韓信草藥材質量標準研究

黃 蘅，陳學松

(廣西壯族自治區梧州食品藥品檢驗所，廣西 梧州 543002)

韓信草 Scutellaria indica Linn.為唇形科黃芩屬植物，具清熱解毒、活血止血、散郁消腫功效，用于治療肝熱煩躁、肺熱喘咳、跌打腫痛、外傷出血、毒蛇咬傷等。目前尚未見韓信草藥材的質量控制標準，筆者考察了韓信草的藥材性狀、顯微特征，并進行定性、定量研究，建立了該藥材的質量標準。現報道如下。

1 儀器與試藥

LC 2010型高效液相色譜儀(日本島津);AND GR-202型電子分析天平(日本)。野黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110842-200504);聚酰胺薄膜(浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠);甲醇(色譜純)，水(純化水)，其他試劑(分析純)。韓信草藥材分別購自廣西的梧州、賀州和玉林，經本所張濤主任中藥師鑒定為唇形科黃芩屬植物韓信草 Scutellaria indica Linn.的干燥全草。

2 方法與結果

2.1 藥材性狀和顯微特征

2.1.1 性狀

本品全草長10～25 cm，全體被毛，葉上尤多。根纖細。莖不分枝或多分枝，方柱形，表面灰綠色，被短柔毛。葉對生，葉片表面灰綠色或綠褐色，多皺縮，展平后呈圓形、卵圓形，長1～3 cm，寬0.8～2.5 cm，先端圓鈍，基部淺心形或平截，邊緣有鈍鋸齒，兩面密生細毛。葉柄長0.2～2.5 cm。總狀花序頂生，花偏向一側，花冠藍色，二唇形，長約1.5 cm，多已脫落。宿萼鐘形，萼筒背部有一囊狀盾鱗，呈“耳挖”狀。小堅果橫生，圓形，淡棕色。氣微，味微苦。

2.1.2 顯微特征(圖1)

莖的橫切面觀:表皮細胞1列，外被角質層。非腺毛較多，由1～5個細胞組成。4個角隅處的表皮內側有厚角組織。皮層為數列薄壁細胞，內皮層明顯。中柱鞘纖維斷續排列成環。形成層成環。木質部寬廣。髓部薄壁細胞較大，中部通常中空。

葉的表面觀:表皮細胞垂周壁波狀彎曲，上下表皮均具腺鱗和非腺毛，以下表皮為多，非腺毛1～5個細胞，腺鱗多由4～8個細胞組成。上表皮細胞稍大，非腺毛多為2～3個細胞，略粗短。下表皮非腺毛略長，以葉脈處為多，氣孔為直軸式和不等式。

2.2 化學鑒別反應

圖1 韓信草組織顯微特征圖

取本品粉末2 g，加80%乙醇30 mL，置水浴上回流30 min，趁熱過濾，即得供試品溶液。取供試品溶液1 mL，加鎂粉少許及濃鹽酸4滴，溶液漸呈紅色(黃酮類成分反應)。取供試品溶液1 mL，加1%三氯化鐵試液1滴，溶液呈墨綠色(酚類成分反應)。不同產地的5批樣品化學鑒別反應均呈正反應。

2.3 薄層色譜鑒別

取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的對照品溶液。吸取2.2項下的供試品溶液和對照品溶液各1 μL，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點(圖2)。

圖2 韓信草薄層色譜圖

2.4 有效成分含量測定(高效液相色譜法)

2.4.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Phenomenex C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇-水-乙酸(35∶61∶4);流速:1 mL/min;柱溫:35℃;檢測波長:335 nm;進樣量:10 μL。在此色譜條件下，對照品溶液與供試品溶液色譜峰保留時間一致，分離度好，理論板數大于1500(圖3)。

圖3 高效液相色譜圖

2.4.2 溶液制備

精密稱取野黃芩苷對照品8 mg，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質量濃度為80 μg/mL的野黃芩苷對照品溶液。取樣品粉末(過三號篩)約1 g，精密稱定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)提取至無色，棄去醚液，藥渣揮去石油醚，加甲醇繼續提取至無色，轉移至100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，精密量取25 mL，蒸干，殘渣用20%甲醇溶解，并轉移至25 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，作為供試品溶液。

2.4.3 方法學考察

線性關系考察:稱取野黃芩苷對照品10.20 mg，置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質量濃度為1.02 g/L的野黃芩苷對照品溶液。精密吸取該對照品溶液0.2，0.5，1.0，1.5，2.0 mL，分別置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，分別精密進樣10 μL，測定峰面積。以野黃芩苷峰面積(A)為縱坐標、進樣質量濃度(C)為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程 A=2.690×103C+9.719×102，r=0.9999(n=5)。結果表明，野黃芩苷進樣質量濃度在20.4～204 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:取同一對照品溶液，重復進樣，依法測定。結果峰面積的 RSD為0.5%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，分別于配制后 0，1，2，4，8，12 h時進樣測定。結果峰面積的 RSD為1.02%(n=6)，表明供試品溶液在12 h內穩定。

重復性試驗:取同一批樣品，按供試品溶液制備方法制備溶液6份，分別測定含量。結果平均含量為0.83%，RSD=1.66%(n=6)。

加樣回收試驗:取已知含量的樣品粉末(含量為0.83%)適量，分別精密加入一定量的野黃芩苷對照品，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 野黃芩苷加樣回收試驗結果(n=6)

2.4.4 樣品含量測定

取6批樣品，依法測定，按外標法計算含量。結果樣品中野黃芩苷的相對百分含量分別為0.83%，0.42%，1.05%，1.69%，1.38%，0.32%。

3 討論

根據性狀、顯微特征的描述，能較好地將韓信草與易混淆品種唇形科植物半枝蓮(狹葉韓信草 Scutellaria barbata D.Don)相區別[1-2]。化學鑒別是對韓信草中有效成分黃酮類和酚類的鑒別，該法可作為韓信草藥材的鑒別項目。薄層色譜鑒別結果表明，5批不同產地的韓信草樣品均能檢出野黃芩苷，斑點清晰且方法簡便、快速，故該法可用作韓信草藥材的定性鑒別。

野黃芩苷為韓信草的有效成分，具有清熱解毒、擴張心腦血管、改善體內微循環等作用[3]。參考2005年版《中國藥典(一部)》半枝蓮項下野黃芩苷的測定方法[4]，采用高效液相色譜法測定韓信草中野黃芩苷的含量，該法簡便、專屬性強，可作為韓信草藥材中野黃芩苷的含量測定方法。6批不同產地樣品含量差別較大，說明藥材生長過程中存在活性成分量的差異，可能與生長年限、生態環境的影響有關。

[1]肖培根.新編中藥志(第三卷)[M].北京:化學工業出版社，2002:77.

[2]付桂芳，楊蓮菊.半枝蓮及其混淆品的鑒定研究[J].中國中藥雜志，1997，22(5):262.

[3]國家醫藥管理局中草藥情報中心站.植物藥有效成分手冊[M].北京:人民衛生出版社，1986:946.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:77.