示來自山東省的5個仔豬免疫PRRSV疫苗豬場PRRSV血清學變化動態,在2周齡注射PRRSV弱毒活疫苗后,4周齡抗體并未持續下降,維持到10-13周,但是在13周后能觀察到血清學轉化,這很可能是田間感染和疫苗注射的綜合反應,當然確切的感染狀況還有賴于其他的檢測方法,比如可以通過RT-PCR等方法確定是否存在病毒循環。
圖4顯示的是山東省10個注射另一種PRRSV弱毒疫苗豬場的血清學變化動態,其結果與圖3中結果部分類似,有趣的是在2-3周齡注射疫苗并未檢測到非常明顯的血清學轉化,而多數豬場在7-10周出現明顯的血清學轉化,甚至有豬場到16周才出現血清學轉化,這種延遲的血清學轉化很明顯是田間感染的結果。更有趣的是,有部分豬場檢測不到血清學轉化,具體的原因還不太清楚,一方面可能是檢測試劑盒的差異,即檢測抗原與疫苗抗原間的差異,另一方面可能是疫苗注射受母源抗體的干擾。

圖2 浙江省3個未免疫PRRSV疫苗豬場PRRSV血清學變化動態??贵w滴度為各階段豬群ELISA抗體平均值(>20為陽性,CIVTEST SUIS PRRS ELISA, HIPRA)。

圖3 山東省5個仔豬免疫PRRSV疫苗豬場PRRSV血清學變化動態??贵w滴度為各階段豬群ELISA抗體平均值(>20為陽性,CIVTEST SUIS PRRS ELISA, HIPRA),紅色箭頭代表疫苗注射時間,藍色箭頭指示可能的感染時間。

圖4 山東省10個仔豬免疫PRRSV疫苗(H)豬場PRRSV血清學變化動態??贵w滴度為各階段豬群ELISA抗體平均值(>20為陽性,CIVTEST SUIS PRRS ELISA, HIPRA)。
藍耳病的防控仍然是當前規?;i場的難題,國外同樣如此,最重要的原因是PRRSV仍然是個“神秘的”病毒,雖然美國等開始采用過濾器來阻止病毒傳播獲得了成功,國內也有部分種豬場PRRS凈化卓有成效,但PRRS仍將是養豬業的重要威脅。
準確的診斷是藍耳病和其他所有疫病控制的前提,沒有診斷就沒有防控,包括血清學監測和病毒病原的分析和鑒定。

圖5 E1豬場偽狂犬病毒gE抗體陽性率分布

圖6 E2豬場偽狂犬病毒gE抗體陽性率分布

圖7 E3豬場偽狂犬病毒gE抗體陽性率分布
在這其中,管理與流程的控制尤為重要,通過以上23個豬場的分析,幾乎所有的豬場都存在病毒循環,無論是否用苗,也有極個別豬場,未使用任何疫苗有效地控制了病毒的循環,這些豬場的管理水平和流程控制都非常嚴格和正規。當然疫苗的應用尤其是弱毒活疫苗的確對于減輕病毒血癥,降低排毒,減輕臨床癥狀和經濟損失有幫助,但不要指望冰箱里會有“萬能的金鑰匙”,疫苗的應用必須結合生產管理。
當前豬場PRRSV從育肥豬感染保育豬和新轉群育肥豬是最常見的方式。因此,多點式的生產將極其有效切斷病毒循環,這也是溫氏、正大等大型養豬公司采用多點式生產取得成功的關鍵所在。另一方面,后備豬的管理是保持種豬穩定的重要環節,沒有培育好后備豬,就談不上種群的穩定。最后,繼發感染的控制對降低PRRSV感染的損失也相當重要,控制好支原體肺炎、鏈球菌病、副豬嗜血桿菌病將明顯改善豬群的健康狀況,提高生產效率。
偽狂犬病(Aujeszky’s disease,Pseudorabies)是當前我國豬場一種主要病毒性疾病,給感染豬場造成嚴重的經濟損失,引起種豬繁殖障礙、新生仔豬神經癥狀及高死亡率,同時也是豬呼吸系統疾病綜合征(PRDC)的重要原發性病原,偽狂犬病與藍耳病和豬瘟等病毒性感染在豬群的持續存在也是當前我國豬場豬病復雜的重要原因。對種豬場來說,除了經濟損失外,偽狂犬野毒呈陽性對于品牌和種豬貿易同樣帶來較大的負面影響,嚴重影響豬肉出口和種豬的銷售。高效“標記”偽狂犬病gE基因缺失疫苗和配套的gEELISA方法出現,為偽狂犬病的控制與凈化帶來了革命性的影響。目前歐盟大多數國家以及北美都已經成功凈化了偽狂犬病,國內也有近一半的規模化豬場偽狂犬凈化取得成功,這充分表明通過高效疫苗的強化免疫、科學而持續監測和嚴格的生物安全措施,在我國部分豬場、地區、省甚至全國范圍內凈化偽狂犬病完全具備可行性。
結果海博萊實驗室2009年的檢測結果,以3個豬場為例,分析偽狂犬病的流行規律。
圖5所示E1豬場在當前非常多見,具體表現為部分公豬帶毒,這會導致病毒通過配種過程感染母豬。此外,老齡母豬陽性率比較高,而新母豬未受感染,通常4周齡和7周齡的野毒來自母源抗體的可能性比較大,而由于仔豬的免疫水平不足,導致育肥后期感染。因此,24周齡時檢測到野毒抗體,這也是很多豬場重視母豬,忽視仔豬免疫的結果,部分豬場只免母豬,不免仔豬,或者種豬用高質量疫苗,仔豬用普通疫苗,這往往導致仔豬的免疫力不足,在10-13周母源抗體消失后,龐大的生長育肥豬群面臨極大的感染風險,育肥豬感染一方面會導致呼吸系統疾病,另一方面如果從后期選后備豬的話,將面臨較大風險,容易在豬場形成育肥豬-后備豬的感染循環。
圖6所示的E2豬場是一個野毒陽性率非常高的豬場,種豬的陽性率近60%,說明種豬面臨極大的感染壓力。因此,豬場存在繁殖障礙問題,公豬的陽性率也非常高,唯一可喜的是后備豬經過挑選,基本上為陰性,但是這些陰性的后備豬也面臨著來自經產母豬和公豬感染的風險。這種豬場偽狂犬控制與凈化的過程就比較復雜一些。
圖7所示的E3豬場,偽狂犬野毒的陽性率就比較低,而且主要集中在高齡母豬,13周齡的陽性很可能來自母源抗體,因為其13周齡以后未能檢測到野毒抗體。這種豬場能夠有效地切斷病毒循環,偽狂犬病的控制與凈化也比較容易實現,只需要將老齡母豬淘汰即可,所花的代價也相對較低。
免疫豬被豬偽狂犬病野毒感染后,通常野毒不能透過胎盤感染胎兒,僅能侵襲豬只的上呼吸道組織,免疫豬野毒排毒量大大減少,至少比非免疫豬少1 000倍以上,排毒期也可縮短4-7倍(《豬病學》第八版)。但是,感染的豬偽狂犬病野毒可以在三叉神經節等神經組織中潛伏,且當豬只受體內外各種因素的影響而活化時繁殖和排毒。這是免疫豬群中豬偽狂病野毒感染持續高水平陽性率的根本原因。但是,要想控制和凈化豬偽狂犬病就一定要設法預防或減少野毒的潛伏感染,凈化偽狂犬病對于疫苗的選擇非常關鍵,采用高效的偽狂犬疫苗對仔豬進行強化免疫可有效的降低豬場的野毒陽性率,這是因為高效疫苗的應用使帶毒種豬排毒量和排毒時間減少,而后備豬的免疫又加強了豬群的主動免疫力,通過豬群的胎次更新,從而有效地降低豬群的野毒感染。
圖8所示的為某大型規?;i場通過強化免疫海博萊偽狂犬疫苗(AUSKIPRA-GN),種豬一年4次普免,后備豬在配種前間隔一個月免2次,仔豬在滴鼻的基礎上于70日齡再注射1次,在短短的半年時間內,種豬的野毒感染陽性率由58.7%下降到26.7%,陽性率下降了近一半,由于加強了仔豬的免疫,從而切斷了育肥豬的感染途徑,種豬的免疫強度提高,使種群的感染壓力明顯下降,唯一不利的是陽性帶毒公豬的存在始終是潛在的傳染源。因此,需要采取果斷措施淘汰更新陽性公豬。
有關豬瘟的問題是個老生常談的話題,令人奇怪的是經過這么多年的免疫仍沒有徹底解決,近期甚至有卷土重來的勢頭,毫無疑問,在藍耳病多毒株感染的狀況下,如果再有豬瘟的存在,其損失是相當嚴重的。在2009年下半年的疫情中,很多豬場都由于PRRSV和豬瘟病毒的混合感染,導致保育豬、育肥豬甚至母豬的嚴重發病和死亡(圖9),經過RT-PCR檢測,無一例外都同時檢測到PRRSV包括高致病性PRRSV和豬瘟病毒(圖11,圖12)。
我們應用ELISA方法(CIVTEST SUIS HC/PPC, HIPRA),對部分規模化豬場豬瘟抗體進行了監測,現將河北省15個規?;i場各階段豬瘟抗體結果總結如圖12和圖13所示。
從這15個豬場豬瘟抗體結果看來,除1個豬場種豬出現令人奇怪的結果外,幾乎所有豬場豬瘟抗體都在臨界值以上。由于所有的豬場都注射了豬瘟疫苗,而ELISA抗體無法區分疫苗抗體和野毒感染抗體,抗體的監測只能作為評估疫苗免疫執行情況與反應性的一個參考,并不代表保護水平和診斷的依據。
將這15個豬場各階段的抗體值取平均值,發現在種豬群有一種奇怪的趨勢,即母豬的胎次越高,抗體水平越低,尤其是在6胎次以上的母豬表現得更為明顯,在連續幾年的監測中都注意到這種現象,其具體原因還不清楚。一種可能性是老齡母豬存在持續感染,導致免疫耐受,進而對疫苗注射無應答,我們曾經跟蹤分析這種抗體陰性母豬的后代,發現其仔豬也有可能對疫苗免疫無應答,帶毒的可能性比較大;另一種原因可能是母豬多次大劑量疫苗注射造成的免疫系統損傷;第三種原因是疫苗質量的原因,面對市場上琳瑯滿目的豬瘟疫苗,然而其質量的穩定與可靠性卻始終難以令人滿意,多數廠家陷于脾淋苗、細胞苗、組織苗的炒作,其實真正的是要下功夫提高疫苗的品質,提高原材料的質量,穩定疫苗病毒的代次,免疫原性,提升生產工藝。作者也相信,豬瘟疫苗仍大有提升的余地,大規模傳代細胞生產將是重要的發展方向,有利于疫苗的批次穩定性與質量的可靠性,而對于養豬生產單位來說,只要有真正質量可靠、品質穩定、服務一流、質高價高的豬瘟疫苗,豬場是不在乎花大價錢采購,這種疫苗的出現將是養豬產業的福音。

圖8 某規?;i場偽狂犬野毒感染控制進展。通過高質量gE基因缺失弱毒疫苗(AUSKIPRA-GN)強化免疫,種豬一年4次普免,后備豬配種前免2次,仔豬在初生期滴鼻免疫并在70日齡再肌肉注射1次,野毒陽性率由2008年11月58.7%下降到2009年4月的26.7%。

圖9 豬瘟和PRRSV混合感染導致嚴重的疫情和病變。

圖10 發病豬病原RT-PCR檢測結果。1. 分子量標準;2.3.4:經典PRRSV,2,樣品1,3:樣品2,4,陽性對照;5.6.7: 高致病性PRRSV,5:樣品1,6:樣品2,7:陽性對照

圖11 豬瘟病毒RTPCR檢測結果。1. 分子量標準;2. 樣品1;3.樣品2;4. 陽性對照

圖12 河北省15個規模化豬場豬瘟抗體監測結果
豬呼吸系統疾病還是當前豬場的主要形式,為多病原感染,診斷難,治療難,經濟損失大,這其中豬肺炎支原體感染引起的喘氣病是PRDC的核心病原,由此引起的肺部病變嚴重影響豬群生產性能,降低日增重,使得飼料轉化率變差,由此造成嚴重的經濟損失。不同豬場感染壓力明顯不同,以下以北方的河北省和南方的廣東省兩個非免疫為例分析感染動態。采用ESLIA方法(Oxoid)監測抗體,計算感染的陽性率。
河北省某豬場監測結果(圖14)表明,種豬幾乎都感染了肺炎支原體,胎次越高,陽性越低,這可能是因為種豬接觸過病原產生了免疫力,并隨著時間的推移,抗體逐漸消失,但是仔豬在生長育肥階段感染率較高,13周齡監測到血清學轉化,實際上感染的時間可能在7-9周,即保育后期。因此,與PRRSV的循環時間重疊,會導致嚴重的呼吸系統疾病。因此,豬場非常有必要在早期進行疫苗免疫以建立主動免疫力。
而圖14顯示的廣東某豬場肺炎支原體壓力非常高,70 d后感染率即接近100%。因此,呼吸系統疾病的危害程度更加嚴重,在這種豬場,更有必要在7 d和21 d免疫兩次豬肺炎支原體疫苗,同時由于母豬的帶菌率較高,也有必要結合仔豬使用枝原凈來降低種豬的感染水平,減少排菌量。

圖13 河北省15個規?;i場豬瘟抗體的平均值

圖14 河北省某豬場豬群肺炎支原體抗體監測結果

圖15 廣東省某豬場豬群肺炎支原體抗體監測結果
以上通過2009年對部分省市規?;i場監測結果的系統分析,了解了當前豬場主要疫病和流行動態,綜合表明當前豬場疫病的復雜性,但對于豬場來說,抓住疫病防控的關鍵點才能找到應對之策,管理第一位,疫病防重于治。如果豬場場長和獸醫鉆在豬病和藥堆里無法自拔的話,豬病會讓豬場束手無策,健康養殖的前提還是豬場管理水平的提高以及環境的改善,獸醫工作的重點是疫病的預防和流程的管理而不是忙于打針,豬病復雜的豬場往往都是管理漏洞較多的豬場,要想解決豬病先要解決豬場管理者和技術人員的思想問題和理念,只有給豬群創造適宜的環境,平衡的營養,科學的免疫程序和完善的生物安全體系,充分利用和整合各種資源,結合專業化的實驗室監測體系,從而保證豬場健康生產,也促進我國養豬業和諧發展。
(感謝丁永平、熊增祥、孫書林、董建國、魏可峰、張偉生、侯鋼、張京利、朱維彬、楊萍、劉立一、劉洪生、劉少球、彭培新、胡秋成、朱藝平、苗寶奇、張德明等同志在血清樣品和豬場信息采集中提供的支持)。